HPLC法同时测定参龙通络丸中三七皂苷R_(1)和人参皂苷Rf的含量

目的建立一种可以同时测定参龙通络丸中两种成分(三七皂苷R1、人参皂苷Rf)含量的HPLC法。方法采用高效液相色谱法(HPLC),Hypersil Hypersil BDS C18色谱柱(5μm,4 mm×250 mm),乙腈-水为流动相梯度洗脱;流速1.0 ml/min;检测波长203 nm;柱温35℃,检测参龙通络丸中两种成分的含量。结果三七皂苷R1样品量在0.198~9.535μg范围(r=0.9993)、人参皂苷Rf的样品量在0.957~38.392μg范围(r=0.9997)线性关系良好,两种成分的平均回收率分别为99.10%(RSD=1.57%,n=6)和98.76%(RSD=2.13%,n=6)。结论本方法具有结果准确、可靠、重复性好的特点,可为参龙通络丸的质量标准制定提供科学依据。

复方丹参滴丸中三七皂苷R_(1)对照品的制备与分析研究

目的:企业自制三七皂苷R1对照品,并对其进行鉴别和纯度赋值。方法:以三七饮片为原料,采用多级色谱分离制备纯化得到三七皂苷R1对照品候选物;采用质谱、红外、紫外、元素分析对其进行结构鉴定;采用质量守恒法对其进行纯度赋值。结果:分离制备得到三七皂苷R1作为对照品候选物,经均一化、表征、赋值、得到自制对照品。结论:所建立的分离纯化方法简便,对照品纯度高,质量均一稳定,可以作为自制对照品用于复方丹参滴丸质量控制。

HPLC法测定丹参益心胶囊中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)、三七皂苷R_(1)的含量

目的:研究丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。方法:采用高效液相色谱法HPLC测定三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。结果:三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)三者的加样回收率R_(1)为99.7%、Rg_(1)为99.8%、Rb_(1)为97.6%,RSD分别为1.6%,1.1%,1.1%(n=6)。结论:该方法简便,灵敏,重现性好,可作为丹参益心胶囊中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量测定的方法。

三七皂苷R_(1)干预肾脏氧化应激和Nrf2/HO-1信号通路改善IgA肾病模型鼠肾损伤的作用和机制

为了探究三七皂苷R_(1)(notoginsenoside R_(1),NGR_(1))干预肾脏氧化应激和Nrf2/HO-1信号通路改善IgA肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)模型小鼠肾损伤的作用和机制,通过连续牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)灌胃、皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)蓖麻油、尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等综合措施建立IgAN小鼠模型,成模后,将IgAN模型鼠随机分为模型组,NGR_(1)低、中、高剂量组以及氯沙坦(losartan)组,并以C57BL6小鼠为正常对照。模型组、正常组使用磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)灌胃,NGR_(1)各组使用不同剂量NGR_(1)灌胃,氯沙坦组使用losartan灌胃,连续干预4周。末次给药后收集各组小鼠24 h尿液,动物实验结束时采集小鼠血清和肾组织标本。检测小鼠尿红细胞计数(urine red blood cell count,URBCC)、24 h尿蛋白、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的水平,ELISA检测小鼠血清中半乳糖缺陷的IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutropil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)水平,试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平,免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测肾小球系膜区谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达,Western blot检测肾组织中核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路蛋白表达,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察小鼠肾小球区域病理改变。结果显示,与模型组比较,NGR_(1)高剂量组血清Gd-IgA1水平、URBCC、24 h尿蛋白水平、肾损伤指标(Kim-1、NGAL)明显降低,肾功能指标(BUN、Scr)明显改善;肾脏组织中SOD活性、GPX4表达升高,而MDA下降,Nrf2和HO-1蛋白表达升高;同时,肾组织HE染色提示NGR_(1)高剂量组肾小球损伤明显减轻。总之,该研究阐明,NGR_(1)可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,提高机体抗氧化能力,降低肾脏氧化应激水平,而减轻IgAN模型鼠肾损伤。

三七皂苷R_(1)防治心血管疾病的研究进展

三七皂苷R_(1)为三七中特有成分,药理作用广泛。三七皂苷R_(1)通过抗炎、抗凋亡、改善能量代谢、抑制氧化应激、抑制心肌纤维化、抗心律失常、舒张血管和促血管生成等作用有效防治多种心血管疾病,如缺血性心脏病、动脉粥样硬化、高血压、心肌炎、心律失常、心肌肥厚和心力衰竭等。针对三七皂苷R_(1)在心血管疾病防治方面的分子机制研究进行综述,以期为进一步开发三七皂苷R_(1)的潜在治疗价值和临床应用发挥参考作用。

HPLC法同时测定腰息痛胶囊中3种活性成分含量

目的 建立HPLC法同时测定腰息痛胶囊中的三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。方法 采用Omini MP C_(18)(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.7 ml/min;检测波长为203 nm;柱温为25℃。结果 三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)分别在40.402~1010.500,40.480~1012.000,41.480~1037.000μg范围内呈线性关系(r<0.99);平均加样回收率分别为97.8%,97.5%,98.7%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性等试验均符合规定。结论 此法简便易行、结果科学,可为中西药复方制剂腰息痛胶囊中的3种皂苷类成分定量控制提供技术依据。

新甲伤药胶囊中三七的质量控制研究

目的制订新甲伤药胶囊的质量控制标准。方法采用高效液相色谱法梯度测定新甲伤药胶囊中活性成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)及三七皂苷R_(1)的含量。结果人参皂苷Rg_(1)进样浓度在0.0602 mg/mL~0.6024 mg/mL,人参皂苷Rb_(1)浓度在0.0604 mg/mL~0.6040 mg/mL、三七皂苷R_(1)进样浓度在0.0240 mg/mL~0.2400 mg/mL范围内呈良好的线性关系(R^(2)>0.999);其精密度、重复性、稳定性的RSD<2%;平均加样回收率分别为99.57%(RSD=0.48%)、100.01%(RSD=0.63%)、99.22%(RSD=0.75%)。结论此方法简便可靠,结果稳定,重复性良好,可用于对新甲伤药胶囊中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)及三七皂苷R_(1)的质量进行有效控制。

三七总皂苷传递体中5种皂苷类成分含量与包封率的测定研究

目的建立三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)传递体(transfersomes,TFSs)(PNS-TFSs)中5种皂苷类成分含量与包封率的测定方法,并探讨药物包封特性。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法测定PNS-TFSs制剂中三七皂苷R_(1)(NGR_(1))、人参皂苷Rg_(1)(GRg_(1))、人参皂苷Re(GRe)、人参皂苷Rb_(1)(GRb_(1))与人参皂苷Rd(GRd)的含量,色谱柱为Hypersil Gold柱(100 mm×2.0 mm,1.9μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,检测波长为203 nm,柱温为28℃。以离心超滤法结合UPLC测定传递体包封率。结果NGR_(1)、GRg_(1)、GRe、GRb_(1)与GRd对应的各色谱峰专属性与分离度良好(R≥1.5),且分别在4.04~505.00、3.98~498.00、4.03~504.00、3.99~499.00、4.00~500.00μg/mL呈良好的线性关系(r≥0.9997),精密度(RSD≤2.40%)、准确度(97.23%≤回收率≤104.50%)与供试品溶液稳定性(RSD≤0.90%)均符合要求;测得PNS传递体中NGR_(1)、GRg_(1)、GRe、GRb_(1)与GRd质量浓度依次为98.14、380.80、41.68、317.50、75.61μg/mL,包封率依次为75.48%、69.68%、69.51%、92.35%、95.97%。结论UPLC法与离心超滤法可用于PNS传递体中多成分含量与包封率的测定,方法快速、准确、可靠。

“伤科要药”三七在骨伤与创伤中的研究进展

三七是临床伤科疾病的常用中药,有散瘀止血、消肿定痛之效,历代中医古籍对其性味归经、功效主治的论述大同小异,现代研究发现三七具有活血、止血、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等药理活性,主要活性成分为皂苷类。伤科疾病是指人体因跌打坠堕、扭伤劳损、碰撞闪挫等原因而引起的皮肉、筋骨、脏腑、气血等损伤,主要包括挫伤、创伤、软组织损伤、骨折及内伤等临床常见疾病。通过整理历代本草和现代文献中关于三七“伤科要药”功效的相关记载,对其在骨损伤修复、活血化瘀、止血、抗炎镇痛、伤口愈合等方面的药理作用及机制进行归纳梳理,为其深入开发和临床应用提供参考。

地黄除痹乳膏的质量标准研究

目的建立地黄除痹乳膏的质量标准。方法用薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)鉴别地黄除痹乳膏中地黄、当归、三七;用双波长高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定梓醇、地黄苷D、阿魏酸、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。结果TLC特征斑点清晰,且阴性样品无干扰。梓醇、地黄苷D、阿魏酸、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)质量浓度分别在9.82~157.12、11.88~190.08、2.68~42.88、10.64~170.24、24.24~387.84、20.88~334.08μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系良好(r≥0.9993);平均回收率分别为96.89%、100.60%、104.32%、98.62%、101.76%、95.87%,RSD均小于1.5%。结论建立的鉴别及含量测定方法准确、可靠,可用于地黄除痹乳膏的质量评价。

血塞通片中5种成分溶出行为的研究

目的 考察血塞通片中三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、人参皂苷Rd的溶出行为。方法 采用小杯法,以水、醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液为溶出介质,转速50 r/min。采用HPLC法测定5种成分溶出量,相似因子法进行评价,拟合溶出模型。结果 以水为溶出介质时,各成分60 min时溶出达到平衡,累积溶出量最大;醋酸盐为溶出介质时,各成分60 min后仍有释放;磷酸盐为溶出介质时,各成分60 min时溶出达到平衡。不同批次样品在水中的累积溶出度较一致,而在另外2种含盐缓冲液中差异较大。Weibull方程拟合效果最好。结论 不同厂家、不同批号血塞通片质量一致性较差,需引起关注。

基于UPLC-Q TOF MS/MS和HPLC的祛瘀散结胶囊的化学成分分析及其多成分含量测定

目的:应用液质联用法分析祛瘀散结胶囊的化学成分,构建祛瘀散结胶囊中有效成分的含量测定方法。方法:采用超高效液相色谱-三重四极杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q TOF MS/MS)技术,色谱柱为Hypersil Gold C_(18)(100 mm×2.1 mm, 1.9μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.4 mL·min^(-1),柱温40.0℃,质谱数据采集为负离子模式扫描;通过数据库匹配、元素组成和碎片结构分析,鉴定祛瘀散结胶囊中的主要化学成分。另外,采用HPLC,色谱柱为Ultimate?AQ-C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长203 nm;以外标法计算,测定了11个不同批次祛瘀散结胶囊中的柚皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量,并以人参皂苷Rg_(1)为内参物,建立一测多评法。结果:从祛瘀散结胶囊中鉴定出29个化合物;外标法测得柚皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量分别为0.484~1.097、0.341~0.618、1.685~2.399、5.748~8.386、3.868~5.898 mg·g^(-1),一测多评法测得的柚皮苷、新橙皮苷、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量分别为0.516~1.153、0.372~0.667、1.794~2.580、4.373~6.690mg·g^(-1),一测多评法计算值与外标法实测值之间相对误差≤8.9%。结论:UPLC-Q TOF MS/MS法能快速鉴定祛瘀散结胶囊的化学成分;建立的外标法稳定可靠,可用于祛瘀散结胶囊的质量控制;以人参皂苷Rg_(1)为内参物建立的一测多评法有较好的可行性,适用于祛瘀散结胶囊日常生产的含量测定。

痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎的药效研究及网络机制预测

目的 基于Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠模型和网络药理学方法探讨痹祺胶囊的药效作用及作用机制。方法 SD大鼠采用Ⅱ型胶原蛋白造模,造模成功大鼠随机分为模型组,痹祺胶囊(0.05、0.10、0.20、0.40 g/kg)组及泼尼松(10 mg/kg)组和雷公藤总苷(10 mg/kg)组,连续给药15 d。持续监测大鼠体质量、足趾肿胀度和关节炎评分,苏木素-伊红染色考察大鼠踝关节病理变化,ELISA法测定血清细胞因子含量,初步评价痹祺胶囊治疗效果。选择痹祺胶囊中39个化合物为研究对象,依据反向药效团匹配方法和TCMSP、Uniprot等数据库预测化合物作用靶点,与通过OMIM、Dis Ge Net等数据库收集的RA相关靶点相互交互,将交互靶点借助Omicsbean、STRING等数据库平台对获得靶点进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,利用Cytoscape软件构建“药材-化合物-靶点-通路-功效-疾病”网络,预测其可能的作用机制。结果 与对照组比较,模型组大鼠活动、饮食减少,足趾肿胀、关节呈急性炎症表现,关节炎评分显著增加(P<0.01),血清中类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平均显著增加(P<0.05、0.01、0.001),IL-10水平降低,脾脏、胸腺指数显著增加(P<0.01、0.001),病理显示膝关节可见滑膜细胞增生、炎性细胞浸润,骨与软骨被侵蚀。与模型组比较,痹祺胶囊组大鼠踝关节病变情况得到不同程度改善,具体可见足肿胀度、关节炎评分显著降低(P<0.05、0.01),血清中RF、IL-17、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平显著降低(P<0.05、0.01、0.001),IL-10水平增高,脾脏、胸腺指数降低(P<0.05、0.01),踝关节骨、软骨组织损伤减轻,炎性细胞浸润、滑膜结缔组织增生减少。网络药理学预测发现,痹祺胶囊39个成分与RA交集靶点共371个。蛋白质-蛋白质相互作用网络分析结果显示,IL-6、白蛋白、TNF、血管内皮生长因子A、基质金属蛋白酶9、趋化因子配体8等124个靶点可能是痹祺胶囊治疗RA的关键靶点。KEGG通路富集分析获得IL-17信号通路、Toll样受体信号通路、Th1和Th2细胞分化、VEGF信号通路、瞬时受体电位通道的炎症介质调节、Wnt信号通路、血小板激活等80条信号通路,与免疫调控、抗炎、抑制血管翳生成、成骨/破骨细胞平衡等过程相关。对网络进行分析发现痹祺胶囊治疗RA具有多成分、多靶点、多途径的特点,其中单体成分士的宁、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_(A)、丹酚酸B、异甘草素、迷迭香酸、阿魏酸等可能为痹祺胶囊的关键药效物质基础。结论 痹祺胶囊对Ⅱ型胶原诱导的RA大鼠模型治疗效果较好,可能通过抗炎、免疫调节、血管生成、骨形成/侵蚀平衡等发挥治疗作用,体现了痹祺胶囊治疗RA多成分、多靶点、多通路的特点。

神效散巴布剂的体外透皮吸收研究

目的比较神效散散剂和巴布剂的透皮吸收效果。方法采用HPLC法测定神效散散剂和巴布剂中血竭素、三七皂苷R_(1)。使用扩散池装置,以离体小鼠皮肤为屏障进行体外透皮吸收研究,比较神效散巴布剂和散剂中血竭素、三七皂苷R_(1)的累积渗透量、渗透速率。结果神效散散剂和巴布剂中血竭素、三七皂苷R_(1)累积渗透量随着时间的增加而增大,且两种成分的累积渗透量:巴布剂>散剂;渗透速率:巴布剂>散剂。结论与神效散散剂比较,神效散巴布剂具有更强的透皮吸收效果。

HPLC-VWD-ELSD法同时测定黄甲软肝颗粒中6个成分的含量

目的:采用高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-VWD-ELSD)法同时测定黄甲软肝颗粒中没食子酸、葛根素、芍药苷、三七皂苷R_(1)、黄芪甲苷和丹参酮Ⅱ_(A)的含量。方法:采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1)。没食子酸、葛根素和丹参酮Ⅱ_(A)采用VWD进行检测,检测波长为270 nm;芍药苷,三七皂苷R_(1)和黄芪甲苷采用ELSD进行检测,漂移管温度为70℃,载气流速2.0 L·min^(-1)。结果:没食子酸、葛根素、芍药苷、三七皂苷R_(1)、黄芪甲苷和丹参酮Ⅱ_(A)进样量分别在1.444-28.88、2.118-42.36、1.074-21.48、0.2180-4.360、0.1151-2.302和0.06670-1.334μg范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为93.8%、98.8%、97.5%、103.0%、100.6%和96.6%,RSD分别为1.4%、0.55%、3.3%、4.0%、3.9%和2.3%。5批黄甲软肝颗粒中上述6个成分的含量测定结果分别为2.612-3.203、9.155-10.342、7.044-9.863、0.622-0.841、1.529-1.697和0.719-0.957 mg·g^(-1)。结论:所建立的方法简便、快捷,重复性好,可用于黄甲软肝颗粒中6个成分的含量测定,为黄甲软肝颗粒全面的质量控制提供科学依据。