七彩神仙鱼催乳素基因的克隆、定位及表达分析

【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为,克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因,分析其在亲代抚育中的表达模式,为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基因组进行分析,鉴定出1个催乳素基因,命名为dfprl。基于dfprl基因的CDS区,设计克隆和PCR引物,通过RACE技术克隆获得dfprl基因全长,并利用生物信息学对dfprl基因进行结构分析,对其氨基酸序列进行理化性质和进化分析。对不同抚育阶段七彩神仙鱼的脑、性腺和皮肤进行转录组分析,探究dfprl基因在亲代抚育中的表达特征,并利用原位杂交技术对dfprl基因在七彩神仙鱼皮肤中的表达进行定位。【结果】dfprl全长为1282 bp,cDNA序列开放阅读框长度为639 bp,共编码212个氨基酸,5'-UTR为309 bp,3'-UTR为334 bp。dfprl蛋白存在PRL家族的典型结构域Hormone_1,dfprl蛋白与慈鲷科其他鱼类PRL蛋白相似性较高,与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应的氨基酸序列同源性最高、为96.70%。亲鱼进入抚育阶段后,dfprl在性腺和皮肤中的表达水平逐渐上升,抚育结束时表达水平下降。原位杂交结果显示,dfprl在皮肤粘液细胞中表达,且与七彩神仙鱼催乳素受体(dfprlr)表达位点重叠,在抚育早期阶段高表达。【结论】七彩神仙鱼dfprl基因高度保守,存在稳定的Hormone_1结构域。七彩神仙鱼dfprl基因在亲代抚育阶段的皮肤中高表达,且在亲代抚育阶段的皮肤粘液细胞中与dfprlr表达位点重合,表明dfprl可能通过作用于dfprlr进而促进七彩神仙鱼独特抚育行为的发生。

七彩神仙鱼BTN1A1基因克隆及其在嗜水气单胞菌胁迫下的表达分析

【目的】克隆七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)嗜乳脂蛋白1A1(Butyrophilin 1A1,BTN1A1)基因,分析其在病原刺激下的表达模式,为了解七彩神仙鱼BTN1A1基因功能提供依据。【方法】利用生物信息学对七彩神仙鱼2个BTN1A1基因(BTN1A1-1和BTN1A1-2)进行结构和进化分析。根据前期获得的七彩神仙鱼皮肤转录组数据,选取BTN1A1-1和BTN1A1-2基因的CDS区设计引物进行克隆。采用qRT-PCR分析BTN1A1在各组织中的表达及嗜水气单胞菌刺激下的表达模式。【结果】BTN1A1-1和BTN1A1-2的ORF序列长度为894、1275 bp,分别编码298、424个氨基酸。BTN1A1-1和BTN1A1-2蛋白均具有1个信号肽、1个Ig结构域、1个lg_like结构域和1个跨膜结构域的经典结构,BTN1A1-2还具有1个胞质结构域。七彩神仙鱼BTN1A1-1与慈鲷科其他鱼类相似性较高,与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)BTNIAI对应氨基酸序列同源性最高、为94.14%。但BTN1A1-2与其他鱼类发生分离,形成独特分支。BTN1A1-1和BTN1A1-2在七彩神仙鱼各组织中均有表达,但在鳃、肠道、皮肤等与免疫相关的组织中表达量相对较高。七彩神仙鱼BTN1A1-1在嗜水气单胞菌胁迫后表达量先显著下降后上升,而BTN1A1-2表达量则先显著上升后下降。【结论】七彩神仙鱼BTN1A1-1基因相对保守,而BTN1A1-2基因在进化上较为特殊。二者在免疫刺激下的差异表达暗示其可能在七彩神仙鱼免疫防御中发生功能分化。

野生型和人工选育全蓝型七彩神仙鱼群体的遗传多样性分析

【目的】研究七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)的遗传多样性,分析野生型和两种人工选育蓝色群体的亲缘关系和遗传差异,获得与体色形成相关的候选基因组区域及位点,同时为七彩神仙鱼分类系统的制订提供参考。【方法】对9尾野生型(WF)、8尾全蓝型(BF)和10尾白化蓝型(ABF)七彩神仙鱼个体进行全基因组重测序,获得单核苷酸多态性(SNP)位点,计算群体遗传多样性指标,分析群体遗传结构,进行群体间的选择消除分析。考虑SNP注释和突变率,结合PCR和Sanger测序,验证候选SNP。【结果】在3个七彩神仙鱼群体中共鉴定出1360293个SNP,PIC、Pi、Ho、He表明,野生型、全蓝型和白化蓝型的遗传多样性递减,选育群体的杂合度很低。系统发育进化树、群体结构分析和多态性位点主成分分析结果均显示,3个群体之间相互独立,且群体内部聚集明显。连锁不平衡衰减分析结果表明,白化蓝型群体承受着巨大的选择压力,其次是全蓝型群体。基于群体分化指数F_(ST)和Pi进行选择消除分析,结果表明,全蓝型群体的第3、12、13、18、20号染色体和白化蓝型群体的第1、16、18、19号染色体的较大区域内存在强烈的选择信号。在全蓝型群体和白化蓝型群体中分别鉴定出13个和9个候选SNP。【结论】3个七彩神仙鱼群体的遗传多样性较低,遗传关系显示出与人工选育进程的一致性。USP43、FGFR2、DENND4、MLL1基因可能与七彩神仙鱼体色形成密切相关。

丁酸梭菌对七彩神仙鱼生长、形体指标、营养利用和肠道结构功能的影响

为探讨丁酸梭菌对七彩神仙鱼生长、形体指标、营养利用和肠道结构功能的影响,在基础饵料中分别添加0(对照)、1×10^(4)、1×10^(5)、1×10^(6)、1×10^(7)和1×10^(8) cfu/g丁酸梭菌饲养幼鱼8周。结果显示,与对照组相比,丁酸梭菌对七彩神仙鱼生长和形体指标无显著影响。1×10^(5) cfu/g添加组鱼体粗蛋白含量增加,对蛋白质的消化率显著提高。丁酸梭菌显著提高了中肠肠道绒毛高度和宽度,且1×105 cfu/g添加组肠道酸性黏多糖分泌量显著增加。对于肠道消化酶和抗氧化能力,1×10^(5) cfu/g添加组胰蛋白酶活性显著提高,1×10^(6) cfu/g添加组丙二醛含量显著降低。肠道内容物短链脂肪酸分析显示,1×10^(5) cfu/g添加组的乙酸和丙酸含量显著高于对照组,且总酸含量在该添加组达到最大,显著高于其他组。研究表明,在本试验条件下,七彩神仙鱼饵料中添加1×10^(5) cfu/g丁酸梭菌可以改善肠道结构,提高肠道消化和抗氧化能力,增加肠道短链脂肪酸的分泌和营养利用率。本研究可为丁酸梭菌在七彩神仙鱼饵料中的科学利用提供参考。

卡拉胶对七彩神仙鱼生长、酶活性和肠道微生物组成的影响

为探究黏合剂卡拉胶对七彩神仙鱼生长、消化酶活性、抗氧化酶活性和肠道微生物组成的影响,在水温(28.0±0.5)℃下,将初始体质量(10.81±2.41)g的七彩神仙鱼饲养在80 L养殖缸中,每缸15尾,投喂添加3%、6%、9%、12%和15%卡拉胶的饲料,以投喂不添加卡拉胶的颗粒饲料和牛心汉堡为对照,养殖56 d。结果表明:3%卡拉胶组七彩神仙鱼质量增加率和特定生长率最高,胃蛋白酶活性和前肠淀粉酶活性显著高于其他组,肝脏丙二醛含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著低于其他试验组;12%卡拉胶组肝脏超氧化物歧化酶活性显著高于其他试验组。在肠道微生物组成的门水平方面,3%卡拉胶组变形菌门相对丰度显著高于其他组,梭杆菌门的相对丰度减少;在属水平方面,牛心汉堡组不含有乳球菌属,3%卡拉胶组罗姆布茨菌属相对丰度显著高于其他卡拉胶组,牛心汉堡组的鲸杆菌属相对丰度显著高于其他组。添加3%的卡拉胶能够提高七彩神仙鱼的质量增加率和特定生长率,显著提高胃蛋白酶和前肠淀粉酶活性,且不会造成氧化应激,肠道变形菌、罗姆布茨菌和乳球菌的相对丰度增加。在本试验条件下,七彩神仙鱼饲料中卡拉胶的适宜添加量为3%。

七彩神仙鱼β-胸腺素基因克隆及表达分析

为了探究胸腺素基因在七彩神仙鱼(Symphysodon aquifasciatus)中的特征、进化和功能,基于转录组序列比对及生物信息学的方法对七彩神仙鱼的胸腺素进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析,通过RACE技术克隆获得了七彩神仙鱼胸腺素基因全长,利用qRT-PCR技术研究其在各组织中的表达规律,通过病原感染实验,研究了七彩神仙鱼β-胸腺素基因在病原胁迫下的表达规律。结果显示,七彩神仙鱼的胸腺素基因鉴定为胸腺素β1型,命名为dfTβ。克隆结果显示,dfTβ的全长为779 bp,ORF区序列长度为303 bp,编码100个氨基酸,其5′-UTR为43 bp,3′-UTR为433 bp,含有22个poly-A。系统发育进化分析结果显示,七彩神仙鱼β-胸腺素同尼加拉瓜湖始丽鱼β-胸腺素聚为一簇。qPCR结果显示,β-胸腺素在七彩神仙鱼各组织中均有表达,其中在肠、皮肤、鳃中表达最高,在头肾和脾中表达最低。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,七彩神仙鱼皮肤、头肾、脾和肠中dfTβ均在短时间内显著上调,并随着时间出现先上升后下降的趋势,但各组织中上调倍数最高峰的时间不同。研究结果表明,dfTβ基因参与了七彩神仙鱼受病原刺激后的免疫应答,且表达模式不同,表明其可能在不同组织、免疫的不同阶段发挥不同的作用。

七彩神仙鱼工厂化养殖技术初探

为探究七彩神仙鱼工厂化养殖技术,在水温28~30℃的室内水泥池中开展了七彩神仙鱼养殖试验,放养的幼鱼全长1.5~2.0 cm,放养密度为200尾/m^(3)。经过约120 d养殖,试验鱼全长达9.0~10.0 cm,达到商品规格。结果表明,七彩神仙鱼每年可养殖3茬,平均成活率达87.8%,平均单位水体产出达175.6尾/m^(3)。工厂化养殖系统可全年生产运转,水质相对稳定,单位水体养殖密度较高。

七彩神仙鱼运输技术

为促进七彩神仙鱼产业发展,提高七彩神仙鱼运输成活率,确保运输过程中水质保持相对稳定、鱼体无损伤、交叉感染小,现基于七彩神仙鱼产品分级,在运输前准备、周转缸暂养、运输方法、运输后管理等方面,对七彩神仙鱼工厂化养殖后的运输技术进行总结介绍,以供广大七彩神仙鱼养殖者参考借鉴。

七彩神仙鱼工厂化养殖技术

七彩神仙鱼因其色彩鲜艳、体态优美而深受观赏鱼爱好者的青睐,近年来市场需求量呈现上升趋势。为促进七彩神仙鱼产业转型发展,本文以上海某七彩神仙鱼养殖场开展七彩神仙鱼工厂化养殖为例,从养殖设施配置、养殖水处理、放养前准备、苗种放养、投饵管理、水质管理、疾病防治、分级筛选和出池操作、周转缸管理和打包运输等方面总结了七彩神仙鱼工厂化养殖技术,以供广大七彩神仙鱼养殖者参考借鉴。

饲料中添加雨生红球藻对七彩神仙鱼生长、体色及抗氧化力的影响

为探讨雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）对七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）增色效果以及对机体抗氧化力的影响,分别用添加0（对照组）、3.33、6.66、9.99、13.32和16.65 g/kg雨生红球藻（折算成虾青素添加量分别为0、100、200、300、400和500 mg/kg饲料）的饲料饲喂七彩神仙鱼6周,测定七彩神仙鱼皮肤、鳍条、肌肉和肝脏中的虾青素含量、体表的三刺激值和肝脏总抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽（GSH）含量。结果显示：饲料中添加雨生红球藻可以显著提高七彩神仙鱼的增重率,当添加量为9.99 g/kg其增重率最大。七彩神仙鱼皮肤、鳍条、肌肉和肝脏虾青素含量随着雨生红球藻添加量的增加而升高,当雨生红球藻添加量超过6.66 g/kg,各组织中虾青素的含量趋于稳定。随着雨生红球藻添加量增加,皮肤L＊值（亮度）下降、而a＊值（红度）和b＊值（黄度）升高,皮肤中虾青素含量与三刺激值间的相关性均达到高度相关,并与a＊值的相关性最高。随着雨生红球藻添加量的增加,七彩神仙鱼肝脏的T-AOC和GSH的含量也逐渐升高。结果表明,在饲料中添加雨生红球藻可提高七彩神仙鱼的增重率,提高七彩神仙鱼皮肤虾青素含量,改善七彩神仙鱼体色,增强机体的抗氧化能力;雨生红球藻的添加量建议为6.66-9.99 g/kg（虾青素含量为200-300 mg/kg）。

立达霉对七彩神仙鱼卵水霉病的防治效果

【目的】探讨分析立达霉对七彩神仙鱼(Symphysodon aequfasciatus)受精卵水霉病的防治效果及其安全性,为鱼类人工孵化过程中水霉病的防治提供参考依据。【方法】采用倍比稀释法验证立达霉对水霉菌的体外抑菌效果,并利用水浴染毒法使七彩神仙鱼卵感染水霉菌,然后将其浸泡在不同浓度的立达霉溶液中,以孔雀石绿、无菌水为阳性对照和空白对照,观察不同药物处理对鱼卵发育的影响。【结果】8.0 mg/L立达霉和0.10 mg/L孔雀石绿即可明显抑制水霉菌丝生长。以8.0 mg/L立达霉分别浸泡受精36 h后和受精3 h内的七彩神仙鱼卵,鱼卵的水霉菌感染率和死亡率极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)降低,而孵化率明显提高。鱼卵组织切片观察发现,空白对照组的鱼卵结构较紧密,0.10 mg/L孔雀石绿组的鱼卵内部结构疏松、组织溶解破碎,8.0 mg/L立达霉组的鱼卵内部结构未发生明显变化。【结论】立达霉可有效防治观赏鱼类的水霉病,且不会对鱼卵产生明显毒害作用,生产推荐使用浓度为8.0 mg/L。

七彩神仙鱼胚胎及仔鱼发育研究

对七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciata)胚胎及仔鱼发育进行了研究,详细描述了发育各期的形态特征和所需时间.结果显示,七彩神仙鱼受精卵为红褐色粘性卵,在(29.0±0.5)℃时,孵化所需时间为52.5h.初孵仔鱼体长(3.52±0.19)mm,体高(1.27±0.07)mm,身体透明,头部粘附在产卵基上,尾部随着水流颤动.仔鱼出膜5d后亲鱼开始"奶子",到第13d基本发育完善.

黑格尔七彩神仙鱼摩氏摩根菌分离鉴定及耐药性分析

【目的】对患病七彩神仙鱼进行摩氏摩根菌(Morganella morganii)分离鉴定及药敏试验,为七彩神仙鱼养殖过程中摩氏摩根菌感染的临床诊断和科学用药提供科学依据。【方法】从患病野生黑格尔七彩神仙鱼体表分离病原菌,然后对其进行形态观察、生理生化指标测定及16S rDNA序列分析,并采用纸片扩散法(K-B)进行药敏试验。【结果】从患病野生黑格尔七彩神仙鱼分离获得一株优势菌株(DS2015),该菌为革兰氏阴性杆菌,其生理生化测定结果与摩氏摩根菌的相似度达100%。菌株DS2015的16S rDNA序列1208 bp(GenBank收录号KR866070),由基于16S rDNA序列构建的系统发育进化树可知,菌株DS2015与摩氏摩根菌聚为一簇,Bootstrap检验值为99;Biolog微生物自动鉴定结果也显示,菌株DS2015最具可能性为摩氏摩根菌。药敏试验结果表明,菌株DS2015对庆大霉素、新霉素、卡那霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、氯霉素、诺氟沙星、氧氟沙星和复方新诺明等抗生素高度敏感,对米诺环素中度敏感,对青霉素G、头孢氨苄、头孢拉定、四环素、多西环素、红霉素、克林霉素、万古霉素和呋喃唑酮等抗生素已产生耐药性。【结论】摩氏摩根菌可引起七彩神仙鱼身体发黑、皮肤大量分泌黏液及鳍条溃烂等症状,严重者甚至引起死亡,生产中可选用庆大霉素、新霉素、卡那霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、氯霉素、诺氟沙星、氧氟沙星和复方新诺明等抗生素进行防治。

饲料中脂肪含量对七彩神仙鱼幼鱼生长和消化的影响

在水温29.0±1.0℃下,将140日龄、体质量8～10g的七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciata)幼鱼放入室内54cm×40cm×28cm的水箱中,投喂以鱼粉和豆粕为蛋白源(粗蛋白45.0%)、以豆油为脂肪源配制的5种脂肪水平(10.21%、12.02%、17.17%、21.0%,和22.14%)的饲料。90d的饲养表明,七彩神仙幼鱼的成活率变化在96.67%～100.0%之间,各组间差异不显著(P>0.05)。随饲料中脂肪含量的增加,鱼的特定生长率(SGR)、蛋白质效率(PER)和增重率均先增加而后降低;摄食含12.02%脂肪饲料的鱼SGR、PER和增重率极显著地高于摄食含10.22%和22.14%脂肪饲料的鱼(P<0.001),而当鱼摄食含17.17%和21.05%脂肪的饲料时,SGR、PER和增重率与摄食含12.02%脂肪饲料的鱼差异不显著(P>0.05)。当饲料中脂肪含量为12.02%时,鱼对饲料中蛋白质的消化率最高;摄食含脂肪为10.22%、12.02%和17.17%的饲料时,对饲料蛋白的消化率差异不显著(P>0.05)。实验表明,七彩神仙鱼幼鱼饲料中适宜脂肪含量在12.02%～17.17%之间。

七彩神仙鱼人工繁殖主要水质条件的探讨

报道了不同硬度、酸碱度的水质对七彩神仙鱼性腺发育、产卵、授精及哺育幼苗的影响。结果表明 ,七彩神仙鱼性腺发育、产卵、授精和分泌“乳汁”哺育幼苗的水质最佳硬度为 2～ 3 .5°DH ,最佳pH值为 5 .5～ 6 .5。雄鱼繁殖时对水质条件的敏感度比雌鱼繁殖时更高。水质硬度提高到 5°DH以上或pH值提高到 7.0以上时 ,雄鱼几乎失去了对鱼卵的授精能力 ,而雌鱼仍能正常产卵受精。

七彩神仙鱼皮肤色素细胞观察及类胡萝卜素组分分析

观察了黄白、红点绿和红盖子七彩神仙鱼皮肤色素细胞的分布情况,并通过光谱、色谱和类胡萝卜素显色反应等方法分析了其皮肤类胡萝卜素的组成成分。黄白七彩神仙鱼体侧皮肤以黄色素细胞为主并有少量黑色素细胞,皮肤类胡萝卜素主要为黄体素;红盖子七彩神仙鱼体侧皮肤以红色素细胞和黄色素细胞为主,也有一定量的黑色素细胞和虹彩细胞;红点绿七彩神仙鱼在皮肤红色区又大量的红色素细胞、黄色素细胞和黑色素细胞,而在蓝条纹区有大量虹彩细胞和黑色素细胞。红点绿和红盖子七彩神仙鱼皮肤色素组成均为虾青素及其酯、角黄素、玉米黄素的酯及α-胡萝卜素。

4种常用药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验

选用4种常用药物对七彩神仙鱼进行急性致毒试验。根据24 h半致死浓度TLm24的大小来判断药物对七彩神仙鱼的毒性大小。结果显示,可将其由高到低排列如下:敌百虫>高锰酸钾>亚甲基兰>福尔马林。并根据TLm24及TLm48计算了各种药物的使用安全浓度。此4种药物的安全浓度分别为0.47、1.47、2.12和31.41 mg/L。

四种药物治疗七彩神仙指环虫病的对比试验

指环虫病是七彩神仙从稚鱼到亚成鱼均十分容易感染的一种传染性寄生虫病 ,利用四种药物在不同浓度条件下治疗七彩神仙幼鱼指环虫病 ,经过对比试验 ,发现泼洒 15 0mL/L的福尔马林病鱼死亡率最低 ,其次是泼洒 0 4mg/L敌百虫溶液。 0 4mg/L敌百虫对指环虫杀灭效果最好 ,但副作用较 15 0mL/L福尔马林大。用高锰酸钾及食盐溶液处理效果不明显。

七彩神仙的生物学特性研究

通过在水族箱中养殖和繁殖七彩神仙的试验,阐述了其主要外形和解剖学特征、习性、生长及繁殖生物学特性,讨论了养殖和繁殖过程中应注意的几个问题。