双组分调控系统与细菌耐药性的关系及其抑制剂研究进展

双组分调控系统(TCS)是细菌感知和响应环境信号、调节生理行为最主要的机制,在细菌致病性、耐药性、生物被膜形成、毒力因子调控等方面均发挥着重要作用。该文简述了TCS的结构、功能、分类和与耐药性的关系,并讨论了靶向细菌TCS的抑制剂,以期为控制耐药细菌的传播和新型抗菌药物的研发提供理论基础。

WalK(S221P)突变影响万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌毒力的作用

目的探讨WalK(S221P)突变对万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus, VISA)毒力的影响及其机制。方法采用转录组测序比较VISA菌株XN108及其WalK(S221P)回复菌株K65的毒力基因表达差异,利用RT-qPCR检测菌株毒力基因的表达变化,溶血实验比较菌株的溶血能力。采用同源重组技术在金葡菌中引入WalK(S221P)突变,E-test检测菌株的耐药性。凝胶阻滞实验(EMSA)检测WalKR对靶基因调控区的结合能力。结果转录组测序结果显示,K65中多种重要毒力因子基因的表达上调(P<0.01),调控系统Agr的活性增强,溶血能力恢复。将WalK(S221P)突变引入USA300菌株后,其耐药性升高,毒力因子表达水平及溶血活性降低;EMSA证实WalKR对金葡菌Agr有直接调控作用;敲除agrA基因后,引入WalK(S221P)突变仍可使USA300agrA对万古霉素的耐药性升高,但毒力基因的表达水平及溶血活性改变不显著。结论 WalK(S221P)突变影响VISA毒力是通过Agr实现的,该突变导致WalKR的活性降低,激活Agr的能力下降,最终影响VISA菌株的毒力。

双组分调控系统介导革兰阴性菌耐药的作用机制

菌群耐药已成为临床上亟待解决的关键问题,特别是革兰阴性菌引起的耐药现象尤为突出,给临床治疗带来了巨大的挑战,尽快阐明重要细菌复杂耐药表型的调控机制就显得尤为重要。双组分调控系统(two-component regulatory systems,TCS)存在于多种革兰阴性菌中,在细菌诸多生命活动中发挥关键作用,是细菌感知环境变化并产生相应调控的主要机制之一。TCS通常由两种蛋白组成,包括感受器蛋白(通常是组氨酸激酶)和反应调节蛋白(通常是转录因子),二者可通过磷酸化介导的协同作用,整合细菌周围的环境信号、调节细菌相关的基因表达及改变细菌的某些生理行为。近年来,探索细菌TCS介导的耐药性应答机制已成为一个新的研究热点。基于此,本文从TCS介导临床重要革兰阴性菌耐药的结构基础和作用机理等方面进行综述,以期增进对细菌TCS的全面认识,为今后临床上药物的科学研发提供新的思路和对策。

万古霉素不能清除重症监护病房机械通气患者呼吸道分泌物中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌定植

在重症监护病房(ICU)气管插管的成人患者中,往往需氧革兰阴性杆菌(GNB)或金黄色葡萄球菌(金葡菌)在呼吸道内长期定植但并不进展为呼吸机相关性肺炎(VAP)。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术快速鉴定耐万古霉素屎肠球菌

目的:利用全自动生物质谱检测系统即基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速鉴别耐万古霉素屎肠球菌(vancomycin resistant Enterococcus faecium,VRE)和万古霉素敏感屎肠球菌(vancomycin susceptible Enterococcus faecium,VSE)。方法:收集临床分离的屎肠球菌,用仪器法和纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)进行万古霉素耐药性确认。用MALDI-TOF MS对菌株进行再鉴定,采集图谱。用Clin Pro Tools 3.0软件对质谱峰图进行分析:随机选取25株VRE和50株VSE的质谱峰图用于模型的建立,用建立的模型验证剩余的15株VRE和35株VSE。结果:用Clin Pro Tools 3.0软件建立了遗传算法(GA)、快速分类算法(QC)、监督式神经网络算法(SNN),3种模型的交叉验证和识别能力分别为95.65%、100%,87.62%、94.98%,62.54%、100%。质荷比为2 194.94、3 022.15、3 167.47和4 058.08的质谱峰是用于区分VRE和VSE的最为明显的特征性峰,即两类菌株间存在的差异蛋白质谱峰(分别是峰6、峰27、峰32、峰52)。受试者工作特征曲线显示,这4个特征性峰的曲线下面积(AUC)均约为0.9。用3种模型分别进行的外部验证显示,GA算法、QC算法、SNN算法对VRE的敏感性和特异性分别为86.7%、82.8%,73.3%、85.7%,66.7%、80.0%。结论:在严格控制实验条件的情况下,MALDI-TOF MS可以在鉴定屎肠球菌的同时大致区分VRE和VSE,具有耗时短,敏感性、特异性相对较高的优势。

多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白(MRP1)的表达抑制作用(英文)

为了研究多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白表达抑制的作用,我们构建了含有20个可以自身切割的顺式作用核酶和10个靶向MRP1基因特定位点的反式作用核酶的多核酶表达系统。利用RT-PCR、Western blot和MTT分析了多核酶系统分别与MRP1靶基因质粒和MRP1全长基因质粒共转染的HEK293细胞。结果显示,多核酶表达系统能够明显降低荧光融合蛋白在HEK293细胞中的表达。RT-PCR分析表明,MRP1靶mRNA降低程度与多核酶表达系统所含的反式作用核酶数目有关。Western blot分析显示了与RT-PCR相似的结果。MTT分析表明,多核酶表达系统能够逆转由MRP1基因转染HEK293细胞产生的多药耐药性。结果提示,含有多个核酶的表达系统对MRP1基因的抑制效应优于单核酶的表达系统。因此,该策略可能用于基因治疗肿瘤或其他疾病。

万古霉素耐药相关VanS/VanR双组分调控系统研究进展

万古霉素耐药基因簇(van)存在于多种人类致病菌中,如粪肠球菌、屎肠球菌、金黄色葡萄球菌;此外,还存在于产糖肽类抗生素放线菌纲(actinomycetes)等菌体中。菌体中万古霉素抗性的表达是通过VanR/VanS双组分调控系统对胞外环境中的糖肽类抗生素做出应答而实现的。该系统包括两个基本组分:传感器激酶(kinase)蛋白VanS和应答调节蛋白VanR。目前研究较多的两类VanR/VanS双组分调控系统为与VanA型耐药有关的Van-RA/VanSA双组分系统及与VanB型耐药有关的VanRB/VanSB双组分系统。本文综述了VanS/VanR双组分调控系统的类型、生化特性、双组分调控系统间交互作用及VanS蛋白识别的效应子配体等方面的研究进展。

多药耐药相关蛋白与难治性癫

难治性癫癎占癫癎的20％～30％。一般指癫癎频繁发作，至少每月发作4次以上，应用一线抗癫癎药物正规治疗且血药浓度在有效范围内，至少观察2年仍不能控制发作且影响正常生活，但无进行性中枢神经系统疾病或占位性病变。难治性癫癎可造成患者智力及躯体损害，并带来一系列的心理、社会问题，目前已成为癫癎研究的重点课题。癫癎耐药的重要特征是对不同化学结构和作用机制的抗癫癎药物耐药．说明其可能存在某种非特异性机制。

肝素结合蛋白联合APACHEⅡ评分在多重耐药菌感染呼吸机相关性肺炎中的诊断价值

目的探讨肝素结合蛋白(HBP)联合急性生理学和慢性健康状况评分系统(APACHE)Ⅱ评分在多重耐药菌(MDRO)感染呼吸机相关性肺炎(VAP)中的诊断价值。方法选取2016年1月至2020年1月在桂林市人民医院住院的64例VAP患者作为研究对象,根据痰培养的药敏试验是否耐药分为普通VAP组(34例)和MDRO感染VAP组(30例);选取同期无VAP的30例需要气管插管或气管切开有创机械通气治疗的患者作为非VAP组。比较三组患者的HBP、降钙素原(PCT)水平和APACHEⅡ评分,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)判断HBP、PCT、APACHEⅡ评分鉴别诊断MROD引起VAP的价值。结果三组患者的HBP、PCT水平和APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01),其中普通VAP组和MDRO感染VAP组的HBP、PCT水平和APACHEⅡ评分高于非VAP组;MDRO感染VAP组的HBP水平低于普通VAP组[(28.19±2.76)μg/L比(33.77±3.55)μg/L],PCT水平和APACHEⅡ评分高于普通VAP组[0.32(0.23,0.43)μg/L比0.25(0.17,0.37)μg/L、(19.70±3.01)分比(16.56±1.08)分](均P<0.05)。ROC曲线分析显示,HBP诊断MROD感染VAP的最佳临界值为30.456μg/L,灵敏度和特异度分别为83.33%和85.29%;APACHEⅡ评分诊断MROD感染VAP的最佳临界值为17.500分,灵敏度和特异度分别为80.00%和88.24%;HBP+APACHEⅡ评分诊断MROD感染VAP的最佳临界值为0.348,灵敏度和特异度分别为93.33%和82.35%。结论HBP联合APACHEⅡ评分对MORD感染VAP具有较高的诊断价值,早期检测HBP并结合APACHEⅡ评分可及时协助诊断,有助于提高MDRO感染VAP早期治疗的有效性。

由碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌引起的医院获得性肺炎或呼吸机相关肺炎的治疗:结合分子耐药机制检测与联合用药来提高疗效

近期出版的美国感染病协会指南建议，对于医院获得性肺炎（HAP）或呼吸机相关肺炎（VAP）患者，如感染细菌为碳青霉烯类耐药菌且仅对多黏菌素敏感时，除了接受多黏菌素E吸入治疗外，还应接受多黏菌素B或多黏菌素E的系统治疗。

无缝隙管理系统对多重耐药菌检出率及感染率影响结果分析

目的建立系统化、规范化、科学化的无缝隙管理系统加强多重耐药菌的感染管理,将该种耐药菌的检出率与院内感染发生率都降至最低,以确保患者医疗安全。方法针对多重耐药菌防控工作中的各个环节,建立多重耐药菌防控无缝隙管理系统,并通过杏林医院感染实时监控系统调取本院2015—2017年各类多重耐药菌检出率和院内感染率,利用Excel对数据进行统计分析。结果 2015—2017年多重耐药菌检出率除耐碳氢酶烯的鲍曼不动杆菌在2016年略有上升,其余均呈逐年下降趋势;院内感染例次除耐碳氢酶烯的鲍曼不动杆菌在2016年略有上升,其他也呈逐年下降趋势;经过加强培训及加大督导检查力度,全院多重耐药菌感染相关知识知晓率及隔离措施依从性逐年提高。结论运用无缝隙管理体系,对多重耐药菌感染开展管理工作,可大幅度增加相关工作者对于多重耐药菌引发的感染相关知识知晓率及隔离措施依从性,有效减少了多重耐药菌检出率及院内感染例次,能降低医疗护理安全风险,确保患者安全。

替加环素耐药机制的研究现状

替加环素（TGC）是FDA批准的用于治疗复杂性皮肤和软组织感染、复杂性腹腔感染和社区相关细菌性肺炎的抗生素。随着应用越来越广泛，替加环素产生耐药性不可避免。替加环素是一种新型甘氨酰环素类抗菌药物，全称为9-叔丁基甘氨酰氨基米诺环素，是继多西环素、米诺环素、美他环素后开发的新一代四环素类衍生抗生素。

临床标本117株肠球菌耐药分析

肠球菌为条件致病菌，可致人体多系统感染，是引起医院感染的主要病原菌之一。现从临床分离出的肠球菌有许多为多重耐药株，特别是氨基糖苷类高水平耐药及耐万古霉素肠球菌在国内出现，给抗感染治疗带来了很大困难。为给临床治疗提供帮助，现将我院所分离出的肠球菌耐药状况报告如下。

PBS评分、SOFA评分、CCI指数及D-D、ALB预测CRKP血流感染患者死亡的价值及耐药性分析

目的研究Pitt菌血症评分(PBS)、感染相关性器官功能衰竭评价系统(SOFA)、查尔森合并症指数(CCI)及D-二聚体(D-D)、清蛋白(ALB)预测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)血流感染患者死亡的价值,并分析CRKP的耐药性。方法回顾性分析2018年9月至2019年9月东部战区总医院秦淮医疗区收治的210例CRKP血流感染患者的临床资料。收集患者一般资料,包括年龄、体质量指数、合并疾病、侵入性操作、既往抗菌药物应用、各项评分及实验室指标等,并分析CRKP的耐药性。根据住院期间预后情况将患者分为存活组(n=132)和死亡组(n=78),分析CRKP血流感染患者死亡的独立影响因素。结果临床共分离CRKP 236株,药敏试验显示对替加环素耐药率较低(8.0%),对阿米卡星、厄他培南、替加环素敏感率较高,均在80.0%及以上。死亡组体质量指数、ALB、血红蛋白(Hb)水平均显著低于存活组(P<0.05);死亡组合并呼吸系统疾病、肿瘤患者占比及CCI指数、PBS评分、SOFA评分、D-D水平均显著高于存活组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,合并呼吸系统疾病[OR(95%CI)=1.432(1.048~1.957)]、CCI指数[OR(95%CI)=1.538(1.183~2.000)]、PBS评分[OR(95%CI)=1.478(1.289~1.847)]、SOFA评分[OR(95%CI)=1.647(1.359~1.996)]、ALB[OR(95%CI)=1.438(1.218~1.698)]、D-D[OR(95%CI)=1.593(1.379~1.840)]是CRKP血流感染患者死亡的独立影响因素(P<0.05)。结论PBS评分、SOFA评分、CCI指数及D-D、ALB对预测CRKP血流感染患者死亡具有临床价值。

消化系统的药源性损害

药源性消化系统损害应包括肝损害及其毒性反应,由于肝损害内容较多,一般均单独叙述,故此处所列举者,系除肝损害以外的各种药源性损害。

双组分系统调控肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药机制的研究进展

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)使感染患者的病死率居高不下。如何应对CRKP是临床亟待解决的问题,对CRKP开展耐药性机制研究势在必行。而双组分系统(TCSs)与多种细菌耐药性的形成有关,故TCSs可望成为CRKP的重要治疗靶点。因此,本文从肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的常见机制、TCSs的耐药研究进展以及肺炎克雷伯菌与TCSs的关系等方面,对TCSs调控肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药的机制进行综述,以期为日后的研究提供思路,为临床诊疗提供参考依据。

对“耐万古霉素肠球菌引起导管相关性泌尿系感染一例并文献复习”一文的异议

“耐万古霉素肠球菌引起导管相关性泌尿系感染一例并文献复习”一文报道的病例并非单纯泌尿系感染，患者同时还有肺部感染、褥疮；并有高血压、冠心病，陈旧性下壁心肌梗死、糖尿病（2型）等基础病。入院时已有呼吸衰竭，血培养有甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌，痰和褥疮分泌物培养出铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌，因此存在革兰阴性杆菌和耐药肠球菌的混合感染（尿培养为耐药肠球菌）。起病初单用头孢他啶是不够的，应考虑用碳青霉烯类加万古霉素。

金黄色葡萄球菌对万古霉素临界耐药的遗传学机制研究进展

耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）的出现引起了临床上对治疗革兰阳性菌感染的担忧，其中中度耐药金黄色葡萄球菌（VISA）的耐药机制至今仍不清楚。在对1名患儿应用万古霉素治疗的过程中，研究人员陆续分离出多株万古霉素敏感和中度耐药的金黄色葡萄球菌，若按分离时间排列，这些菌株表现出万古霉素耐药程度的逐渐升高，而各菌株的遗传背景高度一致。