三七有效成分对人子宫内膜细胞培养液TNF-α和IL-1β含量的影响

目的利用细菌脂多糖(LPS)诱导正常子宫内膜细胞,导致细胞发生炎症反应的体外细胞模型,研究三七不同有效成分干预炎症细胞模型后,其细胞培养液中白细胞介素1β(IL1β)和肿瘤坏死因子α(TNFα)含量的变化。方法比较不同浓度的三七有效成分对正常子宫内膜细胞生长的抑制率,筛选最佳浓度的三七有效成分干预炎症子宫内膜细胞模型,测定其两个时间段(48h、72h)的、TNFα、IL1β的浓度。结果1通过对三七有效成分5个梯度剂量进行剂量筛选,采用四氮唑蓝(MTT)法测定发现,符合药物对细胞的抑制率(IR)≤10%的为三七有效成分第3组(三七皂苷00408mgmL+三七氨酸0002mgmL)。23个药物干预组TNFα和IL1β浓度都明显低于同时段的模型组(P<001)。但是与正常对照组相比,两时段的三七皂苷组和三七氨酸组TNFα和IL1β的浓度含量还是明显高于正常对照组(P<005,P<001),而三七复方组与正常对照组比较无明显差异。结论1三七有效成分的剂量筛选的第3组(三七皂苷00408mgmL+三七氨酸0002mgmL)可做为干预炎症子宫内膜细胞模型的三七复方的药物浓度,干预的时间及用量的定量化,为进一步的实验研究提供了必要的基础。2三七的各有效成分可不同程度地抑制炎症细胞因子TNFα、IL1β的分泌。

三七有效成分对人子宫内膜细胞培养液NO及NOS的影响

目的探讨三七不同有效成分干预人子宫内膜炎症模型后,其细胞培养液中一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)活力的变化。方法以三七有效成分干预炎症子宫内膜细胞模型,分别测定48 h及72 hNO、NOS的活力。结果模型组细胞培养液中NO、NOS活力较正常对照组明显增高(P<0.01)。经药物干预后,三七复方组和三七氨酸组NO和NOS活力都明显低于同时段的模型组(P<0.01)。而48 h三七皂苷组与同时段模型组比较,NO含量、NOS活力明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);72 h三七皂苷组NO含量、NOS活力较同时段模型组明显降低(P<0.05,P<0.01)。而三七复方组和正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论三七复方、三七氨酸能明显降低炎症性子宫内膜细胞培养液中NO、NOS活力,调节血管的舒缩功能,从而达到止血的目的。三七皂苷在短时间内可升高NO和NOS含量,改善局部血流,消除已存在的瘀血,化瘀后更有助于三七氨酸发挥止血的功效。

三七有效成分对人子宫内膜细胞培养液6-keto-PGF_(1α)、TXB_2的影响

目的观察三七不同有效成分对人子宫内膜细胞炎症细胞模型细胞培养液中6—酮-前列腺素F1α(6—Keto—PGF1α)和血栓素B2(TXB2)含量的影响。方法利用细菌脂多糖(LPS)诱导正常子宫内膜细胞,导致细胞发生炎症反应的体外细胞模型,以前期实验确定的最佳浓度的三七有效成分干预炎症子宫内膜细胞模型,测定其两个时间段(487、2 h)的6—Keto—PGF1α、TXB2的含量。结果三七复方成分能使6—Keto—PGF1α含量降低,TXB2含量增高,6—Keto—PGF1α/TXB2比值趋于正常。结论调整6—Keto—PGF1α/TXB2比值,恢复PGI2和TXA2之间的动态平衡,是三七复方成分防治炎症性子宫异常出血的有效途径之一。

黄芪和三七有效成分对脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的从细胞凋亡角度探讨黄芪和三七有效成分配伍抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为:假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTⅣ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、四种有效成分配伍组、ASTⅣ+Rg1组、ASTⅣ+Rb1组、ASTⅣ+R1组、阳性对照药依达拉奉组,给药3 d后,夹闭双侧颈总动脉造成脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后,TUNEL法检测神经细胞凋亡,计算凋亡率,western-blot法测定脑组织caspase-3蛋白表达。结果缺血再灌注后神经细胞凋亡率升高,caspase-3表达上调,各给药组均能降低神经细胞的凋亡率和caspase-3的表达。ASTⅣ+Rg1与ASTⅣ+R1降低凋亡率和caspase-3表达的效应分别大于各药物单用。四种有效成分配伍组降低凋亡率的效应大于四种有效成分单用及ASTⅣ+Rb1,抑制caspase-3蛋白表达的效应大于各有效成分单用及ASTⅣ+Rb1、ASTⅣ+R1。结论黄芪甲苷与三七的主要有效成分配伍能增强对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用,ASTⅣ+Rg1、ASTⅣ+R1以及四种有效成分配伍对细胞凋亡的抑制作用增强。

三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞NF-κB p65及TNF-α、IL-1β变化的影响

目的:探讨三七复合有效成分在子宫内膜细胞炎症过程中对NF-κBp65表达和活性变化及其TNF-α、IL-1β含量变化的影响。方法:应用WB,ICC,EMSA方法分析子宫内膜细胞LPS炎症模型组、三七复合有效成分组、宫血宁制剂组及正常对照组NF-κBp65的表达情况以及其活性的动态变化;应用ELISA法测定TNF-α、IL-1β的含量。结果:子宫内膜细胞炎症过程中细胞核内出现NF-κBp65的高水平表达(P<0.01),TNF-α、IL-1β的含量随炎症发展而逐渐上升(P<0.01),三七复合有效成分能有效降低炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,降低NF-κBp65的转录及蛋白表达量,抑制NF-κBp65的核因子DNA结合活性。结论:三七复合有效成分能促使炎症细胞转归,有效保护LPS对培养细胞的损伤,在长效持续性保护细胞形态完整性方面优于宫血宁制剂。

三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在子宫内膜细胞炎症过程中的作用及三七复合有效成分的影响。方法:应用化学比色法检测子宫内膜细胞LPS炎症模型组、三七复合有效成分组、宫血宁制剂组及正常对照组NO及iNOS的活性,用免疫细胞化学(ICC)法检测4组子宫内膜中iNOS蛋白的表达水平。结果:三七复合有效成分干扰组与LPS炎症模型组比较,子宫内膜NO、iNOS的活性及iNOS蛋白表达水平明显降低,差异有显著性(P<0·01)。结论:三七复合有效成分减少子宫内膜细胞炎症的机制可能与调节NO、iNOS的活性及iNOS蛋白表达水平有关。

三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞MMP-1、TIMP-1及VEGF的影响

目的:探讨MMP-1、TIMP-1及VEGF在子宫内膜细胞炎症过程中的作用及三七复合有效成分的影响。方法:应用免疫细胞化学(ICC)和原位分子杂交(ISH)法检测子宫内膜细胞LPS炎症模型组、三七复合有效成分组、宫血宁制剂组及正常对照组MMP-1、TIMP-1及VEGF的mRNA及蛋白表达水平。结果:三七复合有效成分干扰组与LPS炎症模型组比较,MMP-1蛋白及mRNA表达水平明显降低,而TIMP-1及VEGF水平增加,差异有显著性,(P<0·01)。结论:三七复合有效成分减轻子宫内膜细胞炎症并促进子宫内膜组织修复的机制可能与调节MMP-1和TIMP-1系统平衡有关。

三七复合有效成分对子宫内膜炎症细胞纤溶因子t-PA及PAI-1的影响

目的:探讨t-PA及PAI-1在子宫内膜细胞炎症过程中的作用及三七复合有效成分的影响。方法:应用Western Blot法检测子宫内膜细胞LPS炎症模型组、三七复合有效成分组、宫血宁制剂组、正常对照组的t-PA及PAI-1蛋白的表达水平。结果:三七复合有效成分组与LPS模型组比较,子宫内膜t-PA蛋白表达水平明显降低而PAI-1水平增高,差异有显著性(P<0·01)。结论:三七复合有效成分减少子宫内膜细胞炎症的机制可能与调节纤溶系统t-PA和PAI-1平衡有关。

基于Rho/Rock通路的三七茜草有效组分宫腔给药对IUD模型大鼠子宫血管平滑肌细胞表型转化机制研究

目的通过三七茜草有效组分宫腔给药对IUD(Intrauterine device)模型大鼠进行干预,观察相关指标以探讨其对子宫血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的表型转化影响的机制。方法选用40只SPF级SD雌性已生育大鼠,随机分为空白对照组(空白组)、宫内节育器组(IUD组)、三七茜草有效组分宫腔给药组(SQ-IUD组)、宫宁颗粒灌胃组(宫宁颗粒组)各10只,观察大鼠精神活动状态、子宫炎症水肿情况,电镜下观察子宫内膜形态学改变,ELISA检测宫腔冲洗液血小板源性生长因子(Plateletderived growth factor,PDGF)含量,免疫组化法检测RhoA蛋白表达水平,PCR法检测RhoA,Rho激酶Ⅱ(ROCKⅡ)、平滑肌22 alpha(SM22α)的mRNA含量。结果在大鼠造模后状态方面,宫宁颗粒组与SQ-IUD组一般状态与空白组无差别,子宫炎症水肿情况较IUD组轻;在PDGF方面,SQ-IUD组含量显著低于IUD组(P<0.05);在免疫组化方面,SQ-IUD组RhoA蛋白表达显著低于IUD组、宫宁颗粒组(P<0.01);在RhoA mRNA方面,SQ-IUD组含量显著低于IUD组、宫宁颗粒组(P<0.01);在RockⅡmRNA方面,SQ-IUD组含量显著低于IUD组(P<0.05),但与宫宁颗粒组差异无统计学意义(P>0.05);在SM22αmRNA方面,SQ-IUD组含量显著高于IUD组、宫宁颗粒组(P<0.05)。结论三七茜草有效组分宫腔给药可明显减轻IUD放置后引起的炎症反应,可能通过抑制Rho/Rock信号通路激活减少子宫VSMC的表型转化,从而起到防治IUD出血不良反应。

三七复合有效成分对人子宫内膜炎症细胞MMP-1、TIMP-1、VEGF及t-PA、PAI-1的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-1)、组织金属蛋白酶原抑制剂(TIMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及组织型-纤维蛋白溶解酶原激活剂(t-PA)、纤维蛋白溶解酶原激活抑制剂(PAI-1)在子宫内膜细胞炎症过程中的作用及三七复合有效成分对其影响。方法:ICC、ISH、WB检测子宫内膜细胞正常组、模型组、宫血宁组、三七复合有效成分(SQ组)MMP-1、TIMP-1、VEGF及t-PA、PAI-1的蛋白表达水平及MMP-1、TIMP-1、VEGF的mRNA表达水平。结果:SQ组与模型组比较,MMP-1蛋白及mRNA表达水平明显降低而TIMP-1及VEGF水平增加,差异有显著统计学意义(P<0.01),t-PA蛋白表达水平明显降低而PAI-1水平增高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:三七复合有效成分减轻子宫内膜细胞炎症并促进子宫内膜组织修复,其机制可能与调节MMP-1/TIMP-1和t-PA/PAI-1平衡有关。