七龙天对实验性肺动脉高压大鼠ET-1、NOS的影响

目的:观察七龙天对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠内皮素-1(ET-1)、血管内皮细胞一氧化氮合成酶(NOS)的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组(A)、模型组(B)、波生坦组(C)、七龙天低剂量组(D)、七龙天中剂量组(E)、七龙天高剂量组(F)。A组大鼠置于正常环境中饲养,B、C、D、E、F组均造模。采用常压低氧法制模,从制模第1天始给药,连续3周,A、B两组均给予蒸馏水3 m L/(只·d)。在直视下行右心导管术测定肺血流动力学参数,及RT-PCR法检测肺组织中NOS、ET-1 mRNA表达。结果:七龙天及波生坦均可明显降低大鼠肺动脉高压,且以七龙天高剂量组效果为佳,疗效呈药物剂量依赖表现。各组NOS、ET-1表达量与肺动脉压具有相关性,但二者在高剂量七龙天调节至正常范围时,肺动脉压仍未恢复正常水平。结论:不同剂量七龙天均可降低肺动脉高压,且高剂量七龙天疗效优于波生坦。其降压机制与降低NOS及ET-1表达量有关,但仍可能受其他炎症因子及血管新生因子影响。

七龙天对实验性肺动脉高压大鼠ET-1、LTC4的影响

目的观察七龙天对实验性肺动脉高压(PAH)大鼠内皮素1(ET-1)、白三烯C4(LTC4)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组(A)、模型组(B)、硝苯吡啶组(C)、七龙天低剂量组(D)、七龙天中剂量组(E)、七龙天高剂量组(F)。空白对照组大鼠以等量0.9%NaCl溶液腹腔注射,其余各组均以野百合碱(MCT)腹腔注射复制PAH模型造模。制模后14天开始,各组分别定时灌胃给药,每日1次,连续给药8天至检查前12h停药。以改良右心导管术测定肺血流动力学参数,用放射免疫(RIA)法测定血浆ET-1,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清LTC4的变化。结果与A组比较,其余各组大鼠PASP、PADP、MPAP、ET-1、LTC4水平较空白对照组均有所升高,且B组升高最显著(P<0.01);与B组比较,C、D、E、F组均可降低大鼠PASP、PADP、MPAP、ET-1水平(P<0.05,P<0.01);与C、D组比较,E、F组大鼠PASP、PADP、MPAP、ET-1水平降低更明显(P<0.05);各用药组对LTC4的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论七龙天能够有效降低实验动物的肺动脉压,其机制与降低ET-1含量有关。

七龙天对肺动脉高压大鼠的MPAP、wW、RV/LV+S的影响

目的观察七龙天对实验性肺动脉高压(PAH)大鼠的平均肺动脉压(mPAP)、肺湿质量(wW)、右心肥厚指数(RV/LV+S)的影响。方法选择雄性SD大鼠,以野百合碱(MCT)腹腔注射复制PAH模型,选择硝苯吡啶为阳性对照药,以改良右心导管术测定肺血流动力学参数,称取wW,测算RV/LV+S。结果七龙天和硝苯吡啶均能降低PAH大鼠的mPAP、wW及RV/LV+S的水平。七龙天中、高剂量组作用优于阳性对照药组。结论七龙天能够有效降低实验动物的肺动脉压,可减轻肺渗出,部分逆转右心室肥厚。

云药七龙天对缺氧大鼠动脉血气及肺小动脉重构影响

目的:观察"七龙天"对缺氧大鼠动脉血气及肺小动脉血管壁重构影响。方法:将SD大鼠40只随机分为5组,即正常对照组、模型对照组、七龙天低、中、高剂量组,每组8只,以常压低氧法制备大鼠缺氧模型。于制模第1天始灌胃相应药物,连续3周。腹主动脉采血行血气分析;行肺组织病理切片,观察大鼠肺小动脉血管壁重构情况:测算血管壁厚度、管壁占血管半径百分比(WT%)、血管壁面积、血管壁面积占血管面积百分比(WA%);结果:与正常对照组比较,各模型组大鼠血气分析无显著性差异(P>0.05);与正常对照组比较,各模型组大鼠肺小动脉血管壁厚度、WT%、血管壁面积及WA%均显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,七龙天干预各组可降低上述指标水平,以七龙天中、高剂量组为显著(P<0.05)。结论:七龙天可显著抑制缺氧诱导的大鼠肺小动脉血管壁的重构。

云药七龙天治疗肺胀探析

肺胀是在肺气亏虚的基础上,痰湿内生,感受外邪引触而发病,病机为本虚标实,虚实夹杂,急性发作期以外邪、痰浊、瘀血为主,稳定期以脾肾亏虚为主,治以补虚扶正、健脾化痰、活血祛瘀。七龙天由三七、地龙、红景天组成,具有益气扶正、化瘀通络、消痰平喘之效,既能补虚扶正治疗本虚,又能化瘀消痰平喘治疗标实,用于治疗肺胀,疗效较好。

七龙天对实验性PAH大鼠肺血流动力学的影响

目的:探讨七龙天对实性PAH大鼠肺血流动力学的影响。方法:选择雄性SD大鼠,以野百合碱腹腔注射复制PAH模型,选择硝苯吡啶为阳性对照药,以改良右心导管术测定肺血流动力学参数。结果:七龙天可降低PAP,并呈剂量依赖方式,其整体效用优于阳性对照药(P<0.05)。结论:七龙天化瘀通络、消痰平喘、益气扶正,具有双向调节凝血机制、抗炎、免疫调节、耐缺氧等作用,可直接降低PAP、改善缺氧状态、改善瘀的状态,在肺心病肺动脉高压防治方面极具研发价值。

云药七龙天对缺氧大鼠动脉血气及肺组织中血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的观察七龙天对缺氧大鼠动脉血气及肺组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,为探寻云南民族医药防治慢性缺氧性肺病的有效手段提供实验依据。方法将SD大鼠40只随机分为5组,即正常对照组、模型组及七龙天低、中、高剂量组,每组8只,除正常对照组以外均以常压低氧法制备大鼠缺氧模型。给药组分别于造模第1日始灌胃相应剂量的七龙天,连续用药3周。腹主动脉采血行血气分析,采用蛋白免疫印迹法检测肺组织中VEGF的蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠血气分析比较差异无统计学意义(P>0.05),VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,七龙天中、高剂量组大鼠VEGF的蛋白表达水平明显降低,以高剂量组最为显著(P<0.05)。结论七龙天可显著抑制缺氧诱导血管新生形成。

七龙天胶囊质量标准实验研究

采用薄层色谱法（TLC）对七龙天胶囊中的地龙进行定性鉴别，结果表明，地龙对照药材在与供试品的薄层色谱相应位置上，有相同颜色斑点，阴性对照无干扰．另采用高效液相色谱法（HPLC）测定处方中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1及红景天苷的质量分数，结果显示，三七皂苷 R1在0.178～3.560μg、人参皂苷 Rb1在0.430～8.600μg、人参皂苷Rg1在0.539～10.780μg、红景天苷在0.206～4.120μg范围内与峰面积值呈良好线性关系（r分别为0.9997，0．9998，0.9997，1.0000，n ＝6）．平均加样回收分别为97.82％（RSD＝1.28％），97.92％（RSD＝1.62％），97.07％（RSD＝0.82％），96.58％（RSD＝1.45％）．TLC法及HPLC法操作简便、准确、重复性好，可对七龙天胶囊进行质量控制．

云药七龙天对慢性阻塞性肺病大鼠Nrf2和DJ-1调控作用研究

目的观察云药七龙天对慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠Nrf2和DJ-1的影响。方法60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药对照组、七龙天低、中、高剂量组,每组10只。采用气管注入脂多糖加熏香烟方法诱导COPD模型,正常组注入生理盐水。七龙天低、中、高剂量组分别灌胃给予七龙天0.35、0.7、1.4 g/kg,阳性对照组灌胃孟鲁司特片13 mg/kg。分别检测各组大鼠肺泡灌洗液中有核细胞数、肺功能指标、血清和肺组织匀浆中的Nrf2和DJ-1水平。结果与正常组比较,模型组肺泡灌洗液中有核细胞数显著增加(P<0.05),肺功能减弱、血清和肺组织匀浆中的Nrf2和DJ-1水平降低(P<0.05);给予七龙天药物治疗后,大鼠肺功能改善,Nrf2和DJ-1水平逐渐升高,并呈现出剂量依赖性。与模型组比较,七龙天中、高剂量组血清Nrf2和DJ-1的水平增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论七龙天可以通过调节Nrf2和DJ-1水平改善机体氧化应激平衡,从而对COPD大鼠具有一定的治疗作用。

网络药理学预测结合实验验证探讨七龙天胶囊治疗急性肺损伤的机制

基于网络药理学预测和体外细胞实验验证探讨七龙天胶囊治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用机制。首先采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析七龙天胶囊的主要化学成分,利用相关数据库获取化学成分作用靶点及ALI疾病靶点,使用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,Metascape数据库进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;采用AutoDock软件对主要活性成分与关键靶点进行分子对接验证。然后采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞模型进行体外细胞实验,以MTT法检测细胞活力,DCFH-DA法检测ROS水平,Griess法检测NO含量,RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达,通过研究七龙天胶囊对下游细胞因子的影响,初步验证上述预测的相关靶点。UPLC-Q-TOF-MS/MS共鉴定到84个化合物,数据库筛选出作用于ALI的有效成分44个,潜在目的基因589个,ALI疾病靶点560个,交集靶点65个。PPI网络拓扑分析得到与ALI相关的STAT3、JUN、VEGFA、CASP3、MMP9等10个核心靶点,KEGG富集分析结果显示七龙天胶囊主要通过调控癌症通路、AGE-RAGE、MAPK和JAK-STAT等信号通路发挥抗ALI作用。分子对接结果表明七龙天胶囊中主要活性成分大花红天素,人参皂苷F1、Rb_(1)、Rd、Rg_(1)、Rg_(3),三七皂苷Fe、G、R_(1)、R2、R_(3)与对应的蛋白靶点STAT3、JUN、VEGFA、CASP3、MMP9具有良好的结合能力。细胞实验表明0.1、0.25、0.5 mg·mL^(-1)的七龙天胶囊可以减少NO的释放,0.25、0.5 mg·mL^(-1)的七龙天胶囊可以降低ROS的产生,抑制IL^(-1)β、IL-6、TNF-α的mRNA表达,抑制炎症级联反应。综上,七龙天胶囊可能通过多成分、多靶点发挥治疗ALI的作用。

云药七龙天抑制缺氧诱导肺血管新生的作用及机制

目的:观察云药七龙天对缺氧大鼠的肺小动脉重构及肺组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:SD大鼠40只随机分5组,正常对照组、模型对照组、七龙天低、中、高剂量组,以常压低氧法制模。第1天始灌胃,连续3周。行肺组织病理切片,观测肺小动脉重构情况:血管壁厚度、管壁占血管半径百分比(WT%)、血管壁面积、血管壁面积占血管面积百分比(WA%);采用蛋白免疫印迹法检测VEGF蛋白表达。结果:与正常对照组比较,各造模组肺小动脉重构指标均显著升高(P<0.05),VEGF蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,七龙天各组上述指标水平下降,以七龙天高、中剂量组为显著(P<0.05)。结论:七龙天可显著改善缺氧性肺小动脉重构,其机制与降低VEGF蛋白表达,从而抑制缺氧诱导血管新生形成有关。

七龙天对低氧性肺动脉高压大鼠IL-1β、TNF-α的影响

目的观察七龙天对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因-α(TNF-α)的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、波生坦组、七龙天低剂量组、七龙天中剂量组、七龙天高剂量组。正常组大鼠置于正常环境中饲养,除正常组外所有实验大鼠均采用常压低氧法制模,从制模第1天始给药,连续3周。在直视下行右心导管术测定肺血流动力学参数,以RT-PCR法检测肺组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达及免疫组织化学技术检测IL-1β、TNF-α在肺小动脉内膜中的蛋白表达。结果七龙天及波生坦组均可明显降低大鼠肺动脉高压,且以七龙天高剂量组效果为佳,疗效呈药物剂量依赖表现。与正常组比较,各组的IL-1β、TNF-α表达水平(包括mRNA及蛋白)均有所增加,尤以模型组、波生坦组呈非常显著性差异(P<0.01);与模型组比较,波生坦组无显著性差异(P>0.05),七龙天各组可明显下调IL-1β、TNF-α表达水平(P<0.01或P<0.05),以七龙天高、中剂量组更为显著(P<0.01或P<0.05)。结论不同剂量七龙天均可降低肺动脉高压,且高剂量七龙天疗效优于波生坦。其降压机制与降低IL-1β及TNF-α表达量有关,但仍可能受其他血管张力因子及血管新生因子影响。

七龙天胶囊HPLC指纹图谱研究及4种成分的含量测定

目的:建立七龙天胶囊HPLC指纹图谱分析方法,并同时测定红景天苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量。方法:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-水溶液梯度洗脱;检测波长:203nm;流速:1mL/min;进样量:10μL;温度:25℃。结果:15批七龙天胶囊的HPLC图谱有11个共有峰,相似度均>0.9,通过与混合对照品比对,指认出4种化学成分:红景天苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1。4种成分分别在46.2~595.3、55.7~717.1、46.9~604.0、76.7~845.7μg/mL内呈良好的线性关系,平均回收率在99.53%~100.38%。结论:该方法稳定可行,可用于七龙天胶囊的质量控制。

七龙天干预博来霉素模型小鼠肺纤维化的作用机制研究

目的:观察七龙天对博来霉素致小鼠肺纤维化的干预作用及可能的作用机制。方法:将36只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、七龙天低、中、高剂量组、吡非尼酮组。建立小鼠肺纤维化模型后,空白组和模型组以0.9%NaCl溶液灌胃,七龙天组和吡非尼酮组分别以七龙天和吡非尼酮灌胃。给药21 d后,采用HE染色和Masson染色检测小鼠肺组织形态和胶原沉积情况,碱水解法检测羟脯氨酸(HYP)含量,qRT-PCR法检测TGF-β、α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TNF-α、CCL2、FOSL1、MMP9、CXCL5、AREG mRNA表达水平,Western blot、免疫荧光双标法检测TGF-β、α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TNF-α、IL-17R、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平,并对空白组和模型组小鼠肺组织进行转录组测序。结果:(1)与空白组比较,模型组小鼠肺组织呈现炎症细胞浸润和肺泡间隙扩大现象,胶原沉积较多(P<0.01);与模型组比较,发现七龙天各剂量组可抑制炎症细胞浸润和肺泡间隙扩大,且吡非尼酮组和七龙天各剂量组肺部胶原沉积明显减少(P<0.05,P<0.01)。(2)与空白组比较,模型组的HYP含量升高(P<0.01);与模型组比较,吡非尼酮组、七龙天各剂量组的HYP含量均降低(P<0.05,P<0.01)。(3)与空白组比较,模型组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β、TNF-α的蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,吡非尼酮组和七龙天各剂量组的COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β、TNF-α蛋白和mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。(4)通过对空白组和模型组小鼠肺组织的转录组测序分析可知,差异基因显著富集于IL-17/p38MAPK信号通路。(5)与空白组比较,模型组CCL2、FOSL1、MMP9、CXCL5、AREG mRNA和IL-17R、p-p38MAPK蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,吡非尼酮组和七龙天各剂量组的CCL2、FOSL1、MMP9、CXCL5、AREG mRNA和IL-17R、p-p38MAPK蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。同时,七龙天对上述mRNA和蛋白表达的影响呈剂量依赖性,其中高剂量的作用更有效。结论:七龙天可以通过下调炎症与胶原基因和蛋白的表达,减轻肺部炎症反应,降低肺部胶原过度沉积,发挥干预肺纤维化的作用,其作用机制可能为通过抑制IL-17/p38MAPK信号通路发挥作用。

七龙天对低氧性肺动脉高压大鼠VEGF及Ang-1的影响

目的:观察七龙天对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)、血管形成因子-1(Ang-1)的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为6组:正常组,模型组,波生坦组,七龙天低、中、高剂量组。正常组大鼠置于正常环境中饲养,除正常组外所有实验大鼠均采用常压低氧法制模,从制模第1天开始给药,连续3周。在直视下行右心导管术测定肺血流动力学参数,以RT-PCR法检测肺组织中VEGF、Ang-1 mRNA表达及免疫组织化学技术检测VEGF、Ang-1在肺小动脉内膜中的蛋白表达。结果:HPH大鼠肺小动脉管壁增厚,管腔狭窄甚至闭塞,七龙天各剂量组及波生坦组均能改善管壁增厚,尤其是七龙天高剂量组肺小动脉管壁光滑,管腔通畅,接近正常组。与模型组比较,七龙天各剂量组及波生坦组均可显著降低大鼠PASP及MPAP(P<0.05,P<0.01),且以七龙天高剂量组效果为佳。七龙天各剂量组VEGF mRNA及蛋白表达下调表达水平均优于波生坦组(P<0.05,P<0.01),且以七龙天高剂量组为显著。七龙天中、高剂量组较模型组及波生坦组可显著下调其Ang-1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论:七龙天可降低肺动脉高压,且七龙天高剂量组疗效优于波生坦组。其降压机制与降低VEGF表达量有关,与Ang-1的表达还需进一步研究。

温升宗气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期经验

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是临床多发病、常见病及疑难病,其发病机制复杂,临床表现以咳嗽、咯痰、活动后呼吸困难等为主,通过中医临床观察发现,本病与宗气亏虚有着密切关系。付义教授善用中医药治疗肺系疾病,通过温升宗气治疗COPD急性加重期患者每获良效,不仅能改善缺氧性肺动脉高压、COPD急性加重期患者临床症状,还能提高患者生活质量,延缓COPD进程。