三七茎叶皂苷对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究三七茎叶皂苷对大鼠离体心脏缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及其作用机制。方法 SD大鼠36只,随机分为6组(n=6),分别是空白对照组、模型组、阳性给药组(地奥心血康70 mg.kg-1)、三七茎叶皂苷低、中、高剂量组(20、40、80 mg.kg-1)。阳性给药组和三七茎叶皂苷给药组大鼠每日灌胃给药1次,连续给药7 d,空白对照组和模型组同时给予同体积生理盐水。末次给药60 min后,分离心脏置于Langendorff离体灌流装置上,平衡15 min后,全心停灌25 min,再灌注60 min,造成心肌缺血/再灌注损伤模型。于大鼠左心房插入水囊导管,记录三七茎叶皂苷对血流动力学指标的影响,测定再灌注60 min后灌流液中乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)的活性及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、LDH、CK活性及丙二醛(MDA)的含量。HE染色观察组织形态学改变。结果三七茎叶皂苷不同剂量组(20、40、80 mg.L-1),可明显改善缺血/再灌注所致大鼠的心功能损伤,减少灌流液中LDH、CK释放和组织中MDA的产生,增加SOD、GSH-Px的活性。HE染色结果显示,阳性给药组与三七茎叶皂苷高、中、低剂量组均不同程度的减轻了I/R造成的心肌损伤。结论三七茎叶皂苷对心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与改善心肌舒缩功能,清除氧自由基,减少脂质过氧化反应有关。

三七茎叶皂苷对麻醉犬急性心肌缺血的保护作用

目的:研究三七茎叶皂苷(PNSSL)对麻醉犬急性心肌缺血的保护作用。方法:采用结扎冠状动脉前降支的方法,造成犬急性实验性心肌缺血模型;超声多普勒方法测定心肌血流量;用心外膜电图描记和硝基蓝四唑(N-BT)组织化学染色方法计算心肌缺血程度及梗死面积;放射免疫法测定血浆内皮素(ET)和血栓烷素B2(TXB2)的含量。结果:PNSSL能明显减轻由心外膜电图标测的心肌缺血程度;缩小经N-BT染色所显示的梗死区;显著增加缺血心脏的心肌血流量;对心肌缺血及心肌梗死引起的血浆ET和TXB2的含量有明显抑制作用。结论:PNSSL对犬急性心肌缺血和心肌梗死有明显的保护作用,可能与抑制ET,TXA2的释放,增加心肌血流量,从而改善受损心脏的功能等机制有关。

从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷C-Mx1和Rb3

利用两步硅胶柱层析法,从三七茎叶皂苷中分离纯化人参皂苷Rb3和C-Mx1单体。30g三七茎叶皂苷,经分离得到纯度为50%~60%的粗品C-Mx1 4.66g和Rb3 8.58g;将C-Mx1和Rb3粗品皂苷进行二次硅胶柱分离,得到纯度为95%的C-Mx1单体0.92g和Rb3单体3.1g。以核磁共振法证明了分离产物为C-Mx1和Rb3皂苷。

三七茎叶皂苷对大鼠离体工作心脏血流动力学的影响

目的:研究三七茎叶皂苷(PnGL)对离体大鼠工作心脏血流动力学指标的影响。方法:采用Langendorff离体心脏灌流方法,以左室内压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)、心率(HR)等血流动力学参数为指标,观察PnGL灌流30min^120min对心脏血流动力学的影响。结果:中、高剂量(10mg/L、30mg/L)PnGL灌流30min^120min可使LVSP、LVDP、+dp/dtmax明显升高,同时使HR明显减慢,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。对LVEDP及-dp/dtmax虽有改善趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PnGL对离体工作心脏具有正性肌力和负性频率作用。

三七茎叶皂苷对大鼠离体心肌凋亡的保护作用

为了研究三七茎叶皂苷(PnGL)对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型心肌细胞凋亡的保护作用机制,采用TUNEL和免疫印迹(Western blot)蛋白方法检测细胞凋亡及凋亡基因蛋白Bcl-2、Bax、ERK1/2等相关凋亡通路,观察PnGL对心脏缺血/再灌注损伤后心肌细胞凋亡的保护作用机制。TUNEL结果显示,正常细胞核形态大小较为一致、荧光较弱,而凋亡细胞核呈高亮;空白对照组可见少量TUNEL阳性细胞;模型组阳性细胞显著增加;给予PnGL后凋亡细胞所占比例随着药物浓度的增加而明显下降。Western blot实验结果显示,与空白对照组比较,缺血/再灌注组中心肌细胞Bcl-2表达明显降低,Bax表达明显增加,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显降低;给予PnGL后,Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显升高。因此,PnGL对缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其保护作用可能与激活ERK1/2细胞凋亡保护通路、从而调节Bcl-2和Bax的表达有关。

三七茎叶总皂苷抑制七氟醚诱导的海马神经元凋亡机制研究

目的探讨三七茎叶总皂苷(PNSLS)调节七氟醚诱导海马神经元凋亡的作用机制。方法以不同剂量七氟醚(0,4.1%,8%)干预小鼠海马神经元细胞系HT22,使用不同质量浓度的PNSLS(1.5,3.0,6.0,12.0μg/mL)预处理神经元。将HT22细胞分为对照组、暴露于4.1%七氟醚的细胞组(4.1%Sev组)、使用6μg/mL PNSLS对细胞进行预处理1 h后将细胞暴露于4.1%七氟醚组(4.1%Sev+PNSLS组)、在PNSLS处理前1 h加入丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活剂anisomycin(An)再暴露于七氟醚和PNSLS的共培养组(4.1%Sev+PNSLS+An组)。通过CCK-8法检测神经元活力,流式细胞术及免疫印迹(Western blot)法检测海马神经元凋亡,比色活性测定试剂盒测定胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性,Western blot法测定内质网应激相关蛋白及p38 MAPK/核转录因子-κB p65(p38 MAPK/NF-κB p65)信号通路相关蛋白的表达水平。结果4.1%七氟醚显著抑制海马神经元活力(P<0.05),6μg/mL PNSLS显著升高神经元活力并抑制海马神经元凋亡(P<0.05)。与Sev组比较,Sev+PNSLS组细胞中凋亡蛋白Bax表达水平显著降低(P<0.05),B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl-2)表达水平显著升高(P<0.05),caspase-3活性显著降低(P<0.05);Sev+PNSLS组内质网应激诱导的凋亡信号通路相关蛋白78000葡糖调节蛋白(GRP78)、内质网应激相关蛋白(CHOP)表达水平均显著降低(P<0.01),p38和IκBα的磷酸化水平均显著降低(P<0.01),细胞质中NF-κB p65水平显著升高(P<0.01),细胞核中NF-κB p65水平显著降低(P<0.01)。与Sev+PNSLS组比较,Sev+PNSLS+An组p38和IκBα的磷酸化水平均显著升高(P<0.01),细胞质中NF-κB p65水平显著降低(P<0.01),细胞核中NF-κB p65水平显著升高(P<0.01),海马神经元活力显著降低(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01)。结论PNSLS通过激活p38 MAPK/NF-κB p65信号通路抑制七氟醚诱导的神经元凋亡。

三七茎叶皂苷对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的研究三七茎叶皂苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌缺血的保护作用,并探讨其作用机制。方法将60只健康SD大鼠随机分为对照组、模型组、地奥心血康70 mg/kg组和三七茎叶皂苷20、40、80 mg/kg组,每组各10只。地奥心血康组和三七茎叶皂苷组大鼠每日ig给药1次,连续给药14 d。对照组和模型组在前11 d ig给予同等体积蒸馏水。模型组、地奥心血康组和三七茎叶皂苷组连续3 d sc盐酸异丙肾上腺素注射液(第1天,8 mg/kg;第2天,8 mg/kg;第3天,2 mg/kg)建立急性心肌缺血模型,对照组sc同体积生理盐水。检测大鼠血清和心肌组织中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测和丙二醛(MDA)含量,观察大鼠急性心肌损伤组织的病理学变化。结果与模型组比较,三七茎叶皂苷40、80mg/kg组大鼠血清中LDH、CK、AST活性显著降低,心肌组织中LDH、AST活性显著增高(P<0.05、0.01、0.001)。与模型组比较,三七茎叶皂苷80 mg/kg组大鼠血清中SOD活性显著增加,而40、80 mg/kg组MDA含量均显著降低(P<0.05);三七茎叶皂苷20、40、80 mg/kg组心肌组织中SOD活性显著增加(P<0.05、0.01、0.001),MDA含量显著降低(P<0.05)。三七茎叶皂苷80 mg/kg组可见轻度心肌纤维变性坏死灶,心肌纤维间可见少量炎性细胞浸润。结论三七茎叶皂苷通过降低受损心肌酶的释放,提高大鼠血清和心肌组织中SOD活性,降低MDA含量,从而发挥对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用,其机制可能与清除氧自由基损伤有关。

Fusarium sacchari转化三七茎叶皂苷中新化合物的分离和鉴定

目的利用甘蔗镰孢Fusarium sacchari对三七茎叶皂苷进行生物转化,以发现新的稀有抗肿瘤活性成分。方法转化产物通过硅胶、凝胶及液相色谱进行分离,得到化合物结构经波谱鉴定。结果分离得到了1个单体化合物,命名为三七皂苷-LZ(notoginsenoside-LZ),鉴定其化学结构为20(S)-3β-hydroxy-12β,23-epoxy-dammar-24-ene-20-O-β-D-xylopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside。结论三七皂苷-LZ(notoginsenoside-LZ)为一新化合物。

三七茎叶皂苷对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的研究三七茎叶皂苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)的保护作用。方法将24只SD大鼠随机分为4组:对照组、模型组、三七茎叶皂苷低剂量组及三七茎叶皂苷高剂量组,采用夹闭肾蒂方法制备RIRI模型,通过摘眼球方法取血,分析血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、尿酸(uric acid,UA)含量;光学显微镜下观察肾脏组织病理学变化;全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;试剂盒检测肾脏组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot检测核因子相关因子2(nuclear factor erythroid-related factor-2,Nrf-2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达。结果肾功能检测结果显示,与模型组比较,三七茎叶皂苷低、高剂量组BUN、Cr、UA水平降低(P<0.05);模型组肾小球细胞呈空泡变性,间质区可见炎性细胞浸润,三七茎叶皂苷改善了肾脏组织病理性形态学变化;三七茎叶皂苷低、高剂量组肾脏组织匀浆中SOD、CAT活力升高,MDA含量降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,三七茎叶皂苷显著上调了靶向抗氧化基因Nrf-2和HO-1的表达(P<0.05)。结论三七茎叶皂苷通过激活Nrf-2/HO-1信号通路对RIRI损伤发挥肾脏保护作用。

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb_1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法。方法：色谱柱为BDSHYPERSUL C18（150 mm×2.1 mm,5μm）柱;流动相：乙腈-水（梯度洗脱）;柱温：30℃;质谱条件：采用负离子多反应监测方法（MRM）测试;用于定量分析的对照品离子对为：人参皂苷Rb1m/z1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z852.5→525.3。结果：人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159~16.0μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求。结论：该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测。

三七茎叶总皂苷酶转化产物和C-K的抗肿瘤作用

目的:研究三七茎叶总皂苷酶转化产物和人参皂苷化合物K(C-K)的抗肿瘤作用。方法:利用β-葡聚糖苷酶转化三七茎叶总皂苷,转化产物经大孔吸附树脂富集和纯化,硅胶柱层析及制备薄层层析分离纯化后得到C-K。观察酶转化产物和C-K对S180肿瘤细胞生长的抑制作用及对艾氏腹水癌小鼠生存期的影响。结果:三七茎叶总皂苷酶转化产物和C-K的抑瘤率分别为41.8%和44.7%;对艾氏腹水癌小鼠延长存活期分别为3.9d和4.6d。结论:三七茎叶总皂苷酶转化产物和C-K具有较强的抗肿瘤作用。

酶转化三七茎叶总皂苷制备稀有人参皂苷C-K

为了提高三七茎叶总皂苷的利用率和C-K酶转化得率,采用Aspergillus niger sp.G8菌所产酶与Aspergillus niger sp.G4菌所产酶的等体积混合酶(以下简称G8-G4混合酶),研究了酶转化三七茎叶总皂苷进而制备C-K的方法。结果表明,市销的三七茎叶总皂苷中,主要成分是人参二醇类皂苷,其中含量最多的皂苷是Rb3、C-Mx1、Rc和Fc,质量分数分别为26.38%、14.28%、12.73%、10.25%。G8-G4混合酶的最佳反应条件为45℃、p H 5.0、底物质量浓度25 g/L、反应24 h。三七茎叶总皂苷经G8-G4混合酶转化后得到4种产物为C-K、C-Mx、Fc、R7,其中C-K的转化得率为32.7%。

三七茎叶总皂苷对心肌缺血再灌注损伤保护作用研究

目的:研究三七茎叶总皂苷(PNSSL)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用,为PNSSL的开发利用提供基础。方法:将SD大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组40,80,160 mg·kg-1组、地奥心血康组,连续给药七天,末次给药后通过结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠缺血再灌注损伤模型。观察缺血再灌注大鼠II导联心电图ST段的变化情况,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积,测定大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,通过苏木精-伊红(HE)染色法观察缺血再灌心肌的病理形态。结果:与模型组相比,PNSSL各剂量组对于大鼠心电图ST段升高均具有降低作用,能够减少心肌梗死范围,其中PNSSL80,160 mg·kg-1组降低显著(P<0.05);PNSSL160 mg·kg-1剂量能够明显降低血清中心肌酶活性(P<0.05),PNSSL80 mg·kg-1显著升高心肌组织中SOD和GSH-Px的活性(P<0.05)。病理染色中,PNSSL组心肌组织间质水肿明显减轻,纤维排列整齐,心肌组织损伤降低。结论:三七茎叶总皂苷能够改善由缺血再灌注引起的心肌组织损伤,改善心电图变化,提高细胞膜稳定性,清除氧自由基,减少炎性浸润,具有心肌保护作用。

三七皂苷治疗神经系统疾病的临床应用

三七为传统常用中药,临床主用其根,用于各种内、外出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛等,现代研究发现它具有广泛的药理作用,三七茎叶功效与根相似。三七根及茎叶含大量皂苷成分,对神经系统疾病有明显的治疗作用。从临床应用的角度出发,笔者对三七根及茎叶有效成分在治疗神经系统疾病方面的研究进行了全面阐述,对其在临床上更科学、合理的使用及进一步研究开发具有一定的意义。

七叶神安滴丸对中枢神经系统的药效学研究

目的 :探讨七叶神安滴丸中枢神经的药理作用。方法 :采用小鼠扭体试验、光电法小鼠自法活动及戊巴比妥钠小鼠睡眠时间测定试验 ,观察七叶神安滴丸的镇痛、镇静、催眠作用。结果 :七叶神安滴丸不同剂量均可抑制小鼠的扭体痛反应、明显减少小鼠的自法活动、延长小鼠的睡眠时间。结论 :七叶神安滴丸具有镇痛、镇静。

人参土壤中活性微生物的筛选与稀有抗肿瘤成分的转化

目的:筛选人参土壤中的活性微生物,转化三七茎叶皂苷中稀有抗肿瘤成分。方法:采用从土壤中分离的菌株,对三七茎叶皂苷中稀有抗肿瘤成分进行微生物转化。结果:共筛选分得127株菌株,其中霉菌M14活性最强。确定最佳的生长条件为:时间3 d;温度30℃;摇床转数160 r/m in;培养基的初始pH值为5。结论:霉菌M14可转化三七茎叶皂苷生成稀有抗肿瘤成分。

20(R)-原人参二醇酸水解条件的工艺研究

目的:优化三七茎叶总皂苷的盐酸水解工艺,提高水解产物20(R)-原人参二醇[20(R)-protopanaxadiol,20(R)-PPD]的产率。方法:采用正交试验设计,考察料液比、盐酸浓度、水解时间、水解温度对三七茎叶总皂苷水解过程的影响。结果:影响水解的主次因素依次是盐酸浓度>料液比>水解温度>水解时间,优选的最佳工艺为料液比1∶1;盐酸浓度17.1mol·L-1,水解时间90min,水解温度50℃。结论:采用优化后的水解条件能够提高PPD的转化率,适合工业化生产。

复方丹参片的质量比较与分析

目的评价复方丹参片的质量。方法法随机抽取5个不同批次和3个厂家的复方丹参片进行三七茎叶皂苷的检查。结果发现有1个样品与标准规定不相符。结论对市售复方丹参片的质量进行生产监督是加强质控的关键。