七筋菇自然居群的遗传结构分析

采用ISSR分子标记,对七筋菇（Clintonia udensis）17个居群的遗传多样性与遗传结构进行了研究。结果表明：七筋菇不同居群的多态位点百分率PPB为11.90%-59.52%,总的多态位点百分率PPB为98.8%,具有高的遗传多样性。Shannon多样性指数（0.6903）和基因分化系数（GST=0.6944）均揭示出七筋菇居群间存在明显的遗传差异,AMOVA分析结果也显示遗传变异主要发生在居群之间（81.47%）,而居群内部的遗传变异仅为18.53%。七筋菇居群间的遗传距离从0.1871-0.6632,平均为0.3838,大于同一物种居群间的平均遗传距离值（0.05）,同样表明七筋菇居群间的遗传多样性存在较大差异。七筋菇居群间的基因流Nm=0.2200,远远低于一般广布种植物的基因流（Nm=1.881）。Mantel检测显示居群间的遗传距离与地理距离之间没有显著相关性（r=0.029,P=0.3196）。七筋菇分布范围广以及其进化历史是其具有高遗传多样性的原因;居群间存在较高遗传变异可能是由于七筋菇本身的生物学特性、有限的基因流以及遗传漂变等原因造成的。

七筋菇植物ISSR-PCR反应体系研究

为建立适宜于七筋菇Cliatonia udensis Trautv．et Mey．ISSR—PCR分析的扩增体系，确定引物适宜的退火温度，利用正交试验设计，从Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶单位、引物浓度4种因素4个水平，对七筋菇ISSR—PCR反应体系进行优化。结果表明，根据Tm-5℃±5℃设定引物的退火温度梯度，确定出不同引物的最适退火温度。对引物873来说，其最适退火温度为53℃。按照正交试验设计，测试不同引物各因子之间在不同水平的组合情况，确定不同引物的最佳组合体系。引物897在第10组合反应最佳即3．0mmd·L^-1Mg^2＋；0．2mmol·L^-1d NTP；0．1μL Taq DNA聚合酶；0．2μmol·L^-1引物浓度。确定10μL的反应体系中，Mg^2＋为2．5—3．0mmol·L^-1，dNTP为0．15～0．20mmol·L^-1，引物浓度为0．20—0．25μmol·L^-1，Taq DNA聚合酶为0．1μL，模板DNA用量为50ng。适宜的退火温度为48—62℃。

七筋菇基因组DNA提取方法的比较研究

目的对七筋菇基因组DNA提取和ISSR-PCR扩增模板浓度进行优化。方法以常规的CTAB法为基础,对七筋菇基因组DNA提取进行了优化:提取液中加入PVP(6%(w/v)),β-巯基乙醇的浓度提高至5%(w/v);第一次抽提后,重新加入提取液及抗坏血酸(20%(w/v)),65℃水浴30 min。结果所提样品DNA,A260/280,A260/230的平均光吸收值分别为1.78,1.99,浓度为105 ng/μL左右,ISSR扩增带多且清晰明亮,稳定性及多态性高,表明DNA纯度高;对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板稀释2倍效果最好(浓度为50 ng/μL)。结论改良后的CTAB法适于提取七筋菇植物的基因组DNA。

七筋菇种群的克隆多样性及其与生境因子的相关性分析

利用ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)分子标记检测了七筋菇种群的克隆多样性,同时对克隆多样性指数与生境因子进行了相关性分析.结果表明,种群和种水平上每个基因型含有的个体数(克隆分株)分别为1.12和1.149,16个种群均为多克隆种群.检测到的基因型100%为局部分布,群体间的克隆分化较大.七筋菇种群的克隆多样性很高,Simpson指数平均为0.975.基株分布为游击型的克隆构型.由基株数据计算的种群遗传多样性与由分株计算的结果一致,进一步确认了不同七筋菇种群间存在着遗传分化.种群中不时的幼苗更新及自交不亲和,可能是维持七筋菇种群内基因型多样性的重要原因.相关性分析表明,Simpson指数与样地土壤中的酸碱度pH值呈显著的正相关(P<0.05),与其他环境因子的相关性不显著.