七氟烷预处理上调miR-199a-5p对脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究miR-199a-5p在七氟烷预处理大鼠脊髓缺血/再灌注损伤(SCIRI)中的作用。方法将24只SD大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、七氟烷+模型组(SEVO+I/R组)。Sham组给予同样的手术,但不吸入七氟烷或夹闭主动脉弓;I/R组无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再灌注,以建立SCIRI模型;SEVO+I/R组,建立SCIRI模型前吸入2.4%的七氟烷3 h。Basso Beattie Bresnahan评分法评价神经运动功能;TUNEL染色观察细胞凋亡情况;伊文思蓝(EB)测定血-脊髓屏障(BSCB)通透性;realtime qPCR检测miR-199a-5p含量;Western blot测定脊髓组织中caspase-9和Bcl-2水平。结果与假手术组比较,I/R组神经运动功能评分降低,细胞凋亡率增加,BSCB通透性增加,miR-199a-5p表达降低,caspase-9表达增加,Bcl-2表达减少;与I/R组比较,SEVO+I/R组神经运动功能评分增加,细胞凋亡率减少,BSCB通透性减少,miR-199a-5p表达增加,caspase-9表达减少,Bcl-2表达增加。结论七氟烷预处理可能通过增加miR-199a-5p,减少BSCB通透性及细胞凋亡,保护大鼠SCIRI。

七氟烷预处理减轻体外循环心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的探讨七氟烷预处理减轻体外循环心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法选取2017年1月—2018年12月在我院接受择期心脏瓣膜置换术的病人120例作为研究对象,随机分为对照组与预处理组。对照组接受常规麻醉,预处理组接受七氟烷预处理+常规麻醉。麻醉诱导前(T0)、体外循环(CPB)前即刻(T1)、CPB后即刻(T2)、CPB后24 h(T3),采集血清并检测心肌酶、炎性因子、氧化标志物的含量;T1、T2时,采集右心耳组织并检测炎症基因核因子-κB(NF-κB)、核因子-κB抑制因子(I-κB)及氧化应激基因烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)2、NOX4的表达量。结果T2、T3时,预处理组血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛(MDA)含量均明显低于对照组(P<0.05),总抗氧化能力(T-AOC)含量明显高于对照组(P<0.05);T2时,预处理组心肌组织中NF-κB、NOX2、NOX4的表达量均明显低于对照组(P<0.05),I-κB的表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论七氟烷预处理能够通过抗炎和抗氧化作用减轻体外循环后的心肌缺血再灌注损伤。

七氟烷预处理与后处理对大鼠离体心脏再灌注心律失常的影响

目的 探讨七氟烷预处理（SevoPC）与七氟烷后处理（SevoPoC）对大鼠离体心脏再灌注心律失常的影响。 方法 建立SD大鼠离体心脏灌注模型，将50只SD大鼠离体心脏 完全随机分为5组，每组10只：①时间对照组：离体心脏恒流灌注充分预氧合的KH液110 min；②I/RI组：离体心脏平衡30 min后，KH液停止灌注20 min，恢复恒流灌注预氧合的KH 液60 min，建立缺血再灌注（I/RI）损伤模型;③SevoPC组：离体心脏平衡15 min后，使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，建立I/RI损伤模型；④SevoPoC组：离体心脏平衡 30 min后，停止灌注20 min，在复灌即刻使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注 15 min，然后使用预氧合的KH液灌注45 min;⑤七氟烷联合处理组（PCPo组）：离体心脏平衡15 min 后，使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，停止灌注20 min，在复灌即刻使用含3％七氟烷饱和的KH液持续灌注15 min，然后使用预氧合的KH液灌注45 min。各组均持续监 测心率、左心室发展压（LVDP）、最大LVDP上升速率（＋dp/dt）、最大LVDP下降速率（-dp/dt）及左心室舒张末期压力（LVEDP）。检测心肌梗死面积和冠状动脉流出液中心肌肌钙蛋 白I（cTnI）水平并监测记录再灌注心律失常。分别用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测L型钙通道（LTCCs）、兰尼碱受体2（RyR2）以及钠钙交换体1（NCX1）的蛋白和基因转 录水平。 结果 与I/RI组比较，SevoPC组、SevoPoC组、PCPo组的离体心脏在再灌注30 min及60 min的LVDP、＋dp/dt、-dp/dt以及心率均升高，LVEDP均降低（均P＜0.05）。 SevoPC和SevoPoC均能减少由I/RI造成的心肌梗死面积［（17.9±2.1）%、（17.2±2.3）%比（23.8±2.1）%，P＜0.05］并减少cTnI的释放［（0.061 2±0.002 0）、（0.059 2±0.003 1）mg/L比（0.113 4±0.004 3）mg/L，P＜0.05］。与I/RI组相比，SevoPC和SevoPoC能够明显减少室性期前收缩的次数，缩短室性心动过速和心室颤动的发作时间，降低心室颤动 的发生率，并且能够降低再灌注心律失常评分（均P＜0.05）。SevoPC组RyR2的蛋白相对表达量明显低于I/RI组，SevoPoC组LTCCs、RyR2及NCX1的蛋白相对表达量均明显低于I/RI组 ，RyR2及NCX1的基因相对表达水平明显低于I/RI组（均P＜0.05）。 结论 SevoPC及SevoPoC均能够改善I/RI损伤后的心功能并能改善离体大鼠心脏的再灌注心律失常发生情况 ，其作用可能与其对LTCCs、RyR2及NCX1的抑制有关。

七氟烷预处理和miR-29b-3p对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤的影响

目的探讨七氟烷预处理和miR-29b-3p对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤(spinal cord ischemia/reperfusion injury,SCIRI)的影响及相关机制。方法通过夹闭主动脉弓14 min建立大鼠SCIRI模型。缺血/再灌注(IR)前将大鼠暴露于2.4%(1 Mac)七氟烷中1 h,建立七氟烷预处理模型。通过鞘内注射mimic质粒过表达miR-29b-3p。采用Tarlov评分、伊文思蓝(EB)、HE、TUNEL染色评估脊髓损伤;Real-time qPCR检测miR-29b-3p和BMF mRNA表达;Western blot测定凋亡相关蛋白BCL-2蛋白修饰因子(BMF)、Bax、和cleaved caspase-3表达。结果与假手术组相比,IR组Tarlov评分降低,血脊髓屏障(BSCB)通透性增加,健存运动神经元减少,凋亡细胞增多,miR-29b-3p表达减少,BMF、Bax、和cleaved caspase-3表达增加(P<0.05)。和IR组相比,七氟烷预处理或过表达miR-29b-3p时,IR大鼠的Tarlov评分升高,BSCB通透性降低,健存运动神经元增加,细胞凋亡率减少,miR-29b-3p表达增加,BMF、Bax、和cleaved caspase-3表达降低(P<0.05)。结论miR-29b-3p参与调控SCIRI;七氟烷预处理保护大鼠SCIRI,其机制可能与miR-29b-3p相关。

七氟烷预处理对1型糖尿病大鼠术后认知功能的影响

目的探讨七氟烷预处理对1型糖尿病大鼠术后认知功能的影响。方法取无特定病原体级SD雄性大鼠120只，根据随机数字表法，将大鼠分为对照组、手术组、七氟烷预处理组和正常组，各30只。前3组进行1型糖尿病大鼠造模成功，最后一组不进行造模。造模后，对照组仅给予戊巴比妥钠麻醉，不进行手术；手术组给予戊巴比妥钠麻醉后行剖腹探查术，手术时间30min；七氟烷预处理组给予吸入2．4％七氟烷30min，然后吸入空气30main，后续处理同手术组；正常组同七氟醚预处理组。统计并比较4组术前30min及术后1、3、7dMorris水迷宫实验逃避潜伏期和穿越原平台次数和应用酶联免疫吸附法测定4组术前30min及术后1、7d肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素1β（IL-1β）水平。结果七氟烷预处理组术前30min和术后1、3、7d逃避潜伏期长于正常组[（24．0±2．2）s比（20．2±1．8）s、（42．6±5．6）s比（32．5±3．0）s、（32．6±4．2）s比（26．2±2．6）s、（26．5±2．8）S比（24．8±2．0）s]，术后1、3、7d实验逃避潜伏期长于对照组[（24．0±2．4）、（23．6±2．2）、（24．4±2．3）s]、短于手术组[（70．6±5．8）、（46．8±5．1）、（34．5±3．6）s]；术后1、3d穿越原平台次数少于正常组[（6．8±3．0）次比（14．2±3．6）次、（10．2±2．5）次比（13．5±3．0）次]、对照组[（13．0±3．2）、（14．2±4．0）次]，术前30min和术后1、3、7d穿越原平台次数多于手术组[（14．0±2．8）次比（12．6±3．3）次、（6．8±3．0）次比（4．2±1．5）次、（10．2±2．5）次比（6．5±2．0）次、（15．2±3．5）次比（9．5±2．5）次]，差异有统计学意义（P〈0．05）。七氟烷预处理组术前30min和术后1、7dTNF-α和IL-1β水平均低于正常组、对照组和手术组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论七氟烷预处理可降低1型糖尿病大鼠术后认知功能障碍发生率。

七氟烷预处理对肺缺血再灌注损伤的保护机制

临床上肺叶切除、肺移植、心肺转流术、肺梗死、失血性休克等均涉及肺缺血再灌注损伤(LIRI)这一复杂的病理生理过程。七氟烷预处理通过炎症反应、Ca2+超载、氧化应激、肺表面活性物质、血红素氧合酶HO-1、核因子NF-κB和MAPK通路等机制发挥肺缺血再灌注损伤的保护作用。本文就近年来有关七氟烷预处理对LIRI的保护作用做一综述。

七氟烷预处理对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的观察七氟烷预处理对肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)患者肝功能、细胞因子及氧化应激水平的影响。方法 2016年1月至2018年1月丽水市人民医院择期行肝脏部分切除术的患者86例,随机分为观察组与对照组各43例。观察组采用七氟烷预处理,对照组给予七氟烷全程吸入。比较两组术前(T1)、术毕(T2)及术毕后1天(T3)、4天(T4)、7天(T5)时肝功能指标(ALT、AST)、血清细胞因子[缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、可溶性细胞黏附因子(sICAM-1)]和血清氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]水平。结果观察组ALT、AST、sICAM-1、MDA水平波动幅度在T3～5时小于对照组,HIF-1α、SOD波动幅度在T2～5时则大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟烷预处理可减轻HIRI患者的肝功能损伤、炎症反应和氧化应激反应。

七氟烷预处理对老年大鼠心肌线粒体敏感性钾通道的影响

目的:研究七氟烷预处理对老年大鼠心脏功能和线粒体形态结构的影响及其机制。方法:选取清洁级健康雄性SD大鼠60只,首先建立稳定的离体心脏灌注模型,经KH平衡液平衡15 min后随机将其分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、七氟烷预处理Ⅰ(SevoⅠ)组(0.5 Mac七氟烷)、七氟烷预处理Ⅱ(SevoⅡ)组(1.0 Mac七氟烷)、SevoⅠ+5-HD组、SevoⅡ+5-HD组,每组10只。比较平衡后,缺血前,再灌注5、15、30 min时的冠脉血流量(coronary flow,CF)、心率(heart rate,HR)、左室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)和左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)。观察灌注末胞浆膜下线粒体(subsarcolemmal mitochondria,SSM)、心肌纤维间线粒体(intermyocardial fiber mitochondria,IFM)的形态学变化。结果:再灌注5、15、30 min,SevoⅠ组与SevoⅡ组CF、HR、LVDP均高于I/R组(P<0.01),LVEDP均低于I/R组(P<0.01);SevoⅠ+5-HD组CF、HR、LVDP均低于SevoⅠ组(P<0.01),LVEDP均高于SevoⅠ组(P<0.01);SevoⅡ+5-HD组CF、HR、LVDP均低于SevoⅡ组(P<0.01),LVEDP均高于SevoⅡ组(P<0.01)。电镜结果显示,SevoⅠ组、SevoⅡ组心肌线粒体形态保存较好,但联合应用K通道抑制剂5-HD后(SevoⅠ+5-HD组、SevoⅡ+5-HD组),其保护效应消失。结论:七氟烷预处理可增加老年大鼠缺血心脏的CF,减轻缺血再灌注对心肌细胞线粒体的损伤,而K通道抑制剂5-HD可以取消七氟烷预处理对老年大鼠缺血心肌的保护作用。

钙调节蛋白对七氟烷处理再灌注心律失常的影响

目的:七氟烷对离体大鼠心脏再灌注心律失常的影响的探究。方法:在血流动力学稳定30min后,缺血20min,再灌注60min,建立缺血再灌注损伤模型。参考相关发表大鼠动物模型文献[1-2]将50只大鼠随机分成以下5组,每组10只:时间对照组(TC):用95%氧合KH液恒流在离体心脏内灌流110 min;缺血/再灌注组(I/RI):连续灌流95%氧合KH液30min后停止20min,恢复灌流60min;七氟烷预处理组(sevofluranepreconditioning,Sevo PC):离体心脏用95%氧合KH液灌流20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,停止20 min,恢复灌流60 min;七氟烷后处理组(sevofluranepostconditioning,Sevo Po C):离体心脏用95%氧合KH液灌流30 min,停止20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,恢复灌流50 min;七氟烷联合处理组(sevofluranepreconditioning and postconditioning,PCPO):离体心脏用95%氧合KH液灌流20min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,停止20 min,使95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,恢复灌流50 min。持续监测各组HR,左心室发展压力(left ventricular developed pressure,LVDP),最大LVDP上升率(+dp/dt),最大LVDP下降率(-dp/dt)。监测并统计再灌注心律失常发生率。LTCC、RyR2和NCX1的蛋白和转录水平分别通过Westernblot和RT-PCR进行检测。用荧光分光光度计检测并比较每组细胞中的钙离子水平。结果:七氟烷干预的三组大鼠在再灌注30min、60min后的心功能均有改善,表现为LVDP、+dp/dt、-dp/dt和HR的改善(P<0.05),LVEDP下降(P<0.01)。再灌注心律失常的发生可由SevoPC和SevoPoC改善,表现为室性期前收缩(ventricular premature beat,VPB)总数下降。室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)、心室颤动(ventricular fibrillation,VF)发作时程缩短,VF发生率下降,心律失常再灌注评分下降等。SevoPC组RyR2在转录水平的表达明显减少;在SevoPoC组中,转录水平的LTCC、RyR2、NCX1的表达和RyR2、NCX1的翻译水平均有较大幅度的下降。与TC组相比,I/RI、SevoPC、SevoPoC和PCPo组的细胞内钙水平分别增加了145%、88%、79%和65%(P<0.05)。结论:SevoPC和SevoPoc可以改善离体大鼠心脏再灌注心律失常的发生,机制可能与其对RyR2和NCX1表达的抑制作用有关。

七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血／再灌注损伤线粒体细胞色素C释放的影响

目的探讨七氟烷预处理对大鼠离体心肌缺血／再灌注损伤（ischemidreperfusioninjury，I／RI）时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响。方法40只SD大鼠应用随机数字表法随机分为4组（每组10只）：对照组（C组），0．75％、1．5％、3．0％七氟烷预处理组（s1、s2、s3组）。应用Langendofff离体心脏灌注模型，经主动脉用Krebs-Henseleit（K-H）液逆行灌注。各组均缺血30min，再灌注60rain。S1、s2、S3组在缺血前分别以含相应浓度七氟烷的K-H液灌注10rain，再冲洗5min，重复2次。记录平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30、60rain时的心功能指标。再灌注60min时用DNA原位末端缺口标记技术（terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabelling，TUNEL）测定凋亡细胞，提取心肌线粒体，免疫印迹法测定线粒体和胞浆的细胞色素c水平。结果与c组比较，S1、S2、s3组再灌注30、60rain时左室舒张末压（1eftventricularend—diastolicpressure，LVEDP）降低、左室发展压（1eftventriculardevelopedpressure，LVDP）升高（P〈0．05）；与c组比较，s1、s2、s3组凋亡率明显下降（P〈0．05或0．01），再灌注末心肌细胞凋亡率c、s1、s2、s3组分别为（33．10±2．57）％、（28．03±3．11）％、（25．20±3．04）％、（24．06±2．58）％；与c组比较，s1、s2、s3组心肌线粒体细胞色素c释放减少，胞浆细胞色素c的量明显降低（P〈0．05或0．01）。结论七氟烷预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素c释放到胞浆，降低心肌细胞凋亡率，减轻心肌I／RI。

七氟烷预处理对糖尿病大鼠离体心肌缺血-再灌注损伤的影响

目的观察七氟烷预处理对糖尿病(DM)模型大鼠离体心肌缺血-再灌注(I-R)损伤的影响。方法雄性SD大鼠64只,随机均分为四组:N组,非DM,I-R;NS组,非DM,I-R前七氟烷预处理;D组,DM,I-R;DS组,DM,I-R前七氟烷预处理。采用大鼠离体心脏Langendorff灌注模型,行全心缺血30min,再灌注60min。NS组和DS组于缺血前用2.4%七氟烷预充饱和的K-H液灌注10min,洗脱5min。记录各组平衡末及再灌注15、60min的心功能指标,TUNEL法检测再灌注15min心肌细胞凋亡,Western blot法半定量检测磷酸化和总丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt),再灌注末采用氯化三苯基四氮唑染色分析心肌梗死面积百分比。结果与N组相比,NS组再灌注15min心肌细胞凋亡减少,伴随磷酸化Akt表达增强(P<0.05),再灌注末心功能指标改善(P<0.05),心肌梗死面积减小(P<0.05)。D组与DS组间上述指标未见统计学差异(P>0.05)。与N组比较,D组基础心功能指标降低(P<0.05),而再灌注15min心肌细胞凋亡减少伴随磷酸化Akt表达增强,再灌注末心功能恢复增强(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05)。结论七氟烷预处理可以减轻非DM大鼠心肌I-R损伤;其在DM大鼠没有显示心肌保护作用,心肌Akt活化水平不能有效提高可能是其机制之一。

HIF-1α在七氟烷预处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)在七氟烷预处理减轻离体大鼠心脏缺血-再灌注(I-R)损伤中的作用。方法 84只雄性SD大鼠随机均分为七组:假手术组(Sham组)、I-R组、七氟烷预处理组(S组)、七氟烷预处理+二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG)组(S+D组)、七氟烷预处理+3-(5′-羟基甲基-2′-呋喃基)-1-苯基吲哚(YC-1)组(S+Y组)、DMOG组(D组)和YC-1组(Y组)。应用Langendorff离体心脏灌流装置建立大鼠心肌I-R损伤模型,连续测定心功能指标,并取心肌测HIF-1α及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平及HIF-1α目的基因的表达水平。结果与I-R组相比,S组、S+D组和S+Y组I-R损伤心功能的各项指标明显改善(P<0.05),HIF-1α表达水平显著升高(P<0.05),Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 HIF-1α促进七氟烷预处理对离体大鼠心脏I-R损伤的保护作用。