三七总皂苷通过激活PPARα/Nrf2减轻内皮细胞屏障和功能损伤

目的研究三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的内皮细胞屏障和功能损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法使用OGD/R诱导bEnd.3细胞以建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组(Control)、模型组(OGD/R)、PNS高剂量组(OGD/R+PNS 400μg/mL)、PPARα抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+PPARαinhibitor)和Nrf2抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+Nrf2 inhibitor)。采用CCK-8检测bEnd.3细胞活性损伤,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)表达,蛋白印迹法检测ZO-1、claudin-5、occludin表达;采用细胞划痕和细胞侵袭实验检测bEnd.3细胞侵袭和迁移的水平;借助小管形成实验检测bEnd.3细胞小管形成能力。结果PNS通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体α/核因子E2相关因子2(PPARα/Nrf2)信号减轻OGD/R诱导的bEnd.3细胞活性损伤和内皮屏障损伤,抑制细胞迁移和侵袭能力,改善血管生成损伤。结论PNS通过激活PPARα/Nrf2信号减轻OGD/R诱导的内皮细胞屏障和功能损伤。

黄芪甲苷与三七总皂苷配伍冰片改善大鼠脑缺血再灌注后肾脏损伤的研究

目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)与三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)配伍冰片改善大鼠脑缺血再灌注后肾脏损伤的作用。方法采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,实验随机分为假手术组、模型组、单用冰片组、ASTⅣ配伍PNS(AP)组、ASTⅣ与PNS配伍冰片(APB)组,缺血2 h后再灌注48 h,神经功能评分、HE染色和尼氏染色检测脑组织功能和神经细胞损伤,HE染色检测肾脏损伤,通过肾脏质量指数和血肌酐以及血清中尿素氮含量评价肾脏功能,ELISA法检测血清IL-1β和IL-10含量,免疫组织化学检测肾组织NF-κB蛋白的表达,Western blot检测肾组织TLR4和MyD88蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能评分和神经细胞损伤率显著升高(P<0.01),尼氏体数量显著减少(P<0.01),同时肾小管水肿、核固缩,肾脏质量指数降低(P<0.01),血清肌酐和尿素氮含量升高(P<0.01),提示脑缺血再灌注可诱发肾脏继发性损伤。与模型组比较,各药物组均能不同程度地降低神经功能评分(P<0.01),减少神经细胞损伤率(P<0.01或P<0.05),增加尼氏体数量(P<0.01),改善肾脏结构损伤,增加肾脏质量指数(P<0.01或P<0.05),降低血清肌酐和尿素氮含量(P<0.01或P<0.05),以ASTⅣ与PNS配伍冰片效果最佳。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P<0.01),肾组织NF-κB、TLR4和MyD88蛋白表达增高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组血清IL-1β含量降低(P<0.01或P<0.05),血清IL-10含量升高(P<0.01或P<0.05),肾脏组织中NF-κB、TLR4和My D88的蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05)。结论脑缺血后可诱发肾脏继发性损伤,ASTⅣ和PNS配伍冰片除可减轻脑缺血再灌注后脑组织损伤外,还可减轻脑缺血后继发性肾脏损伤,其作用与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路、抑制肾脏炎症有关。

三七总皂苷复合纳米囊泡对糖尿病足溃疡大鼠皮肤创面愈合及血管生成的影响

目的:探究三七总皂苷(PNS)复合纳米囊泡对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠皮肤创面愈合及血管生成的影响。方法:取雄性SD大鼠构建DFU模型,将造模成功的27只大鼠随机分为DFU组、PNS组和PNS复合纳米囊泡(PNS-CNV)组,每组9只。另取12只血糖正常的皮肤创面大鼠作为对照组(Control组)。比较各组创面愈合率。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中炎症因子白介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精—伊红(HE)染色法检测创面组织病理学变化,免疫组化染色检测创面组织微血管密度(MVD),western blotting法检测创面组织中血管生成因子(VEGF)、神经源性基因同源蛋白(Notch1)蛋白表达。结果:造模后DFU组、PNS和PNS-CNV组大鼠空腹血糖(FBG)均高于Control组(P<0.05);药物干预7 d、14 d时,与DFU组相比,PNS组和PNS-CNV组大鼠FBG明显降低,且PNS-CNV组低于PNS组(均P<0.05)。与Control组相比,DFU组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量均明显降低,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织Notch1蛋白表达量升高(均P<0.05);与DFU组相比,PNS和PNS-CNV组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织中Notch1蛋白表达量降低(均P<0.05);与PNS组相比,PNS-CNV组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织Notch1蛋白表达量降低(均P<0.05)。结论:PNS-CNV可上调DFU大鼠创面组织中VEGF表达,抑制炎症反应,促进新生血管生成,从而加速创面的愈合,且该作用优于PNS。

三七总皂苷和马齿苋多糖合用的抗炎功效评价

为了探讨不同质量浓度下三七总皂苷和马齿苋多糖的协同抗炎组方,将不同质量浓度的三七总皂苷(1、5、25、125μg/mL)和马齿苋多糖(2、10、50、250μg/mL)两两复配,以100μg/mL地塞米松为阳性对照,通过测定炎症因子TNF-α的抑制率评估16种复配组合物的抗炎功效,并采用协同分数(synergy score值)系统定量评价复配组合物中2种成分的相互作用。结果显示,当质量浓度为125μg/mL的三七总皂苷与50μg/mL或250μg/mL的马齿苋多糖复配时,均对TNF-α具有显著的抑制效应,抑制率分别为45.18%和61.42%,其抑制作用与100μg/mL的地塞米松(抑制率为53.17%)无显著性差异(P>0.05),synergy score值分别为15.58和26.44。综上,125μg/mL的三七总皂苷与50μg/mL或250μg/mL的马齿苋多糖合用时协同抑制TNF-α的产生,但其余14种更低剂量的复配组合仅表现为相加作用。

三七总皂苷上调浓缩生长因子释放促进大鼠骨折愈合

背景:研究表明,三七总皂苷和浓缩生长因子均能促进骨折愈合,但是目前关于两者共同干预骨折愈合的研究较少,三七总皂苷可能通过在某段时间内促进浓缩生长因子相关因子的释放来达到加快骨折愈合的目的。目的:观察三七总皂苷对浓缩生长因子释放,以及对大鼠骨折愈合的影响。方法:8周龄SD大鼠18只,编号后随机分为三七总皂苷组、模型对照组以及空白组。三七总皂苷组给予三七总皂苷灌胃2周,模型对照组给予生理盐水2 mL灌胃2周,空白组正常饲喂。2周后三七总皂苷组与模型对照组同时采血离心获取浓缩生长因子备用,继续正常饲喂1周,然后对所有大鼠进行股骨骨折造模处理,三七总皂苷组与模型对照组植入自体浓缩生长因子,并用ELISA法检测1 h及1,3,5,7,9,11 d生长因子释放量;通过观察术后2个月X射线片及骨组织苏木精-伊红染色结果,评估骨折愈合情况。结果与结论:①生长因子释放情况:三七总皂苷组的血管内皮生长因子A和转化生长因子β在第7,9,11天的释放浓度高于模型对照组(P<0.05),血小板衍生生长因子BB在第5,9,11天的释放浓度高于模型对照组(P<0.05),碱性成纤维细胞生长因子在1-11天的释放浓度均高于模型对照组(P<0.05);②骨折愈合情况:术后2个月行X射线片检查,三七总皂苷组的骨折愈合情况优于模型对照组,两组均优于空白组;取材苏木精-伊红染色发现,三七总皂苷组成骨细胞生成量大于模型对照组,两组均大于空白组;③提示三七总皂苷可以上调浓缩生长因子相关因子的释放浓度,三七总皂苷干预后的浓缩生长因子对促进大鼠骨折愈合更有优势。

三七总皂苷通过激活Nrf2/GCLC信号通路抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞氧化应激而缓解口腔黏膜下纤维化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)在槟榔碱(ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化中的抗纤维化作用,并分析PNS对核因子E2相关因子2(Nrf2)∕谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)信号通路的影响。方法:采用CCK-8法评估不同浓度的PNS和ANE对人永生化角质形成细胞系HaCaT活力的影响,根据CCK-8结果选择75 mg/L的ANE及25、50和100 mg/L的PNS作为后续实验浓度;细胞设为空白对照组、模型组和PNS低、中、高剂量(25、50和100 mg/L)组,采用Western blot和RT-qPCR法检测各组细胞中I型胶原(COL-I)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Nrf2、GCLC和谷胱甘肽还原酶(GR)的蛋白及mRNA表达情况;采用免疫荧光法检测Nrf2入核情况;采用生化试剂盒检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与空白对照组相比,模型组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达上调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达下调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量升高,GSH含量和SOD活性明显减弱;与模型组相比,PNS 50和100 mg/L组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达下调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达上调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量下降,GSH含量和SOD活性明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:PNS具有抗HaCaT细胞纤维化作用,其作用机制可能与激活Nrf2/GCLC信号通路,进而抗氧化应激改善口腔黏膜下纤维化有关。

三七总皂苷对脑缺血再灌注后神经功能恢复的影响

目的探究三七总皂苷对脑缺血再灌注后神经功能恢复的影响。方法培养30只SPF级雄性SD大鼠,构建脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组和三七总皂苷组,每组10只大鼠。检测各组大鼠脑梗面积、脑含水量。Longa评分评价大鼠神经功能缺损情况。水迷宫实验检测大鼠神经功能。检测各组大鼠血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷光甘肽(glutathione,GSH)含量和炎症因子指标肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)含量。Tunel染色检测各组大鼠海马神经元细胞凋亡情况。结果和假手术组大鼠相比,模型组大鼠脑梗面积、脑含水量、神经功能缺损评分、学习潜伏期和记忆潜伏期显著升高,SOD、GSH、IL-10含量显著降低,MDA、TNF-α、IL-1β含量显著升高,海马神经元凋亡比例显著升高(P<0.05)。和模型组大鼠相比,三七总皂苷组大鼠脑梗面积、脑含水量、神经功能缺损评分、学习潜伏期和记忆潜伏期显著降低,SOD、GSH、IL-10含量显著升高,MDA、TNF-α、IL-1β含量显著降低,海马神经元凋亡比例显著降低(P<0.05)。结论三七总皂苷可能通过抑制大鼠炎症反应和氧化应激,减少海马神经元凋亡,促进脑缺血再灌注后神经功能恢复。

三七总皂苷生物利用度提升制剂新技术研究进展

三七皂苷是从三七根中提取的达玛烷型三萜皂苷,具有多种药理活性和药用价值,已作为天然药物使用多年。然而,三七总皂苷的治疗潜力在很大程度上受到其低生物利用度的限制,这主要是由于其极性大、膜渗透性差、在胃肠道不稳定以及体内代谢广泛。文章就三七总皂苷的药理作用、吸收及代谢特征、影响其生物利用度的关键因素、提高生物利用度的有效策略等方面进行综述,以期加深对三七总皂苷在临床治疗和预防疾病等不同领域的认识,设计出更有效的给药系统,以最大限度地发挥三七总皂苷的多功能治疗潜力。

三七总皂苷及其制剂治疗糖尿病视网膜病变的研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的并发症,也是导致糖尿病患者失明的主要原因,严重影响糖尿病患者的生活质量。目前,临床上治疗DR的主要手段包括手术治疗、激光治疗以及药物治疗。其中,药物治疗能够对病情发展的多个环节进行干预,并减少激光治疗和手术治疗引起的相关并发症。然而,由于眼部结构的特殊性,导致药物的生物利用度较低,迫切需要寻求和开发疗效好、毒副作用低的药物以及合适剂型。中药具有历史悠久、来源广泛、多靶点协同作用等优点,在治疗DR方面具有独特优势。三七总皂苷是从中药三七中提取的主要有效活性成分群,目前已被证实具有治疗DR的作用。文章对三七总皂苷治疗DR的机制及其临床应用于DR的剂型进行分析与归纳,对三七总皂苷的药物剂型开发前景提出展望。

外泌体与三七总皂苷在缺血性脑卒中的研究进展

缺血性脑卒中是脑卒中一种常见的类型,具有复发率高、致残率高、致死率高等特点,给家庭和社会带来极大的负担。目前的治疗方案各有缺陷与不足,无法充分覆盖各个卒中后发生的病理生理学改变。三七总皂苷对于缺血性脑卒中的治疗存在多靶点、多途径,在抑制钙超载、抗氧化应激、抗炎、抗焦亡、抗凋亡、修复血脑屏障、促进血管新生以及调节肠道菌群等方面均有作用。外泌体是一种细胞外囊泡,具有低免疫原性、低致瘤性、高转运效率、先天稳定性、不阻塞微循环系统、易存储和穿过血脑屏障等特点,是良好的细胞间信息载体。三七总皂苷以外泌体为载体从而通过血脑屏障可以更充分发挥神经保护作用。本文就外泌体与三七总皂苷在缺血性脑卒中中的研究进展作一综述,为研究三七总皂苷在缺血性脑卒中中的作用机制提供理论基础。

三七总皂苷抑制小鼠星形胶质细胞活化缓解完全弗氏佐剂所致炎性痛

目的探讨三七总皂苷(PNS)对完全弗氏佐剂(CFA)所致慢性炎性疼痛小鼠模型的镇痛作用及可能机制。方法48只C57BL/6J雄性小鼠随机分成生理盐水对照组(Ctrl)、CFA组(CFA)、CFA+PNS组、CFA+地塞米松(DEX)组(CFA+DEX)。采用Von Frey纤维丝检测小鼠机械疼痛;采用免疫组织化学法检测脊髓后角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞数目和形态结构变化;采用Western blotting检测各组小鼠相应节段脊髓GFAP、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的表达。结果与Ctrl组相比,CFA组小鼠机械痛阈值在第1、3、5、7、14天明显下降,小鼠脊髓NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达均显著增加。PNS干预可缓解模型小鼠机械痛觉,下调小鼠脊髓NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达,且与CFA+DEX组表达差异无显著性。免疫组织化学结果显示,与Ctrl组相比,CFA组小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目显著增多;PNS干预后CFA+PNS组小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目减少;DEX干预后对小鼠脊髓后角GFAP阳性细胞数目没有明显影响。Western blotting结果显示,与Ctrl组相比,CFA组小鼠脊髓GFAP表达明显增加;PNS干预后CFA+PNS组小鼠脊髓GFAP表达明显减少,DEX干预后对小鼠脊髓后角GFAP表达没有明显影响。结论PNS对炎性痛具有较好的缓解作用,其机制可能与抑制星形胶质细胞活化以及减少NLRP3炎性小体激活有关。

三七总皂苷对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及机制

目的探究三七总皂苷(PNS)调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及潜在机制。方法以SD大鼠为对象,采用大肠埃希菌液感染创面的方法复制肛瘘术后大鼠模型,并将其随机分为模型组,PNS低、高剂量组(15、30mg/cm2),PNS高剂量+2-甲氧基雌二醇(2ME2)组(PNS 30 mg/cm2+HIF-1α抑制剂2ME24 mg/kg),每组10只;另选10只正常大鼠,仅进行背部脱毛处理,作为对照组。各药物组大鼠肌内或(和)腹腔注射相应药液,每天1次,持续3周。末次给药后,检测各组大鼠的创面愈合率(对照组除外),创面组织微血管密度(MVD)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、纤维连接蛋白(FN)阳性表达情况,血清中血管生成相关因子[VEGF、血管生成素Ⅰ(Ang-Ⅰ)、Ang-Ⅱ]水平和血清、创面组织中炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-2]水平,以及创面组织中HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白的表达情况。结果模型组大鼠创面组织MVD及collagenⅠ、FN表达水平,血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较对照组显著升高(P<0.05),血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平均较对照组显著降低(P<0.05)。PNS低、高剂量组大鼠创面愈合率,创面组织MVD,血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平,创面组织中collagenⅠ、FN表达水平和HIF-1α、VEGF、VEGFR2蛋白的表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较模型组显著降低(P<0.05),且高剂量PNS的作用更强(P<0.05);2ME2可减弱PNS对肛瘘术后大鼠上述指标的改善作用(P<0.05)。结论PNS可促进血管生成相关因子产生并抑制促炎因子生成,从而促进肛瘘术后大鼠创面的愈合,上述作用与激活HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路有关。

三七总皂苷对冠心病心绞痛患者血浆内皮素-1和血小板功能的影响价值

目的:探讨三七总皂苷对冠心病心绞痛患者血浆ET-1水平和血小板功能的影响,以评估其治疗价值。方法:选取2022年3月—2023年3月抽取的冠心病心绞痛患者60例,随机分为观察组和对照组,每组30例。对照组接受常规治疗,观察组在常规治疗基础上口服三七总皂苷治疗。采集两组静脉血样本,在治疗前和治疗4周后分别检测血浆ET-1水平和血小板聚集率。比较两组的差异性。结果:观察组治疗4周后,血浆ET-1水平显著降低(P<0.05),而血小板聚集率明显减少(P<0.05)。对照组血浆ET-1水平和血小板聚集率变化无显著差异。观察组治疗后的临床症状也明显改善,包括心绞痛发作频率和强度减轻(P<0.05)。结论:三七总皂苷能够显著降低冠心病心绞痛患者的血浆ET-1水平和血小板聚集率,表明其对内皮功能和血小板活性的调节作用。该研究结果提示三七总皂苷具有降低冠心病心绞痛发作风险的潜力,具备临床应用的价值。

三七总皂苷对短暂性前脑缺血大鼠海马区神经元的修复作用实验研究

目的:探讨三七总皂苷对短暂性前脑缺血大鼠海马区神经元的修复作用。方法:选择30只SD大鼠,随机分为三七总皂苷组、模型组、假手术组,每组10只。模型组、三七总皂苷组使用四血管闭塞建立短暂性前脑缺血大鼠动物模型。假手术组手术方式同三七总皂苷组,不做卡环夹闭、电灼永久性闭塞,仅将右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉暴露,之后逐层缝合。三七总皂苷组造模后灌胃给予50 mg/kg三七总皂苷,每天2次,每次间隔12 h,模型组、假手术组灌胃给予等量的0.5%羟甲基纤维素钠。对比三组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡、新生神经元数量,对比三组大鼠的学习记忆能力,对比三组干预后7、14、28 d时测量大鼠脑梗死体积及含水量,对比三组DCX/NeuN染色阳性的细胞数量。结果:模型组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡明显较三七总皂苷组、假手术组高(均P<0.05);三七总皂苷组干预后7、14、28 d的海马神经细胞凋亡明显较假手术组高(均P<0.05);三七总皂苷组干预后7、14、28 d的海马新生神经元明显较模型组、假手术组高(均P<0.05);干预后7、14、28 d的模型组新生神经元明显较假手术组高(均P<0.05);三七总皂苷组中,随着干预时间延长,海马神经细胞凋亡明显降低,新生神经元明显升高(均P<0.05)。模型组大鼠的潜伏期、错误次数、第1记忆错误次数、第1天学习错误次数、第5天记忆错误次数、第5天学习错误次数明显较三七总皂苷组、假手术组高(均P<0.05),三七总皂苷组大鼠的潜伏期、错误次数、第1天记忆错误次数、第1天学习错误次数、第5天记忆错误次数、第5天学习错误次数明显较假手术组高(均P<0.05)。三七总皂苷组中,随着干预时间延长,第1天记忆错误次数、第1天学习错误次数、第5天记忆错误次数、第5天学习错误次数明显降低(均P<0.05)。模型组的脑梗死体积、含水量明显较三七总皂苷组、假手术组高(均P<0.05)。三七总皂苷组的脑梗死体积、含水量明显较假手术组高(均P<0.05)。三七总皂苷组中,随着干预时间延长,脑梗死体积、含水量明显降低(均P<0.05)。三七总皂苷组的DCX/NeuN染色阳性细胞数量明显较模型组、假手术组高(均P<0.05),模型组明显较假手术组高(P<0.05)。结论:三七总皂苷可促进短暂性前脑缺血大鼠海马区神经元的修复。

基于转化生长因子-β1观察三七总皂苷对大鼠跟腱异位骨化的组织学影响

目的:从组织学观察三七总皂苷(PNS)对大鼠跟腱异位骨化(HO)的影响,并基于转化生长因子-1(TGF-1)/Sma和Mad相关蛋白(Smad)同源物2/3信号通路探讨其潜在作用机制。方法:将126只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、西药组、高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组18只。HO造模术后分别给予不同浓度PNS或对照西药或生理盐水灌胃2周。于术后2周、5周及10周分别行小动物X线及CT平扫评估HO发生情况。采用一般组织学染色,包括苏木精-伊红染色、Masson三色染色及番红O固绿软骨染色,观测HO病灶内组织学改变。经免疫组织化学法比较各组病灶局部TGF-β1、磷酸化Smad同源物2(p-Smad2)及p-Smad3表达的差异。结果:术后10周,X线检测可见各手术大鼠成骨率差异无统计学意义(P>0.05)。术后2周,手术大鼠跟腱细胞显著增加(P<0.05),跟腱纤维排列紊乱;5周可见大量增殖肥大软骨细胞;10周可见大量成熟异位骨组织形成。中剂量组术后10周相对骨量显著低于模型组(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,假手术组TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3表达术后与正常对照组比较均显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,中剂量组TGF-β1的表达在术后2周显著降低(P<0.05),表达峰值延后。结论:TGF-β1的表达在大鼠跟腱HO造模术后具有显著增加。一定浓度的PNS可降低异位骨组织的相对骨量,这可能与PNS延后TGF-β1的表达峰值并下调其表达量有关。

三七总皂苷对大黄鱼抗变形假单胞菌感染能力的影响

为研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对大黄鱼(Larimichthys crocea)抗变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)感染能力的影响,首先通过体外试验测定PNS对变形假单胞菌的抑制效果,然后将PNS溶液腹腔注射体质量为20~30 g的大黄鱼,3 d后用浓度为1.02×10^(9)CFU/L的变形假单胞菌浸泡感染2 h,并测定感染前后全脾和后肾组织中的相对含菌量及TNF-α等免疫相关因子的表达水平。结果表明:质量浓度为50、25 mg/mL的PNS体外抑菌效果显著(P<0.05);PNS注射给药的大黄鱼(PNS组)在变形假单胞菌感染后8 d时的存活率较生理盐水注射组(对照组)高18.46%(P>0.05);变形假单胞菌感染后第4、8天,PNS组大黄鱼脾、后肾组织中的相对含菌量略低于对照组(P>0.05);PNS组脾组织TNF-α蛋白表达水平在感染变形假单胞菌前后均显著低于对照组(P<0.05),但其mRNA转录水平在感染后显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,PNS在体外对变形假单胞菌具有抑制效果,注射PNS能在一定程度上增强大黄鱼抗变形假单胞菌感染的能力,降低感染后脾和后肾组织中的菌量,调控TNF-α等炎症因子的表达,提高感染后的存活率。

三七总皂苷与莪术醇联用对抗结肠癌细胞株HCT116和HT29的效果及机制研究

目的 探讨三七总皂苷、莪术醇联用对抗结肠癌细胞株HCT116和HT29的效果及其可能的机制。方法 采用体外培养HCT116及HT29结肠癌细胞系模型,分别给予三七总皂苷(50μmol/L)(三七总皂苷组)、莪术醇(50μmol/L)(莪术醇组)及联合用药(50μmol/L三七总皂苷+50μmol/L莪术醇)(联合组)进行处理,并将细胞培养24 h。以5-FU为阳性对照设置阳性对照组,同时设置空白对照组(只加细胞和培养液)。体外培养24、48 h后,统计细胞抑制率、细胞凋亡及细胞周期情况,采用免疫细胞化学法检测Ang-2和caspase-3蛋白的表达。结果 人结肠癌细胞经三七总皂苷、莪术醇以及联合处理后,细胞生长受到不同程度的抑制,联合组对HCT116和HT29的抑制率明显高于单药的应用,差异有统计学意义(P<0.05),且抑制程度随着时间的增加而增强;联合组干预48 h后人结肠癌HCT116和HT29细胞凋亡率明显高于各单用组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组干预24 h后,HCT116、HT-29细胞发生变化,G1期细胞数增加,S期细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);联合组干预24 h后,HCT116和HT29细胞中Ang-2的表达水平明显降低,caspase-3的表达水平则明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 三七总皂苷、莪术醇联用能显著增强抗结肠癌作用,其机制可能是通过抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡的双重作用。

基于核受体PXR、CAR调控CYP3A4研究三七总皂苷提高硝苯地平疗效的机制

目的 研究三七总皂苷(PNS)与硝苯地平(NF)联用后疗效增强的作用机制,为指导临床合理用药提供理论遵循。方法 将SD雄性大鼠随机分为空白组、三七总皂苷组、硝苯地平组和联合给药组。采用HPLC测定血浆中硝苯地平及肝微粒体中咪达唑仑的浓度;应用qPCR技术检测核受体PXR、CAR和肝药代谢酶CYP3A4的基因表达量。结果 与NF组相比,PNS+NF组中硝苯地平药时曲线下面积升高、半衰期延长、清除率降低、最大血药浓度Cmax和达峰时间t_(max)增加(P<0.01);与空白组相比,PNS组与PNS+NF组中肝脏药物代谢酶CYP3A4活性降低(P<0.05),PNS组与PNS+NF组肝脏中核受体PXR、CAR和CYP3A4m RNA表达量均降低(P<0.01);与NF组相比,PNS组与PNS+NF组肝脏中核受体PXR、CAR和CYP3A4 mRNA表达量均降低,但差异无统计学意义。结论 三七总皂苷与硝苯地平联用后,PNS可能通过抑制核受体PXR、CAR进而抑制肝药代谢酶CYP3A4的活性与基因表达,提高硝苯地平血药浓度使疗效增强。

三七总皂苷调控miR-1231保护高糖下肾小球系膜细胞的研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)调控miR-1231对高糖诱导的肾小球系膜细胞(HMCs)增殖及炎症反应的影响。方法将人肾小球系膜细胞(HMCs)分为空白对照组(CON),高糖组(HG)和三七总皂苷组(PNS)。采用CCK-8法检测PNS对高糖下HMCs增殖的抑制作用。采用Real-time PCR法检测miR-1231在各组的相对表达量,生物信息学分析法筛选与miR-1231相关的信号通路及其参与的生物学功能。采用ELISA法和Western blot法检测炎症因子的分泌情况。结果CCK-8结果表明,与高糖组相比PNS在浓度为6.25~200μg/mL状态下,对细胞过度增殖的抑制作用呈现明显的浓度依赖性(P<0.05),且50μg/mL的PNS已能够显著改善高糖诱导下HMCs的异常增殖(P<0.01)。PCR的结果显示,与对照组相比,高糖组miR-1231表达显著下降;与高糖组相比,PNS干预后显著升高(P<0.01)。对miR-1231进行生物信息学分析,预测到miR-1231的靶基因有IGF1、TMED1、GSTT2等;用GeneOntology和KEGG数据库对miR-1231进行通路富集和生物学功能分析,确定miR-1231与MAPK信号通路紧密相关,miR-1231的靶基因参与调控肾小球系膜细胞内蛋白质转运等生物功能。ELISA的结果表明,与对照组比较,高糖组上清液中TNF-α、IL-6表达增多(P<0.01);与高糖组比较,PNS组上述两种炎症因子表达下降(P<0.01)。Western blot的结果表明,高糖组细胞中TNF-α、IL-6蛋白表达水平较对照组显著升高(P<0.01);PNS组较高糖组相比TNF-α、IL-6蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论PNS可通过上调miR-1231的表达,缓解炎症,发挥对HMCs的保护作用。

三七总皂苷基于PI3K/Akt/mTOR通路调控自噬和泛素蛋白积累对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的基于磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探究三七总皂苷调控自噬和泛素蛋白积累对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法将30只SPF级SD大鼠随机分为模型组、三七总皂苷低剂量组、三七总皂苷高剂量组,每组10只。3组大鼠均进行肾缺血再灌注造模,三七总皂苷低、高剂量组分别在缺血造模前1 h尾静脉注射三七总皂苷10 mg/kg、20 mg/kg,之后连续3 d尾静脉注射等剂量三七总皂苷。实验结束后,ELISA法检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-18(IL-18)水平,苏木精-伊红染色观察肾组织病理形态,试剂盒检测肾组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,Western blot法检测肾组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路和凋亡蛋白表达情况,RT-PCR法检测肾组织中自噬相关蛋白和泛素化蛋白mRNA表达情况。结果三七总皂苷高剂量组和三七总皂苷低剂量组BUN、Cr、IL-1β、IL-6、IL-18水平均明显低于模型组(P均<0.05),病理损伤明显轻于模型组;三七总皂苷高剂量组和三七总皂苷低剂量组肾组织中MDA、ROS、LDH含量和p-mTOR、半胱氨酸天门冬氨酸酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联蛋白X(Bax)蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),SOD含量和p-Akt、PI3K、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05);三七总皂苷高剂量组和三七总皂苷低剂量组肾组织中Beclin-1、自噬相关蛋白8(ATG8)、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF6)、Beclin-1调节自噬蛋白-1(AMBRA1)mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),神经前体细胞表达发育下调因子4(NEDD4)mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论三七总皂苷可通过激活PI3K/Akt/mTOR通路,促进泛素蛋白酶系统的表达并诱导自噬以保护肾缺血再灌注损伤大鼠的肾功能。