三七总皂苷调控破骨细胞外泌体中差异miRNA表达抑制成骨细胞铁死亡

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究。目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向。方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络。结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1736.85μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36)。这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路。

三七总皂苷通过激活PPARα/Nrf2减轻内皮细胞屏障和功能损伤

目的研究三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的内皮细胞屏障和功能损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法使用OGD/R诱导bEnd.3细胞以建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组(Control)、模型组(OGD/R)、PNS高剂量组(OGD/R+PNS 400μg/mL)、PPARα抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+PPARαinhibitor)和Nrf2抑制剂组(OGD/R+PNS 400μg/mL+Nrf2 inhibitor)。采用CCK-8检测bEnd.3细胞活性损伤,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)表达,蛋白印迹法检测ZO-1、claudin-5、occludin表达;采用细胞划痕和细胞侵袭实验检测bEnd.3细胞侵袭和迁移的水平;借助小管形成实验检测bEnd.3细胞小管形成能力。结果PNS通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体α/核因子E2相关因子2(PPARα/Nrf2)信号减轻OGD/R诱导的bEnd.3细胞活性损伤和内皮屏障损伤,抑制细胞迁移和侵袭能力,改善血管生成损伤。结论PNS通过激活PPARα/Nrf2信号减轻OGD/R诱导的内皮细胞屏障和功能损伤。

三七总皂苷对动脉粥样硬化大鼠体质量及血脂水平的影响

研究三七总皂苷对患有动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的大鼠体质量和血脂水平的影响,本实验共使用60只健康的雄性SD大鼠,通过随机分配法将其分为两组:空白对照组(A组)(n=10)和模型组(n=50)。采用高脂膳食+腹腔注射VD 3法干预9周,进行建立AS大鼠模型。结束后A组和模型组各随机抽出2只确认动脉粥样硬化大鼠造模成功。9周后,将模型组分为动脉粥样硬化模型组(B组)、三七总皂苷低剂量组(L组)、三七总皂苷中剂量组(M组)、三七总皂苷高剂量组(H组)和阿托伐他汀组(Y组),每组10只,灌胃给药干预4周。药物干预4周后,测定每只大鼠的肝脏指数、动脉硬化指数及血清中血脂水平。与A组相比,B组血清的TC、TG、LDL-C含量均显著增加(P<0.01),肝脏指数都明显升高(P<0.01),与B组中小白鼠的各项指标相比,L组、H组和Y组血清TC、TG、LDL-C的含量均显著减少,HDL-C含量显著增加,H组和Y组TC、TG水平降低更明显(P<0.01),HDL-C含量增加更显著(P<0.01),L组、M组和H组大鼠的AI 1、AI 2对比有所下降(P<0.05),其中H组中AI 1、AI 2对比有显著下降(P<0.01),Y组肝脏指数升高(P<0.05),AI 1、AI 2对比都明显下降(P<0.01)。三七总皂苷具有降低AS大鼠AI 1、AI 2、血脂作用。

三七总皂苷对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的影响

目的观察三七总皂苷对急性髓系白血病细胞株KGIa增殖、凋亡的影响。方法采用CCK-8实验检测不同浓度的三七总皂苷处理24、48、72 h后对KGIa细胞存活率的影响,倒置显微镜及荧光显微镜下观察KGIa细胞经三七总皂苷作用72 h后细胞形态及凋亡情况的影响,流式细胞术检测KGIa细胞凋亡和细胞周期的变化。结果三七总皂苷明显抑制KGIa细胞的增殖,呈浓度依赖性。三七总皂苷实验组的KGIa细胞凋亡明显增加,且三七总皂苷使细胞周期阻滞在G 0-G 1期。结论三七总皂苷可抑制急性髓系白血病细胞的增殖,可能与阻滞细胞周期和诱导调亡有关。

三七总皂苷上调浓缩生长因子释放促进大鼠骨折愈合

背景:研究表明,三七总皂苷和浓缩生长因子均能促进骨折愈合,但是目前关于两者共同干预骨折愈合的研究较少,三七总皂苷可能通过在某段时间内促进浓缩生长因子相关因子的释放来达到加快骨折愈合的目的。目的:观察三七总皂苷对浓缩生长因子释放,以及对大鼠骨折愈合的影响。方法:8周龄SD大鼠18只,编号后随机分为三七总皂苷组、模型对照组以及空白组。三七总皂苷组给予三七总皂苷灌胃2周,模型对照组给予生理盐水2 mL灌胃2周,空白组正常饲喂。2周后三七总皂苷组与模型对照组同时采血离心获取浓缩生长因子备用,继续正常饲喂1周,然后对所有大鼠进行股骨骨折造模处理,三七总皂苷组与模型对照组植入自体浓缩生长因子,并用ELISA法检测1 h及1,3,5,7,9,11 d生长因子释放量;通过观察术后2个月X射线片及骨组织苏木精-伊红染色结果,评估骨折愈合情况。结果与结论:①生长因子释放情况:三七总皂苷组的血管内皮生长因子A和转化生长因子β在第7,9,11天的释放浓度高于模型对照组(P<0.05),血小板衍生生长因子BB在第5,9,11天的释放浓度高于模型对照组(P<0.05),碱性成纤维细胞生长因子在1-11天的释放浓度均高于模型对照组(P<0.05);②骨折愈合情况:术后2个月行X射线片检查,三七总皂苷组的骨折愈合情况优于模型对照组,两组均优于空白组;取材苏木精-伊红染色发现,三七总皂苷组成骨细胞生成量大于模型对照组,两组均大于空白组;③提示三七总皂苷可以上调浓缩生长因子相关因子的释放浓度,三七总皂苷干预后的浓缩生长因子对促进大鼠骨折愈合更有优势。

三七总皂苷通过激活Nrf2/GCLC信号通路抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞氧化应激而缓解口腔黏膜下纤维化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)在槟榔碱(ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化中的抗纤维化作用,并分析PNS对核因子E2相关因子2(Nrf2)∕谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)信号通路的影响。方法:采用CCK-8法评估不同浓度的PNS和ANE对人永生化角质形成细胞系HaCaT活力的影响,根据CCK-8结果选择75 mg/L的ANE及25、50和100 mg/L的PNS作为后续实验浓度;细胞设为空白对照组、模型组和PNS低、中、高剂量(25、50和100 mg/L)组,采用Western blot和RT-qPCR法检测各组细胞中I型胶原(COL-I)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Nrf2、GCLC和谷胱甘肽还原酶(GR)的蛋白及mRNA表达情况;采用免疫荧光法检测Nrf2入核情况;采用生化试剂盒检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与空白对照组相比,模型组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达上调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达下调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量升高,GSH含量和SOD活性明显减弱;与模型组相比,PNS 50和100 mg/L组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达下调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达上调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量下降,GSH含量和SOD活性明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:PNS具有抗HaCaT细胞纤维化作用,其作用机制可能与激活Nrf2/GCLC信号通路,进而抗氧化应激改善口腔黏膜下纤维化有关。

三七总皂苷对脑缺血再灌注后神经功能恢复的影响

目的探究三七总皂苷对脑缺血再灌注后神经功能恢复的影响。方法培养30只SPF级雄性SD大鼠,构建脑缺血再灌注模型。将大鼠分为假手术组、模型组和三七总皂苷组,每组10只大鼠。检测各组大鼠脑梗面积、脑含水量。Longa评分评价大鼠神经功能缺损情况。水迷宫实验检测大鼠神经功能。检测各组大鼠血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷光甘肽(glutathione,GSH)含量和炎症因子指标肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)含量。Tunel染色检测各组大鼠海马神经元细胞凋亡情况。结果和假手术组大鼠相比,模型组大鼠脑梗面积、脑含水量、神经功能缺损评分、学习潜伏期和记忆潜伏期显著升高,SOD、GSH、IL-10含量显著降低,MDA、TNF-α、IL-1β含量显著升高,海马神经元凋亡比例显著升高(P<0.05)。和模型组大鼠相比,三七总皂苷组大鼠脑梗面积、脑含水量、神经功能缺损评分、学习潜伏期和记忆潜伏期显著降低,SOD、GSH、IL-10含量显著升高,MDA、TNF-α、IL-1β含量显著降低,海马神经元凋亡比例显著降低(P<0.05)。结论三七总皂苷可能通过抑制大鼠炎症反应和氧化应激,减少海马神经元凋亡,促进脑缺血再灌注后神经功能恢复。

三七总皂苷抑制动脉粥样硬化与改善肠道屏障完整性的作用研究

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)抑制动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)和改善肠道屏障的效应。方法以高脂饮食喂养的载脂蛋白基因E敲除(ApoE-/-)小鼠作为AS模型,C57BL/6J小鼠给与普通饮食作为正常组,24只ApoE-/-小鼠给与高脂饮食并按随机数字分为模型组,PNS低剂量给药组和PNS高剂量给药组。PNS低剂量和高剂量组小鼠分别给予50 mg·kg^(-1)·d^(-1)和250 mg·kg^(-1)·d^(-1)PNS灌胃,模型组和正常组小鼠给予同等体积生理盐水。8周后通过HE染色和油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块病理改变和脂质沉积情况;通过MCP-1和CD68免疫组化染色观察小鼠主动脉根部巨噬细胞的浸润情况;通过HE染色和阿利新蓝染色观察小鼠回肠病理损伤情况;通过Cingulin免疫荧光染色观察小鼠回肠紧密连接完整性;采用Real-time qPCR法分析小鼠回肠紧密连接蛋白ZO(Zonula Occludens,ZO)-1、Claudin-1 mRNA表达水平;通过ELISA法检测小鼠血清炎症因子TNF-α和IL-1β含量。结果相较于正常组小鼠,模型组小鼠主动脉根部可见明显的AS斑块和脂质沉积,回肠病理损伤明显,回肠绒毛长度变短,杯状细胞数量减少,回肠紧密连接蛋白表达显著下调,肠道屏障受损,血清炎症因子显著升高,主动脉根部巨噬细胞浸润明显。与模型组相比,PNS给药组小鼠主动脉根部斑块的大小及斑块内坏死核心的面积显著减小(P<0.05),主动脉根部脂质沉积显著减少(P<0.01)。回肠损伤显著减轻,回肠绒毛显著增长(P<0.05),杯状细胞数量显著增多(P<0.05),回肠紧密连接蛋白Cingulin及Claudin-1显著增加(P<0.05),显著减轻肠道屏障损伤,血清炎症因子TNF-α和IL-1β显著降低(P<0.05),主动脉根部巨噬细胞浸润显著减少(P<0.05)。结论PNS具有改善肠道屏障,减少炎症反应,抑制AS进展的作用。

黄芪甲苷与三七总皂苷配伍冰片改善大鼠脑缺血再灌注后肾脏损伤的研究

目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)与三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)配伍冰片改善大鼠脑缺血再灌注后肾脏损伤的作用。方法采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,实验随机分为假手术组、模型组、单用冰片组、ASTⅣ配伍PNS(AP)组、ASTⅣ与PNS配伍冰片(APB)组,缺血2 h后再灌注48 h,神经功能评分、HE染色和尼氏染色检测脑组织功能和神经细胞损伤,HE染色检测肾脏损伤,通过肾脏质量指数和血肌酐以及血清中尿素氮含量评价肾脏功能,ELISA法检测血清IL-1β和IL-10含量,免疫组织化学检测肾组织NF-κB蛋白的表达,Western blot检测肾组织TLR4和MyD88蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能评分和神经细胞损伤率显著升高(P<0.01),尼氏体数量显著减少(P<0.01),同时肾小管水肿、核固缩,肾脏质量指数降低(P<0.01),血清肌酐和尿素氮含量升高(P<0.01),提示脑缺血再灌注可诱发肾脏继发性损伤。与模型组比较,各药物组均能不同程度地降低神经功能评分(P<0.01),减少神经细胞损伤率(P<0.01或P<0.05),增加尼氏体数量(P<0.01),改善肾脏结构损伤,增加肾脏质量指数(P<0.01或P<0.05),降低血清肌酐和尿素氮含量(P<0.01或P<0.05),以ASTⅣ与PNS配伍冰片效果最佳。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P<0.01),肾组织NF-κB、TLR4和MyD88蛋白表达增高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组血清IL-1β含量降低(P<0.01或P<0.05),血清IL-10含量升高(P<0.01或P<0.05),肾脏组织中NF-κB、TLR4和My D88的蛋白表达降低(P<0.01或P<0.05)。结论脑缺血后可诱发肾脏继发性损伤,ASTⅣ和PNS配伍冰片除可减轻脑缺血再灌注后脑组织损伤外,还可减轻脑缺血后继发性肾脏损伤,其作用与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路、抑制肾脏炎症有关。

FGF-2和三七总皂苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的探究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro-blast growth factor,FGF-2)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)单独或联合诱导对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)分化的影响以及PNS和FGF-2促分化的作用机制。方法全骨髓贴壁法分离20~30 g 3周龄SD大鼠的骨髓间充质干细胞,通过流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞的纯度。鉴定纯度合格后通过PNS和FGF-2单独或联合诱导以及PNS和FGF-2分别与LY294002(phosphatidylinositol 3 kinase抑制剂)联用诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化。根据培养的相应时间点,分为对照组、三七总皂苷组(PNS组)、碱性成纤维细胞生长因子组(FGF-2组)、三七总皂苷+碱性成纤维细胞生长因子组(PNS+FGF-2组)。通过免疫组织化学检测诱导后Desmin和Cx43的表达水平;Western blot检测心肌特异性蛋白、有关通路蛋白及细胞凋亡有关蛋白的表达水平;采用RT-qPCR检测心肌转录因子表达水平。结果各单独诱导组(FGF-2组、PNS组)或联合诱导组(PNS+FGF-2组)均提高心肌特异性蛋白和基因表达水平(P<0.05),且最高表达水平出现在联合组。PNS和FGF-2分别与LY294002联用,相较于两单独诱导组降低了心肌特异性蛋白和基因的表达水平,降低通路相关蛋白Akt的磷酸化水平,且Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值减小(P<0.05)。结论PNS和FGF-2均可使骨髓间充质干细胞诱导后向心肌细胞定向分化,且二者的联合诱导是一种更高效的诱导方法。PI3K/Akt信号通路参与了PNS和FGF-2促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程,且PNS和FGF-2起到减少细胞凋亡的作用。

三七总皂苷预防血栓的机制

三七总皂苷(PNSs)作为三七的有效提取成分,用于预防血栓历史悠久。PNSs下调炎性因子表达,促进血管内皮细胞生长,上调抗凝物质和舒张血管分子表达,调节内皮细胞功能;PNSs多靶点抑制血小板黏附、释放和聚集;PNSs通过调节组织型纤溶酶原激活物和抑制物动态平衡,维持纤维蛋白溶解系统活性;PNSs降低血液黏度,改善红细胞指标,多途径抑制血栓形成。

三七总皂苷复合纳米囊泡对糖尿病足溃疡大鼠皮肤创面愈合及血管生成的影响

目的:探究三七总皂苷(PNS)复合纳米囊泡对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠皮肤创面愈合及血管生成的影响。方法:取雄性SD大鼠构建DFU模型,将造模成功的27只大鼠随机分为DFU组、PNS组和PNS复合纳米囊泡(PNS-CNV)组,每组9只。另取12只血糖正常的皮肤创面大鼠作为对照组(Control组)。比较各组创面愈合率。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中炎症因子白介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精—伊红(HE)染色法检测创面组织病理学变化,免疫组化染色检测创面组织微血管密度(MVD),western blotting法检测创面组织中血管生成因子(VEGF)、神经源性基因同源蛋白(Notch1)蛋白表达。结果:造模后DFU组、PNS和PNS-CNV组大鼠空腹血糖(FBG)均高于Control组(P<0.05);药物干预7 d、14 d时,与DFU组相比,PNS组和PNS-CNV组大鼠FBG明显降低,且PNS-CNV组低于PNS组(均P<0.05)。与Control组相比,DFU组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量均明显降低,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织Notch1蛋白表达量升高(均P<0.05);与DFU组相比,PNS和PNS-CNV组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织中Notch1蛋白表达量降低(均P<0.05);与PNS组相比,PNS-CNV组大鼠创面愈合率、创面组织CD34阳性表达、MVD及VEGF蛋白表达量升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α含量及创面组织Notch1蛋白表达量降低(均P<0.05)。结论:PNS-CNV可上调DFU大鼠创面组织中VEGF表达,抑制炎症反应,促进新生血管生成,从而加速创面的愈合,且该作用优于PNS。

三七总皂苷和马齿苋多糖合用的抗炎功效评价

为了探讨不同质量浓度下三七总皂苷和马齿苋多糖的协同抗炎组方,将不同质量浓度的三七总皂苷(1、5、25、125μg/mL)和马齿苋多糖(2、10、50、250μg/mL)两两复配,以100μg/mL地塞米松为阳性对照,通过测定炎症因子TNF-α的抑制率评估16种复配组合物的抗炎功效,并采用协同分数(synergy score值)系统定量评价复配组合物中2种成分的相互作用。结果显示,当质量浓度为125μg/mL的三七总皂苷与50μg/mL或250μg/mL的马齿苋多糖复配时,均对TNF-α具有显著的抑制效应,抑制率分别为45.18%和61.42%,其抑制作用与100μg/mL的地塞米松(抑制率为53.17%)无显著性差异(P>0.05),synergy score值分别为15.58和26.44。综上,125μg/mL的三七总皂苷与50μg/mL或250μg/mL的马齿苋多糖合用时协同抑制TNF-α的产生,但其余14种更低剂量的复配组合仅表现为相加作用。

三七总皂苷对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及机制

目的探究三七总皂苷(PNS)调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路对肛瘘术后大鼠创面愈合的影响及潜在机制。方法以SD大鼠为对象,采用大肠埃希菌液感染创面的方法复制肛瘘术后大鼠模型,并将其随机分为模型组,PNS低、高剂量组(15、30mg/cm2),PNS高剂量+2-甲氧基雌二醇(2ME2)组(PNS 30 mg/cm2+HIF-1α抑制剂2ME24 mg/kg),每组10只;另选10只正常大鼠,仅进行背部脱毛处理,作为对照组。各药物组大鼠肌内或(和)腹腔注射相应药液,每天1次,持续3周。末次给药后,检测各组大鼠的创面愈合率(对照组除外),创面组织微血管密度(MVD)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、纤维连接蛋白(FN)阳性表达情况,血清中血管生成相关因子[VEGF、血管生成素Ⅰ(Ang-Ⅰ)、Ang-Ⅱ]水平和血清、创面组织中炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-2]水平,以及创面组织中HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白的表达情况。结果模型组大鼠创面组织MVD及collagenⅠ、FN表达水平,血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较对照组显著升高(P<0.05),血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平均较对照组显著降低(P<0.05)。PNS低、高剂量组大鼠创面愈合率,创面组织MVD,血清中VEGF、Ang-Ⅰ、Ang-Ⅱ水平,创面组织中collagenⅠ、FN表达水平和HIF-1α、VEGF、VEGFR2蛋白的表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),血清及创面组织中IL-6、IL-2水平均较模型组显著降低(P<0.05),且高剂量PNS的作用更强(P<0.05);2ME2可减弱PNS对肛瘘术后大鼠上述指标的改善作用(P<0.05)。结论PNS可促进血管生成相关因子产生并抑制促炎因子生成,从而促进肛瘘术后大鼠创面的愈合,上述作用与激活HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路有关。

三七总皂苷调控mTORC1-HIF1α通路干预Th17/Treg分化平衡的作用研究

目的:分析三七总皂苷(PNS)对mTORC1-HIF1α信号通路的作用,探讨其对CD4^(+)T细胞中Th17/Treg细胞分化平衡的影响机制。方法:磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏CD4^(+)T细胞进行体外培养,采用CCK-8筛选PNS最佳给药浓度,之后分别设置对照组、PNS给药组(5、10、20μg/ml),各组给予相应药物处理48 h后,采用流式细胞术检测Th17/Treg细胞分化,实时荧光定量PCR检测RORγt、Foxp3、mTOR、Raptor、HIF1α mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-17A和IL-10的水平,Western blot检测4EBP1、S6K、HIF1α蛋白表达及磷酸化水平。结果:5、10、20μg/ml PNS显著抑制Th17细胞分化,促进Treg细胞分化;5、10、20μg/ml PNS显著下调CD4^(+)T细胞中RORγt mRNA表达,降低IL-17A水平;20μg/ml PNS显著上调Foxp3 mRNA表达,提高IL-10水平;10、20μg/ml PNS显著降低4EBP1、S6K磷酸化水平;5、10、20μg/ml PNS显著下调HIF1α mRNA表达,显著抑制HIF1α蛋白表达。结论:一定浓度的PNS可以抑制CD4^(+)T细胞中Th17细胞分化,促进Treg细胞分化,这一效应与影响mTORC1-HIF1α信号通路有关。

三七总皂苷通过p38 MAPK通路抑制内毒素诱导的小胶质细胞活化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS)。CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度。利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化。结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度。Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P>0.05)。此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P>0.05)。结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达。

三七总皂苷生物利用度提升制剂新技术研究进展

三七皂苷是从三七根中提取的达玛烷型三萜皂苷,具有多种药理活性和药用价值,已作为天然药物使用多年。然而,三七总皂苷的治疗潜力在很大程度上受到其低生物利用度的限制,这主要是由于其极性大、膜渗透性差、在胃肠道不稳定以及体内代谢广泛。文章就三七总皂苷的药理作用、吸收及代谢特征、影响其生物利用度的关键因素、提高生物利用度的有效策略等方面进行综述,以期加深对三七总皂苷在临床治疗和预防疾病等不同领域的认识,设计出更有效的给药系统,以最大限度地发挥三七总皂苷的多功能治疗潜力。

三七总皂苷心肌靶向脂质体对内毒素血症心肌损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的:研究三七总皂苷心肌靶向脂质体(PAC-L-PNS)对内毒素血症心肌损伤小鼠的心肌保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、PAC-L-PNS组、三七总皂苷普通脂质体(L-PNS)组和三七总皂苷(PNS)组,每组10只。PAC-L-PNS组、L-PNS组和PNS组分别尾静脉注射相应药物,正常组和模型组小鼠尾静脉注射等体积空白脂质体,连续给药5 d,末次给药4 h后,正常组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠分别腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)建立心肌损伤模型。造模12 h后处死小鼠,采用TUNEL染色和苏木精—伊红(HE)染色分别观察各组小鼠心肌细胞凋亡及心肌组织病理变化;检测仪检测小鼠血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1的含量;采用RT-qPCR法检测小鼠心肌组织NF-κB P65、IκBα、TLR4和IRAK1mRNA的表达;此外,进行血管刺激性、溶血性试验初步评价PAC-L-PNS的安全性。结果:PAC-L-PNS几乎无溶血和血管刺激性现象,生物相容性良好。与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01),心肌组织损伤较严重。与模型组比较,PAC-L-PNS组和L-PNS组小鼠心肌凋亡细胞显著减少(P<0.01),组织病变有所改善,PNS组小鼠无显著变化。与正常组比较,模型组小鼠CK、LDH活性、IL-6、IL-1β、TNF-α和MCP-1含量、TLR4、IRAK1、NF-κB P65和IκBαmRNA表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,PAC-L-PNS组小鼠CK、LDH活性、各炎症因子含量、TLR4、IRAK1、NF-κB P65、IκBαmRNA表达均显著降低(均P<0.05)。与L-PNS组和PNS组比较,PAC-L-PNS组CK活性、各炎症因子含量、TLR4、IRAK1 mRNA表达均显著下降(均P<0.05)。结论:PAC-L-PNS对LPS致内毒素血症心肌损伤具有明显的保护作用,可减轻心脏组织的病变,其机制可能与抑制炎症因子产生有关。

三七总皂苷及其制剂治疗糖尿病视网膜病变的研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的并发症,也是导致糖尿病患者失明的主要原因,严重影响糖尿病患者的生活质量。目前,临床上治疗DR的主要手段包括手术治疗、激光治疗以及药物治疗。其中,药物治疗能够对病情发展的多个环节进行干预,并减少激光治疗和手术治疗引起的相关并发症。然而,由于眼部结构的特殊性,导致药物的生物利用度较低,迫切需要寻求和开发疗效好、毒副作用低的药物以及合适剂型。中药具有历史悠久、来源广泛、多靶点协同作用等优点,在治疗DR方面具有独特优势。三七总皂苷是从中药三七中提取的主要有效活性成分群,目前已被证实具有治疗DR的作用。文章对三七总皂苷治疗DR的机制及其临床应用于DR的剂型进行分析与归纳,对三七总皂苷的药物剂型开发前景提出展望。

基于网络药理学探究灯盏花素联用三七总皂苷治疗脑梗死的潜在作用机制

基于网络药理学方法探究灯盏花素联用三七总皂苷治疗脑梗死(cerebral infarction,CI)的潜在作用机制。运用PubChem以及Swiss Target Prediction数据库获取灯盏花素(breviscapine)和三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)的主要活性成分以及相关靶点。利用GeneCards、DisGeNET、Drugbank和PharmGkb数据库收集的相关疾病靶点,与成分靶点取交集绘制维恩图。在STRING平台获取蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,采用Cytoscape3.7.2软件CytoNCA插件构建网络图并进行可视化处理。采用DAVID数据库进行基因本体论(Gene Ontology,GO)生物过程和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。有效成分6种,共检测到42个有效成分靶点,CI相关靶点960个,取交集后得到灯盏花素和三七总皂苷治疗CI的潜在靶点15个。对交集靶点富集,GO富集分析共涉及生物过程111个,细胞组分19个,分子功能20个,KEGG通路富集得到55条通路,结合蛋白-蛋白相互作用网络分析与富集分析最终得到TNF、AKT1、EGFR、PTGS2、STAT3共5个核心靶点。本研究初步探索了灯盏花素联用三七总皂苷治疗脑梗死的作用机制为后续研究提供基础。