基因工程丁肝抗原的获取和鉴定

目的获取有生物活性的基因工程丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法合成人工编码的丁肝小抗原基因;以M48为载体,构建重组表达质粒;进行原核表达;以亲和层析纯化并以Western blotting和ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的表达质粒正确;SDS-PAGE电泳结果显示该蛋白与预期分子质量大小一致;Western blotting和ELISA结果显示该蛋白能与丁肝抗体特异性结合。结论成功获取了有生物活性的基因工程丁肝抗原蛋白,可以1∶1000稀释度作为包被抗原替代丁肝抗体诊断试剂成分,用于ELISA检测。

丁型肝炎病毒重组抗原的制备及应用

目的 :获得能够应用于丁型肝炎病毒 (HDV)酶免试剂的重组丁型肝炎病毒抗原。方法 :采用RT PCR自HDV感染急性期的土拨鼠肝脏扩增编码丁型肝炎病毒抗原的HDVcDNA ,插入质粒pET 3α ,转化大肠杆菌BL2 1,制备丁型肝炎病毒抗原表达菌株 ;对其表达蛋白的特异性、灵敏度、稳定性及活性进行鉴定 ;并将以该重组蛋白为主要原料制备的抗 HD酶免试剂与爱尔兰Noctech抗 HD试剂盒进行比较。结果 :重组质粒PED SHDAg和PED LHDAg经异丙基 硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达的 2种蛋白经SDS PAGE电泳后 ,WesternBlot检测显示均与抗 HD发生强烈反应。该表达蛋白对抗 HD阳性血清抑制率为 86 % ,37℃保存 7d稳定性良好 ,比活性为 1:80 0 0 ,检测抗 HD灵敏度与国外同类试剂盒结果一致。结论 :该重组丁型肝炎病毒抗原可用于抗 HD酶免试剂的制备。

丁型肝炎病毒抗原的表达纯化和抗原性分析

Amplified HDV fragment by RT-PCR was cloned into T vector and PQE_{31} plasmid, which established a prokaryotic expression vector in E coli M_{15} The recombinant protein was purified by Ni-NTA column affinity chromatography, and identified by Western blot and ELISA: HDV antigen was expressed efficiently and had a well antigenicity character. It can be used in HDV clinical diagnosis and epidemiology survey.

丁型肝炎病毒ORF5基因片段的原核表达及在ELISA中的初步应用

为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21(DE3),经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95%以上。将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料。

我国丁型肝炎病毒分子生物学和血清流行病学研究

本研究课题属国家“863”资助项目(863-102-14-3)获1995年卫生部科技成果二等奖。现将几年来我们研究的主要结果报告如下。丁型肝炎病毒是缺陷型单股负链RNA病毒。

我国丁型肝炎病毒分子生物学和血清流行病学研究

丁型肝炎病毒(HDV)感染呈全球分布,特别是在南美的一些地区,曾发生HDV的暴发流行,我国是乙型肝炎病毒感染高发区,人群中HBV感染率达58.4％。为了解我国HDV感染状况,研究我国HDV基因组特征以及在我国是否存在HDV亚型。

170例乙型肝炎患者血清中HD—Ag检测及意义研究

本文通过对１７０例乙型肝炎患者血清ＨＤ－Ａｇ的检测，发现ＨＤ－Ａｇ阳性２４人，阳性率１４．１％，在２４例ＨＤ－Ａｇ阳性血清中，ＨＢＶ复制率３３．３％，在１４６例ＨＤ－Ａｇ阴性血清中，ＨＢＶ复制率７２．５％，二者比较Ｐ〈０．０５，在各型肝炎患者中，ＨＤ－Ａｇ检出率无显著差异（Ｐ〉０．０５），提示：乙型肝炎患者合并丁胺病毒感染后抑制ＨＢＶ的复制。