(+)-丁香树脂酚通过NF-κB信号调节三阴性乳腺癌细胞生长和转移的实验研究

目的:探讨(+)-丁香树脂酚[(+)-Syringaresinol]对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞生长和转移的影响,分析其对核因子-κB(NF-κB)信号的影响。方法:根据(+)-丁香树脂酚处理浓度将MDA-MB-231细胞分为0μM组、2μM组、4μM组、8μM组、16μM组、32μM组、64μM组和128μM组。使用相应浓度的(+)-丁香树脂酚孵育各组MDA-MB-231细胞48 h。MTT法检测细胞增殖及(+)-丁香树脂酚半抑制浓度(IC50)值。Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。Transwell检测细胞迁移和侵袭。qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin mRNA相对表达量。Western blot检测NF-κB p65磷酸化水平。结果:与0μM组相比,2~128μM组的MDA-MB-231细胞的生长抑制率升高(P<0.05)。(+)-丁香树脂酚对MDA-MB-231细胞的IC50值为25.24μmol/L。与0μM组相比,2~128μM组的MDA-MB-231细胞的凋亡率升高,Bax mRNA相对表达量升高,Bcl-2 mRNA相对表达量降低,迁移和侵袭数量降低,MMP-2和MMP-9的mRNA相对表达量降低,E-cadherin mRNA相对表达量升高,N-cadherin和Vimentin的mRNA相对表达量降低,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:(+)-丁香树脂酚抑制了TNBC细胞的生长和转移并呈浓度依赖性,(+)-丁香树脂酚的抗TNBC作用可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。

HPLC法测定大青根中腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷的含量

目的:建立HPLC法测定大青根中腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷含量的方法。方法:采用Diamnosil ODS-C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为室温,进样量为10μl。结果:腺苷和丁香树脂酚葡萄糖苷线性范围分别为5～100μg·ml^(-1)(r=0.999 6),5～100μg·ml^(-1)(r=0.999 3);平均回收率分别为98.2%(RSD=1.08%,n=6)和98.4%(RSD=1.18%和n=6);样品平均含量分别为0.081,0.014 mg·g^(-1)。结论:本方法可用于大青根药材的质量控制。

HPLC法同时测定酸枣仁龙牡合剂中酸枣仁皂苷A和丁香树脂酚二葡萄糖苷含量

目的建立一种HPLC法同时测定酸枣仁龙牡合剂中酸枣仁皂苷A和丁香树脂酚二葡萄糖苷含量。方法色谱柱:AgilentZorbaxEclipseXDB-C18柱;混合流动相:流动相A为甲醇,流动相B为乙腈,流动相C为0.15mol/L磷酸二氢钠溶液,梯度洗脱;检测波长:223nm;流速:1.0ml/min;柱温:26℃;进样量:10μl。结果酸枣仁皂苷A和丁香树脂酚二葡萄糖苷分别在0.129~5.386μg/ml(r=0.9996)、0.106~3.452μg/ml(r=0.9995)内,线性范围良好;平均加样回收率分别为100.07%、100.22%,RSD分别为0.98%、1.09%(n=9)。结论本方法简单准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。

不同产地山合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷含量的比较

目的:建立HPLC法测定山合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷(SG)的含量,并比较不同产地山合欢皮中SG的含量。方法:色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(34∶66),流速1.0mL·min-1,检测波长210nm,柱温30℃。结果:SG在0.02～0.5μg范围内,r=0.9997(n=5);平均加样回收率为99.8%,RSD为1.7%,n=6。结论:本方法简便易行,准确可靠;不同产地药材中SG的含量差异明显。

采用大鼠单向肠灌流研究(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷吸收的影响因素

目的：考察（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（简称丁香树脂酚糖苷）在大鼠不同肠段的吸收动力学特征及相关影响因素。方法：采用大鼠在体单向肠灌流实验方法,考察p H值、药物浓度、不同肠段、P-糖蛋白（P-gp）等因素对丁香树脂酚糖苷的影响。结果：丁香树脂酚糖苷在空白肠灌流和不同p H（5.0~8.0）溶液中性质稳定。丁香树脂酚糖苷单用时在肠道中的吸收按十二指肠、空肠、回肠的顺序依次下降,其中在回肠中的吸收显著低于其他肠段（P〈0.05）;随着浓度的增加,各肠道的吸收速率常数（Ka）和肠道有效渗透率（Peff）有逐渐饱和的趋势;在与P-gp抑制剂维拉帕米联用后,其吸收显著增加（P〈0.05）。结论：该药在各肠段均有吸收,但在十二指肠中吸收较好;且其吸收与体内的转运蛋白P-gp有关系,与P-gp抑制剂联用后,吸收能显著增加。

4-O-丁香树脂酚合成工艺的改进

目的对4-O-丁香树脂酚的合成工艺进行改进。方法以丁香醛为原料,与丙二酸进行Knovevenagel缩合得到芥子酸,再将芥子酸用乙醇进行乙酯化得到不饱和酯、以Al H(Bu-i)2为还原剂将酯还原为芥子醇、芥子醇在光照通入空气的条件下经过氧化偶联得4-O-丁香树脂酚。结果芥子酸的合成中,将催化剂哌啶换成相同碱性的四氢吡咯,在大幅度缩短反应时间的条件下,该步反应产率也明显提高;酯的还原中将溶解性较差的氢化锂铝换成溶解性好的二异丁基氢化铝,以甲苯为溶剂进行还原,收率明显提高,且无需后处理,可直接投入下一步反应,总收率约51%。结论该方法工艺简单,有产业化前景。

流苏石斛中3种木脂素类成分的含量测定研究

【目的】建立流苏石斛中3种木脂素类成分的含量测定方法。【方法】应用高效液相色谱-电喷雾-离子肼质谱(HPLCESI-MSn)联用技术以及高效液相色谱(HPLC)保留时间定位结合紫外吸收光谱(UV)比对鉴定流苏石斛中的木脂素类成分。采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.8 mL·min-1,柱温为35℃,质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据。HPLC含量测定采用与MS分析相同的色谱柱,流动相甲醇+乙腈(V/V=1∶1)-0.01 mol/L乙酸铵溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温40℃,检测波长为215 nm。【结果】从流苏石斛中鉴定出丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚,含量测定结果显示丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚线性范围分别为0.1701~3.4020、0.1020~2.0400、0.0403~0.8060μg(r≥0.9995),平均加样回收率范围在97.71%~101.67%,相对标准偏差(RSD)均小于3.0%。10批样品丁香树脂酚双葡萄糖苷、丁香树脂酚单葡萄糖苷、丁香树脂酚的含量分别为0.7779~1.3852、0.0734~0.1966、0.0295~0.1882 mg·g-1。【结论】本研究方法可为流苏石斛的质量评价提供参考依据。

RP-HPLC法测定中药合欢皮中木脂素苷的含量

目的:建立中药合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷的 RP-HPLC 含量测定方法,考察了10个地区的商品药材中木脂素苷的含量。方法:高效液相色谱法,色谱柱为 Phenomenex PRODI-GY ODS(3)(100,250mm×4.60 mm,5μm),流动相:乙腈-0.04%磷酸水溶液(18:82),流速为1.0 mL·min^(-1),分析时间30 min。检测波长204 nm,进样体积:20μL。结果:(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷进样量与峰面积呈良好的线性关系,线性范围为:0.06～1.06μg,r=0.9998(n=5);回收率为96.1%～100%(n=9)。结论:本方法首次测定了全国10个地区的商品药材中(-)-丁香树脂酚-4-O-B-D-呋喃芹糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量,该方法快速,简便,重复性好。

苦楝皮的化学成分

目的对中药苦楝皮(Melia azedarachL.Sied.)体积分数为95%的乙醇提取物的乙酸乙酯部位化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离,利用理化性质和1H-NMR1、3C-NMR等谱学技术,对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从中分离得到6个化合物,其结构鉴定为羽扇豆醇(lupeol,1)、α-菠甾酮(-αspinasterone,2)、丁香树脂酚双葡萄糖苷(syringaresinol-di-O--βD-glucoside,3)、阿魏酸(ferulic acid,4)、β-谷甾醇(-βsitosterol,5)、胡萝卜苷(daucosterol,6)。结论化合物2、3和4均为首次从楝属植物中分离得到的已知化合物。

十雄角果木树皮的化学成分研究

通过溶剂提取法、正反相硅胶柱色谱和高效液相色谱等方法,从十雄角果木(Ceriops decandra)树皮的95%乙醇提取物中分离得到了6个单体化合物,并通过理化性质和波谱数据鉴定其结构,分别为:(-)-丁香树脂酚(1),(-)-松脂酚(2),β-谷甾醇(3),豆甾醇(4),棕榈酸(5)和3,4-二羟基苯甲酸乙酯(6).所有化合物均为首次从该植物中分离得到.

刺五加药理研究进展

一、调节机体对非特异性刺激反应性作用1.抗疲劳作用:刺五加根的提取物及刺五加总甙(eleutherosides)均有抗疲劳作用,总甙的作用比根的提取物强,也比人参提取物及人参总甙强,给小鼠灌胃刺五加浸膏20g(生药)/kg,游泳时间比对照组延长1/4,腹腔注射也有抗疲劳作用。给大鼠腹腔注射刺五加总甙15mg/kg,游泳后休息一个小时可消除全部氧债,而对照组大鼠耗氧量仍高于正常62％;从小鼠爬绳试验测得刺五加总甙有兴奋作用,抗疲劳作用。其兴奋作用单位为2000～8000,人参总甙为700～6600。强迫小鼠剧烈摆动(振荡)4小时,以产生疲劳状态,于摆动前灌胃刺五加水提物250、500、1000mg/kg。

桑叶中性部位一种化学成分分离鉴定

目的:利用现代色谱技术和光谱方法,研究桑叶中性部位的微量化学成分。方法:通过溶剂提取;采用硅胶、大孔吸附树脂、亲脂性凝胶(Lipophilic Sephadex LH-20)、制备液相等多种柱色谱方法分离化学成分;理化性质及UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR、MS及ESI-HR-MS等光谱技术鉴定结构,对桑叶中性部位化学成分进行了研究。结果:从中分离得到八个化合物,本文鉴定了其中一个为(+)-紫丁香树脂酚-O-β-D-葡萄糖苷。结论:化合物(+)-紫丁香树脂酚-O-β-D-葡萄糖苷为首次从桑属植物中分离得到。

中药白及化学成分的研究

目的 :研究中药白及的化学成分。方法 :用多种层析方法分离白及甲醇提取物 ,根据理化性质和光谱数据分析鉴定化合物的结构。结果 :分离并鉴定 4个化合物 ,分别是 β -谷甾醇 (β -sitosterol) (1) ;胡萝卜苷(dancosterol(2 ) ;丁香树脂酚 (syringaresinol) (3) ;咖啡酸 (caffeicacid) (4)。 结论 :化合物 2 ,3是首次从该植物中分离得到。

高效液相色谱法同时测定复方首乌藤合剂中3种成分的含量

目的用高效液相色谱法同时测定复方首乌藤合剂中3种指标性成分的含量,为质量控制提供依据。方法采用Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%磷酸（20：80）为流动相,流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长分别为320、204、360 nm。结果 2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在5.76~57.6μg·m L-1（r=0.9991）,（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷在2.496~24.96μg·m L-1（r=0.9999）,金丝桃苷在0.984~9.84μg·m L-1（r=0.9999）内线性关系良好,平均加样回收率均〉98%,RSD均〈3%（n=3）。结论该方法简便快速、准确可靠,可用于复方首乌藤合剂的质量控制。

多波长高效液相色谱法同时测定夜宁合剂中4种有效成分的含量

目的建立多波长HPLC梯度洗脱法测定夜宁合剂中（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷、女贞苷、特女贞苷和槲皮苷的含量。方法采用C18色谱柱（250 mm×4.6mm,5μm）;流速：1.2 mL·min-1;流动相A为乙腈-甲醇（1：2）,B为0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长：（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷为204 nm,女贞苷和特女贞苷为224 nm,槲皮苷为360 nm,柱温为30℃。结果 （-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷、女贞苷、特女贞苷和槲皮苷质量浓度分别在5.75~115.00μg·mL-1（r=0.999 7）、6.45-129.00μg·mL-1（r=0.9995）、5.30-106.00μg·mL-1（r=0.999 9）、8.45-169.00μg·mL-1（r=0.999 8）与峰面积线性关系良好;（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷、女贞苷、特女贞苷和槲皮苷的平均加样回收率分别为97.7%、96.8%、98.8%、98.2%,RSD（n=6）分别为1.5%、0.60%、1.1%、1.1%。结论该方法快速、灵敏、准确,可作为夜宁合剂的含量控制方法。

高效液相色谱法测定合欢磁牡口服液含量

目的：建立合欢磁牡口服液中（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（C_（33）H_（44）O_（17））含量的HPLC测定方法。方法：精密量取5 mL合欢磁牡口服液于100 mL容量瓶中,加入50%甲醇混匀并定容,滤过即得供试品溶液;高效液相色谱法测定,色谱柱：Analytical Uranus C_（18）（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈-0.04%磷酸溶液（18∶82）,流速：1.0 mL/min,柱温：30℃,时间：35 min,波长：204 nm,进样体积：20μL。结果：（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（C_（33）H_（44）O_（17））进样量与峰面积呈良好的线性关系,线性范围为0.24~4.8μg,R^2=0.999 98（n=7）,平均回收率为99.4%（n=6）,RSD为0.47%。结论：本方法简便、准确、重复性好,可用于测定合欢磁牡口服液含量。

大鼠肠道菌群对紫丁香苷体外代谢转化研究

目的观察大鼠肠道菌群对紫丁香苷的体外代谢转化作用。方法将紫丁香苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液分别培养O、4、8、12、24、48 h后取样,经正丁醇萃取后采用HPLC和LC-MS法对代谢产物进行定性和定量分析;扩大培养24h的孵育液经正丁醇萃取后,采用ODS柱色谱和重结晶方法分离制备代谢产物NMR法鉴定其结构。结果大鼠肠道菌群对紫丁香苷具有显著的代谢转化作用。在0~48 h代谢组的孵育液中共检测到2个代谢产物芥子醇（M_1）和右旋丁香树脂酚（M_2）。12h时有81%的紫丁香苷被代谢转化,24 h时紫丁香苷已经完全被代谢转化;并且检测到12h之前的主要代谢产物为M_1,24h后的主要代谢产物为M2,且24h后未能检测到M_1。结论在离体条件下,大鼠肠道菌群可以在24h内将紫丁香苷完全代谢转化为M_1,然后再将M_1代谢转化为M_2,且8~12h内转化紫丁香苷的速率最快。

基于HPLC指纹图谱及多成分定量对刺五加的质量评价

目的建立刺五加Acanthopanax senticosus HPLC指纹图谱及原儿茶酸、松柏苷、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷B1、刺五加苷E、丁香树脂酚7种成分含测定方法。方法采用Diamonsil 5μm C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长210 nm,柱温30℃,体积流量0.8 mL/min,进样量10μL。通过“中国色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版),建立了刺五加HPLC指纹图谱,同时测定了7种成分的含量。结合主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析和皮尔逊相关性分析对刺五加进行了质量评价。结果建立了刺五加HPLC指纹图谱,共确定了18个共有色谱峰;原儿茶酸、松柏苷、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷B1、刺五加苷E以及丁香树脂酚线性关系良好,r2均大于等于0.9991,平均回收率分别为92.51%、97.63%、95.11%、101.08%、105.29%、98.92%、85.44%、94.89%。主成分分析提取了2个主成分,其方差累积为66.920%,表明这2个主成分可包含原有数据的大部分信息;正交偏最小二乘法判别分析筛选出刺五加样品中2个差异性成分(紫丁香苷、刺五加苷B1);皮尔逊相关性分析显示紫丁香苷、绿原酸和刺五加苷B1与其他化学成分的相关性最强。结论建立的刺五加HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法简单、准确、重复性好,可用于刺五加的质量评价,为其质量控制提供依据。

合欢皮高效液相指纹图谱研究

【目的】建立合欢皮高效液相(high performance liquid chromatography,HPLC)指纹图谱的分析方法,以确立合欢皮中药材的质量评价方法。【方法】收集12批不同产地的商品药材,应用高效液相色谱法,建立合欢皮HPLC检测方法及指纹图谱。【结果】基于12批不同产地合欢皮的指纹图谱,标定了23个共有特征峰,同时指认了(-)-丁香树脂酚-4,4’-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素3个指标成分,并运用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)得到12批样品指纹图谱相似度,其均>0.95。【结论】该HPLC指纹图谱法准确可靠、重现性好,为较全面的评价合欢皮的质量提供了依据。