七氟醚后处理通过调节FTO/KCNJ2对缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨七氟醚后处理对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)获取心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)相关数据集GSE160516,将差异表达基因KCNJ2纳入本研究。采用qRT-PCR检测KCNJ2在H/R和七氟醚处理的心肌细胞中的表达。RIP实验验证KCNJ2和FTO的结合关系。分别采用MTT法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率,使用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒测定细胞的LDH释放量。结果七氟醚后处理可抑制H/R诱导的心肌细胞损伤。相对于Control组,H/R心肌细胞中KNCJ2表达下调,而七氟醚可提高H/R心肌细胞中KCNJ2的表达(均P<0.01)。相对于H/R组,七氟醚组细胞增殖活力提高、LDH释放水平和凋亡率下降,但七氟醚对H/R心肌细胞的保护作用能够被敲减KCNJ2部分逆转(均P<0.05)。FTO能够通过抑制KCNJ2的m6A修饰进而增强KCNJ2的表达;七氟醚可上调FTO的表达进而影响KCNJ2的稳定性和表达水平;敲减FTO能够抑制七氟醚对H/R心肌细胞的保护作用,而该作用可被KCNJ2过表达部分挽救。结论七氟醚后处理通过上调FTO/KCNJ2的表达对H/R诱导的心肌细胞损伤起保护作用。

七氟醚后处理对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞焦亡及TXNIP/NLRP3通路的影响

目的:基于硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路探究七氟醚后处理(SPostC)对缺氧复氧(HR)诱导的H9C2心肌细胞焦亡的影响。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将细胞分为4组:正常对照组(NC组)、HR组、HR+SPostC组、HR+SPostC+TXNIP/NLRP3通路抑制剂白藜芦醇组(HR+SPostC+RES组)。采用CCK-8检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞膜孔的形成;采用Western blot法检测细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18及TXNIP/NLRP3通路相关蛋白TXNIP、NLRP3的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TXNIP/NLRP3通路相关基因TXNIP、NLRP3的表达。结果:与NC组相比,其余3组细胞活力显著降低,而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显升高(P<0.05);与HR组相比,HR+SPostC组和HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05);与HR+SPostC组相比,HR+SPostC+RES组细胞活力显著升高(P<0.05),而LDH释放量、PI染色阳性率以及Caspase-1、IL-1β、IL-18、TXNIP和NLRP3的表达明显降低(P<0.05)。结论:SPostC可能通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路进而抑制HR诱导的H9C2心肌细胞焦亡。

七氟醚后处理对大鼠窒息性心脏骤停心肺复苏后全脑损伤的保护作用

目的评价不同浓度七氟醚后处理(SPC)对大鼠窒息性心脏骤停(CA)复苏后脑缺血损伤的保护作用。方法 80只健康雄性SD大鼠随机均分为五组:假手术组(S组)、模型组(C组)、0.5、1.0和1.5倍最低肺泡有效浓度(MAC)SPC组(P1、P2、P3组)。C、P1、P2和P3组建立8min窒息性CA模型,后给予心肺复苏抢救,并在复苏即刻给予间断吸入七氟醚2次,每次5min,间隔10min,确保浓度分别为1.25%、2.5%和3.75%。记录各组大鼠复苏后72h血糖值、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量、海马CA1区神经元形态学变化及海马区P53蛋白的表达,复苏后24、72h和7d的神经功能缺损评分(NDS评分),及复苏后7d至11d的大鼠空间学习记忆能力。结果P2、P3组复苏后血糖值、NSE值明显低于C组(P<0.05);S、P2、P3组海马CA1区存活神经元数量明显多于,p53蛋白表达明显少于C组(P<0.05);神经功能和空间学习记忆能力明显高于C组(P<0.05)。结论 1.0和1.5MAC浓度的SPC可以显著改善窒息性CA所致的大鼠全脑损伤。

七氟醚后处理对瓣膜置换术中血清肌钙蛋白T及IL-6、IL-8浓度的影响

目的观察七氟醚后处理对瓣膜置换术中血清心肌损伤标志物肌钙蛋白T(cTnT)及白细胞介素(IL)-6、IL-8浓度的影响,探讨其心肌保护作用。方法 24例拟行单瓣膜置换术的风湿性心脏病患者,随机均分为七氟醚组(S组)和对照组(C组)。两组采用相同麻醉及体外循环方法。S组在主动脉开放后即刻吸入5%七氟醚,呼气末浓度达1MAC后调整吸入浓度并维持1MAC10min,C组不吸入七氟醚。麻醉后即刻(T1)和主动脉开放后1h(T2)、2h(T3)、4h(T4)经桡动脉采血3ml,分别用电化学发光法和放射免疫法测定血清cTnT和IL-6、IL-8浓度。结果两组T2～T4时血清cTnT、IL-6、IL-8浓度均明显高于T1时,但S组明显低于C组(P<0.05)。结论七氟醚后处理能明显减轻瓣膜置换术中心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与抑制全身炎症反应有关。

七氟醚后处理对换瓣术患者炎性因子及心肌超微结构的影响

目的研究七氟醚后处理对心脏瓣膜置换术患者全身炎性因子和心肌超微结构的影响。方法经心肺转流(CPB)瓣膜置换术患者随机分为七氟醚后处理组(S组)与对照组(C组),每组15例。S组于主动脉开放即刻经CPB输氧装置以2%七氟醚后处理15min,C组不做此处理采取全凭静脉麻醉。测定手术开始时(T1)、主动脉开放后0.5h(T2)、3h(T3)、24h(T4)时血浆IL-6、IL-10浓度,电镜下观察心肌超微结构的变化。结果与C组比较,S组T2～T4时血浆IL-6和IL-10的浓度降低(P<0.05);与T1时比较,T2、T3时两组血浆IL-6与IL-10浓度升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理可以降低瓣膜置换术患者CPB后炎性因子的释放,减轻心肌超微结构的损伤,有利于心功能的恢复。

七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤海马血红素氧合酶-1蛋白表达的影响

目的探讨七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及血红素氧合酶-1(HO-1)在其中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠40只,体重230～270g,随机均分为五组:假手术组(C组),缺血-再灌注组(IR组),七氟醚组(S组),七氟醚+锌原卟啉IX(Znpp)组(SZ组)和溶剂对照组(SD组)。采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再回输的方法制备脑缺血-再灌注损伤模型,S组再灌注前5min气管插管,吸入1MAC七氟醚15min;SZ组模型制备前腹腔注射Znpp45μmol/kg,溶于二甲基亚砜(DMSO)0.5ml;SD组模型制备前腹腔注射DMSO0.5ml。所有大鼠再灌注24h后处死,取海马。光镜下观察各组海马病理学变化,检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和HO-1蛋白表达。结果与C组比较,其余四组SOD活性明显降低(P<0.05),MDA含量明显升高(P<0.05),SZ组HO-1蛋白表达差异无统计学意义,IR、S和SD组HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。与IR组比较,S组和SD组SOD活性和HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05),SZ组HO-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。光镜下S组和SD组海马病理学损伤较IR组和SZ组减轻。结论七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与七氟醚上调脑组织中HO-1蛋白表达有关。

非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注的影响

目的探讨非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注保护是否有叠加作用。方法成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组,假手术组(S组);缺血再灌注组(I/R组);非创性肢体远端缺血预处理组(NIPC组);七氟醚后处理组(Spo组);非创性肢体远端缺血预处理+七氟醚后处理组(NIPC+Spo组)。再灌注120min后检测CK-MB表达及心肌超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果与I/R组比较,NIPC组、Spo组和NIPC+Spo组CK-MB降低、SOD活性增加(P<0.05);与NIPC组和Spo组比较,NIPC+Spo组CK-MB水平减少、SOD活性增加(P<0.05)。结论非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理组对心肌缺血再灌注的保护有叠加作用。

七氟醚后处理对心脏瓣膜置换术患者心肌酶的影响

目的：探讨体外循环下七氟醚后处理对心脏瓣膜置换术患者心肌酶的影响。方法：30例体外循环下行心脏瓣膜置换术患者,女19例,男11例,体重40~70 kg,年龄25~65岁,ASA分级Ⅱ~Ⅲ级,随机分为对照组（C组）与七氟醚后处理组（S组）,每组15例。S组经体外循环于主动脉开放时以2%七氟醚灌入血液循环15 m in,C组不作以上处理,采用全凭静脉麻醉。分别于手术开始时（T1）、主动脉开放后0.5 h（T2）、主动脉开放后3 h（T3）、主动脉开放后24 h（T4）4个时点采集中心静脉血,提取上清置于EP管-20℃保存。检测血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白（cTnI）浓度,并记录两组患者血流动力学、体外循环时间、主动脉阻断时间、手术时间和术后使用多巴胺的总量。所有数据均作统计学分析。结果：两组患者围术期血流动力学指标均保持稳定。两组患者血清LDH、CK、CK-MB、cTnI水平均较术前显著升高（P〈0.05）;与C组相比,S组LDH在T4时明显降低（P〈0.05）,cTnI和CK在T3、T4时间点也明显降低（P〈0.05）,CK-MB在T2时点明显降低（P〈0.05）。结论：体外循环七氟醚后处理可以降低心脏瓣膜置换术患者心肌酶的释放,减轻心肌缺血再灌注损伤。

七氟醚后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤及对线粒体融合蛋白2表达和PI3K-Akt通路的影响

目的探讨七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用以及其对线粒体融合蛋白2(Mfn-2)的表达和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)通路的影响。方法将30只SD大鼠随机分为5组:S组、MIRI组、SP组、SP+W组、W组,每组6只。麻醉固定大鼠暴露心脏,除外S组,其余4组均结扎左前降支3 0 min,复灌1 2 0 min,SP组在复灌前1 0 min吸入2.3%七氟醚15 min,SP+W组在吸入前股静脉注射稀释的渥曼青霉素1 mL,W组则只在复灌前静注渥曼青霉素。结束后检测指标:ELISA法测cT n-I,蛋白免疫印迹法检测总Akt、P-Akt、Mfn-2的表达,电镜下观察心肌细胞形态学变化。结果各组总Akt接近,差异无统计学意义(P>0.05)。与S组相比较,其他各组cT n-I含量、P-Akt表达上调,差异有统计学意义;与SP组比较,MIRI组、SP+W组、W组cT n-I表达上调,P-Akt表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);MIRI组、SP+W组、W组组间cT n-I、P-Akt表达接近,差异无统计学意义。与S组相比较,其他各组Mfn-2表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);SP组与SP+W组Mfn-2表达差异无统计学意义(P>0.05),MIRI组与W组Mfn-2表达差异无统计学意义(P>0.05);与SP组、SP+W组比较,MIRI组与W组Mfn-2表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。电镜下显示S组无受损迹象,SP组明显较MIRI组、SP+W组、W组损伤减轻。结论七氟醚后处理通过下调Mfn-2表达进而激活PI3K-Akt通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。

去铁胺预处理联合七氟醚后处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨去铁胺(DFO)预处理联合七氟醚后处理(SPostC)对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法:采用Langendorff离体灌流装置建立I/R模型,缺血40 min,再灌注2 h。通过给予DFO预处理和(或)SPostC,观察各组再灌注末的心率、左室发展压(LVDP)、左室舒张末期压力(LVEDP)及左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)等血流动力学指标的变化,Western blot法测定心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平变化,电镜观察心肌线粒体超微结构,TTC染色法测定心肌梗死面积。结果:与对照组相比,其余各组心率、LVDP、+dp/dtmax均明显降低,LVEDP和心肌梗死面积均明显增加,HIF-1α、VEGF表达水平均明显上调(P均<0.05),线粒体结构有不同程度的破坏。与I/R组相比,DFO组、DFO+SPostC组LVEDP均明显降低,心率、LVDP、+dp/dtmax均明显改善,HIF-1α、VEGF表达水平均明显上调,心肌梗死面积均明显减少(P均<0.05),线粒体结构完整度明显改善。与DFO组相比,DFO+SPostC组LVEDP明显降低,心率、LVDP、+dp/dtmax明显改善,HIF-1α、VEGF表达上调,心肌梗死面积减少(P均<0.05),线粒体结构基本完整,略有肿胀。结论:DFO预处理联合SPostC可以减轻糖尿病大鼠心肌I/R损伤。

环孢素A对高糖状态下七氟醚后处理大鼠心肌细胞保护作用的影响

目的明确环孢素A(CsA)能否通过抑制线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,并维持线粒体形态恢复七氟醚后处理(SPostC)对高糖培养心肌细胞的保护作用。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分别在低糖与高糖浓度下培养48 h后接受缺氧复氧损伤。缺氧前给予CsA或者再灌注前给予SPostC,或二者联合应用,观察心肌细胞复氧后的死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)水平、线粒体形态改变及线粒体膜电位变化。结果 SPostC与CsA均降低了缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率,增加了缺氧/复氧损伤后的线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平(P<0.05),二者联合并未进一步增强保护作用。高糖(35 mmol/L)加剧了心肌细胞缺氧/复氧损伤,高糖浓度下,上述保护作用均消失。与高糖组相比,SPostC、CsA及二者联合均未能降低缺氧/复氧损伤后的LDH水平与细胞死亡率(P>0.05),线粒体平均面积/周长比与线粒体膜电位水平变化差异也无统计学意义。结论 CsA和SPostC均能够通过调节线粒体形态抵抗缺氧/复氧损伤,高糖时保护作用消失,联合CsA无法恢复其保护效应。

肿瘤坏死因子-α在七氟醚后处理减轻体外循环犬肺损伤中的作用

目的通过观察七氟醚后处理对体外循环（CPB）犬肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,探讨七氟醚后处理减轻CPB肺损伤的机制。方法健康杂种犬18只随机分为3组每组6只（n=6）：单纯手术组（A组）、体外循环缺血再灌注组（B组）、七氟醚后处理组（C组）。3组犬麻醉固定后行双腔气管插管机械通气。经胸骨正中切口开胸,B、C组建立犬体外循环单肺缺血再灌注损伤模型。C组在开放左肺动脉即刻通过人工膜肺给予呼气末2%七氟醚后处理30 min,A组只开胸不做其他处理。B、C组CPB前（T1）、开放左肺动脉后（T2）及实验结束时（T3）;A组与B、C组相同时间的3个时间点抽取股动脉血行血气分析计算氧合指数（OI）和呼吸指数（RI）;取左肺组织保存,HE染色光镜观察形态学变化;采用ELISA法检测肺组织TNF-α的含量。结果①肺功能指标的变化：3组内不同时点比较结果发现,A组各时点OI、RI未见明显改变（P〉0.05）,B、C组T1-T3时点OI逐渐降低,而RI则逐渐升高（P〈0.05）。3组间同时点比较结果显示,T1时刻,3组犬之间OI、RI无明显差异（P〉0.05）;T2、T3时刻,与A组比较,B、C组OI显著减低,RI则明显升高（P〈0.05）,其中C组在T_3时刻OI明显高于B组,而RI则相反（P〈0.05）。②肺组织光镜形态学观察：各组T_1-T_3时点,肺组织结构损伤逐渐加重。T_3时刻A组肺组织损伤程度较B、C组轻,而C组又明显较B组轻。③肺组织TNF-α含量的变化：3组内各时点比较结果显示,A组各时点肺组织TNF-α含量未见明显改变（P〉0.05）;B、C组T1-T3时点肺组织TNF-α含量逐渐增加（P〈0.05）。3组间同时点比较结果显示,T1时刻3组犬肺组织TNF-α含量无明显差异（P〉0.05）;T2、T3时刻,与A组比较,B、C组肺组织TNF-α含量明显增加（P〈0.05）,其中C组在T_3时刻TNF-α含量明显低于B组（P〈0.05）。结论CPB,后随着犬肺组织TNF-α含量的增加,肺组织结构破坏严重,肺功能降低,肺组织TNF-α含量的增加可能是加重肺损伤的重要原因。七氟醚后处理后肺功能明显改善,肺组织破坏程度减轻,对CPB犬肺损伤有一定保护作用。七氟醚后处理减轻CPB肺损伤的作用可能与抑制肺组织TNF-α表达有关。

七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤线粒体呼吸功能的影响

目的评价七氟醚后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时线粒体呼吸功能及酶活性的影响。方法雄性SD大鼠36只,随机分为3组(n=12),对照组(C)、缺血再灌注组(I/R)、七氟醚后处理组(S-post)。采用Langendorff制备心肌缺血/再灌注模型,离体心脏缺血40min,再灌注2h。七氟醚后处理组在复灌初15min灌注经3%七氟醚饱和的K-H液15min后续灌正常K-H液105min。记录各组平衡末(T1)及复灌末(T2)的心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压力(LVEDP)及左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)等血流动力学参数;取复灌末左心室心肌组织,用透射电镜观察心肌细胞超微结构的变化;用汉莎氧电极测定心肌线粒体3态呼吸(State3)、呼吸控制比(Respiratory Control Ratio,RCR)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶(NADH-OX)、琥珀酸氧化酶(Suc-OX)、细胞色素C氧化酶(Cytc-OX)等酶活性变化。结果高组内比较:T2与T1相比血流动力学、3态呼吸、RCR及酶活性变化有统计学意义(P<0.05)组间比较T1各组间血流动力学、3态呼吸、RCR及酶活性变化无统计学意义(P>0.05);T2对照组与其余两组相比血流动力学、3态呼吸、RCR及酶的活性变化均有统计学意义(P<0.05),S-post组与I/R组相比血流动力学、3态呼吸、R CR及酶的活性变化均有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚后处理能够有效保护大鼠缺血再灌注时心肌线粒体呼吸功能及Suc-OX、NADH-OX、Cytc-OX呼吸酶的活性,维持呼吸链电子传递及氧化磷酸化正常进行,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。

七氟醚后处理对成熟兔心肌缺血再灌注后IL-8、IL-10浓度及心肌组织超微结构的影响

目的研究七氟醚后处理对成熟兔心肌缺血再灌注后IL-8、IL-10浓度及心肌超微结构的影响。方法选32只新西兰成熟兔随机分为缺血再灌注组（I/R组）与七氟醚后处理组（S组）,每组16只。I/R组结扎冠状动脉前降支缺血30 min,再灌注240 min。S组结扎冠状动脉前降支缺血30 min,再灌注即刻吸入2.5%七氟醚30 min,洗脱10 min,再灌注持续至240 min。监测缺血前（T1）、再灌注后1h（T2）、2h（T3）、4h（T4）血浆IL-8、IL-10浓度,观察心肌超微结构变化。结果 T2~T4时两组IL-8、IL-10均高于T1时（P〈0.05）,两组组内T1时分别比较IL-8、IL-10,差异无统计学意义（P〉0.05）;S组T2~T4时IL-8表达明显低于IR组（P〈0.05）,而IL-10表达明显高于IR组。显微镜下S组超微结构损伤较I/R组轻。结论七氟醚后处理可抑制缺血再灌注后心肌致炎性介质IL-8的过渡表达,增强抗炎性介质IL-10的表达,调节致炎抗炎平衡,减轻缺血再灌注心肌超微结构的损伤。

七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用

目的观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法将符合标准的40片海马脑片随机均分为四组:2%七氟醚后处理组(2%Sev组)、4%七氟醚后处理组(4%Sev组)、6%七氟醚后处理组(6%Sev组)和氧糖剥夺损伤对照组(OGD组)。采用脑片灌注及电生理技术细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度。结果 OGD组OPS恢复程度为(3.14±2.56)%,恢复率为10%,组织损伤率为0.63±0.05;2%Sev组OPS恢复程度为(46.24±29.34)%,OPS恢复率为40%,组织损伤率为0.51±0.06;4%Sev组OPS恢复程度为(62.40±34.93)%,OPS恢复率为60%,组织损伤率为0.41±0.07;6%Sev组OPS恢复程度为(75.92±45.31)%,OPS恢复率为70%,组织损伤率为0.37±0.06。与OGD组比较,2%Sev组、4%Sev组、6%Sev组的OPS恢复程度和OPS恢复率均明显升高,组织损伤率明显降低(P<0.01)。结论七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤具有一定的保护作用。

远隔缺血预处理联合七氟醚后处理对大鼠心肌缺血-再灌注时TLR4/NF-κBp65的影响

目的评价远隔缺血预处理联合七氟醚后处理对大鼠心肌缺血-再灌注时的影响及其机制。方法成年雄性SD大鼠75只,体重250~300 g,成功建立Langendorff离体灌注模型的大鼠心脏之后,采用随机数字表法分为五组(n=15):对照组(C组)、缺血-再灌注组(IR组)、远隔缺血预处理组(R组)、七氟醚后处理组(S组)和远隔缺血预处理+七氟醚后处理组(RS组)。C组持续灌注150 min。IR组给予缺血-再灌注处理。R组给予远隔缺血预处理后,给予缺血-再灌注处理。S组给予缺血-再灌注处理,于再灌注初给予经2.4%七氟醚饱和的K-H液灌注2 min。RS组给予远隔缺血预处理后给予缺血-再灌注处理,于再灌注初给予经2.4%七氟醚饱和的K-H液灌注2 min。再灌注末,采用1%2,3,5氯化三苯基四氮唑测定心肌梗死体积百分比。采用ELISA法检测肌酸激脢同工酶(CK-MB),白细胞介素-8(IL-8),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。采用Western blot法测定Toll-样受体4(TLR4),高迁移率族蛋白B1(HMGB-1),髓样分化因子88(MyD88),人核因子κB抑制蛋白α(IKB-α),核因子-κBp65(NF-κBp65),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3),B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(BAX)的蛋白含量。采用HE染色观察心肌组织形态学变化。结果与C组比较,IR组、R组、S组和RS组心肌梗死体积百分比明显增加,CK-MB、IL-8、IL-6和TNF-α浓度,TLR4、HMGB-1、MyD88、NF-κBp65、Caspase3和BAX蛋白含量均明显升高,IKB-α和Bcl-2蛋白含量明显降低(P<0.05),心肌组织病理形态明显恶化。与IR组比较,R组和S组心肌梗死体积百分比明显减小,CK-MB、IL-8、IL-6和TNF-α浓度,TLR4、HMGB-1、MyD88、NF-κBp65、Caspase3和BAX蛋白含量均明显降低,IKB-α和Bcl-2蛋白含量明显升高(P<0.05),心肌组织病理形态明显改善。与R组和S组比较,RS组心肌梗死体积百分比明显减小,CK-MB、IL-8、IL-6和TNF-α浓度,TLR4、HMGB-1、MyD88、NF-κBp65、Caspase3和BAX蛋白含量均明显降低,IKB-α和Bcl-2蛋白含量明显升高(P<0.05),心肌组织病理形态明显改善。结论远隔缺血预处理和七氟醚后处理均可抑制TLR4/NF-κBp65信号通路和炎症反应,明显减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤。两者联合处理对心肌的保护作用明显优于单独处理。

七氟醚后处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨七氟醚后处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤过程中,缺氧诱导因子-1α/巨噬细胞移动抑制因子(HIF-1α/MIF)信号轴发挥的调控作用及相关作用机制。方法运用大鼠心肌细胞(H9C2)建立H/R损伤模型,分为空白对照组(NOR组)、缺氧/复氧组(H/R组)、七氟醚后处理组(SPostC组)、HIF-1α抑制剂组(YC-1组)。采用乳酸脱氢酶(LDH)及细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;活性氧(ROS)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)试剂盒检测细胞能量代谢;通过Western blot检测HIF-1α、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)和磷酸化AMPKα(p-AMPKα)的蛋白表达水平。结果(1)与NOR组和H/R组相比,SPostC组显著上调了HIF-1α的表达、抑制细胞凋亡、减少ROS生成、增加ATP含量和减少LDH含量,经比较差异具有统计学意义(P<0.05);(2)与H/R组相比,SPostC组和YC-1组中HIF-1α的表达水平分别与MIF和AMPK的蛋白表达呈正相关(P<0.05);(3)与SPostC组相比,YC-1组抑制HIF-1α的表达,MIF、AMPKα和p-AMPKα呈低表达,经比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚后处理通过上调HIF-1α/MIF信号轴对抗心肌细胞H/R损伤。

右美托咪定复合七氟醚后处理对糖尿病患者心肌缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨右美托咪定联合七氟醚后处理对糖尿病患者心肌缺血-再灌注损伤的影响。方法选择2019年6月至2020年12月拟在全麻下行心脏瓣膜置换术的2型糖尿病患者80例,男42例,女38例,年龄41~65岁,BMI 18~25 kg/m^(2),ASAⅡ或Ⅲ级,心功能NYHAⅡ或Ⅲ级,肝、肾功能正常。采用随机数字表法分为四组:七氟醚后处理组(S组)、右美托咪定组(D组)、右美托咪定复合七氟醚后处理组(SD组)和对照组(C组),每组20例。S组于主动脉开放时经体外循环机给予2%七氟醚15 min;D组于手术开始时予右美托咪定0.5μg·kg-1·h^(-1)持续泵注直至手术结束;SD组于手术开始时予右美托咪定0.5μg·kg^(-1)·h^(-1)持续泵注直至手术结束,于主动脉开放时经体外循环机给予2%七氟醚15 min;C组泵注等体积生理盐水且不使用任何吸入性麻醉药。分别于主动脉阻断前(T_(0))和主动脉开放后6 h(T_(1))、24 h(T_(2))、48 h(T_(3))采集中心静脉血样,检测血浆肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和肌钙蛋白I(TnI)、TNF-α、IL-6、NF-κB、血红素氧合酶-1(HO-1)的浓度,记录术中胰岛素使用、心脏起搏器置入、心脏自动复跳情况。结果与T_(0)时比较,T_(1)—T_(3)时四组血浆CK、CK-MB、LDH活性及cTnI、TNF-α、IL-6、NF-κB、HO-1浓度明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与C组比较,D组和SD组T_(1)—T_(3)时血浆CK、CK-MB、LDH活性及cTnI、TNF-α、IL-6、NF-κB浓度明显降低(P<0.05),SOD活性、HO-1浓度明升高(P<0.05),胰岛素使用率明显降低(P<0.05),心脏自动复跳率明显升高(P<0.05)。与D组比较,SD组T_(1)—T_(3)时血浆CK、CK-MB、LDH活性及cTnI、TNF-α、IL-6、NF-κB浓度明显降低(P<0.05),SOD活性、HO-1浓度明升高(P<0.05),心脏起搏器置入率明显降低(P<0.05),心脏自动复跳率明显升高(P<0.05)。C组和S组T_(1)—T_(3)时血浆CK、CK-MB、LDH、SOD活性及cTnI、TNF-α、IL-6、NF-κB、HO-1浓度以及胰岛素使用率、心脏起搏器置入率、心脏自动复跳率差异无统计学意义。结论右美托咪定可以减轻糖尿病患者心肌缺血-再灌注损伤,并恢复糖尿病患者的抗炎、抗氧化能力,复合七氧醚后处理可以进一步减轻糖尿病患者心肌缺血-再灌注损伤。

线粒体自噬在糖尿病因素影响七氟醚后处理心肌保护作用中的机制

目的探讨线粒体自噬在糖尿病因素影响七氟醚后处理心肌保护作用中的机制,为心肌保护提供新的策略.方法清洁级健康雄性SD大鼠32只,7~8周龄,体质量250~300g,采用数字表法随机分为4组(n=8),即非糖尿病缺血再灌注组(NI/R组)、非糖尿病七氟醚后处理组(NSP组)、糖尿病缺血再灌注组(DMI/R组)和糖尿病七氟醚后处理组(DMSP组).以高脂高糖饲养和腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病模型.采用结扎左冠状动脉前降支30min再灌注120min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,其中NSP组和DMSP组于再灌注前1min吸入七氟醚,维持呼气末浓度2.5%,持续5min.于再灌注120min后颈动脉采血取样,ELISA法测定血清肌钙蛋白(cTnI)浓度;采用1%2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;透射电镜下观察心肌细胞超微结构;运用Western blot法检测心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62和Parkin的表达.比较糖尿病因素与七氟醚后处理两者对心肌缺血再灌注损伤的影响.结果糖尿病大鼠组的心肌缺血再灌注损伤较非糖尿病大鼠组严重,七氟醚后处理组的心肌缺血再灌注损伤较非七氟醚后处理组轻微,糖尿病因素与七氟醚后处理组在心肌缺血再灌注损伤方面存在交互作用(P<0.05).与NI/R组比较,NSP组血清cTnI浓度降低,心肌梗死面积减少,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05);与NI/R组比较,DMI/R组血清cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05);与NSP组比较,DMSP组血清cTnI浓度升高,心肌梗死面积增加,心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Parkin的表达下调,p62的表达上调(P<0.05).结论糖尿病因素可以减弱七氟醚后处理的心肌保护作用,其机制可能与糖尿病大鼠的心肌线粒体自噬水平降低有关.

解偶联蛋白2在七氟醚后处理心肌保护作用中的机制研究

目的 探讨解偶联蛋白2(UCP2)在雄性小鼠七氟醚后处理(SPostC)心肌保护作用中的机制。方法 选取健康雄性小鼠45只,按照随机数字表法分为假手术组即sham组,在体建立缺血再灌注组即I/R组,在I/R组的基础上给予1MAC七氟醚的I/R+SPostC组,每组15只。测定3组小鼠主动脉内径和左室射血分数;采用TTC+Evans Blue染色法测定心肌梗死面积;HE染色法观察心肌组织结构;透射电镜下观察线粒体结构;活性氧试剂盒测定心肌细胞能量代谢。蛋白质印迹法检测3组UCP2蛋白表达水平。结果(1)I/R+SPostC组的主动脉内径和左室射血分数变化率低于I/R组(P<0.05)。I/R+SPostC组小鼠的心肌梗死面积小于I/R组(P<0.05)。(2)与sham组相比,I/R组小鼠心肌组织排列较紊乱,部分心肌纤维断裂,心肌细胞肿胀,空泡变性。与I/R组相比,I/R+SPostC组小鼠心肌组织排列紊乱、心肌细胞肿胀、心肌纤维断裂及炎细胞浸润程度减轻。(3)电镜下线粒体结构:I/R组肌丝溶解、断裂,线粒体肿胀;I/R+SPostC组线粒体结构优于I/R组,线粒体形态基本完整,轻度肿胀,肌丝少量溶解。(4)与I/R组相比,I/R+SPostC组ROS生成减少(P<0.05)。(5)与sham组相比,I/R组UCP2蛋白表达增高,I/R+SPostC组UCP2表达水平进一步增高(P<0.05)。结论UCP2蛋白的表达上调可能与SPostC减轻心肌缺血再灌注损伤的保护作用有关。