三元基序家族蛋白15敲低诱导肝癌细胞周期阻滞

三元基序家族蛋白15(tripartite motif-containing protein 15,TRIM15)是TRIM家族成员,该家族是一类具有E3泛素连接酶活性的蛋白质。TRIM15在肿瘤中的功能鲜有报导。本研究意在阐释TRIM15在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用。核质分离和免疫荧光实验确定TRIM15定位于细胞核和细胞质中;设计发夹RNA(shRNA)在肝癌细胞系中对TRIM15进行敲低;敲低TRIM 15后,细胞生长曲线测定和克隆形成结果显示,细胞增殖受到显著抑制(P<0.05);流式细胞术检测细胞周期显示,敲低TRIM 15使细胞阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.05);而Western印迹检测在敲低TRIM 15后,细胞周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、Rb、P-Rb、E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)表达下调,而CDK抑制因子(cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI)p16、p21、p27表达显著上调。这些研究结果均证明,TRIM 15敲低诱导肝癌细胞周期阻滞,这表明,TRIM15可作为可行的治疗肝细胞癌的靶点。

转录因子SP1调控肝细胞癌中三元基序家族蛋白7基因表达的机制

三元基序家族蛋白7(tripartite motif-containing protein 7,TRIM7)作为E3泛素连接酶TRIM家族的成员,在免疫调控、代谢等生理过程中发挥重要调控作用。此外,TRIM7的异常表达与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展密切相关并呈现出复杂的调控作用,但其在HCC中的表达调控机制尚不清楚。本研究首先利用多种在线数据库分析发现,TRIM7在HCC中高表达,并且TRIM7高表达的肝细胞癌患者预后较差;利用UCSC、JASPAR数据库分析预测TRIM7基因启动子区的转录因子结合位点。结果显示,TRIM7启动子上含有4个特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)转录因子结合位点。本研究利用双荧光素酶报告实验、ChIP-PCR方法检测发现,SP1通过直接结合在TRIM7启动子上的SP1结合位点,从而正调控TRIM7启动子驱动的转录活性。RT-qPCR、Western印迹检测结果进一步显示,过表达SP1在mRNA和蛋白质水平均上调TRIM7基因的表达(P<0.01),且利用SP1抑制剂Mithramycin A处理能够逆转SP1对TRIM7基因表达的调控作用(P<0.01)。总之,本研究初步揭示了TRIM7在肝细胞癌中高表达的调控机制,为深入研究该基因功能以及早期诊断、靶向治疗提供重要的理论依据。

T细胞受体γ位点反义RNA 1、人抗原R、三元基序家族蛋白21、缺氧诱导因子-1α在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨T细胞受体γ位点反义RNA 1(TRG-AS1)、人抗原R(HuR)、三元基序家族蛋白21(TRIM21)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集103例结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TRG-AS1相对表达量。比较结直肠癌组织和癌旁组织中TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α的表达情况,分析TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况与结直肠癌患者临床特征和预后的关系。结果结直肠癌组织中TRG-AS1相对表达量及HuR、HIF-1α阳性率均明显高于癌旁组织,TRIM21阳性率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同分化程度、淋巴结转移情况、血管侵犯情况结直肠癌患者结直肠癌组织中TRG-AS1相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同浸润深度、TNM分期、淋巴结转移情况结直肠癌患者结直肠癌组织中HuR、TRIM21、HIF-1α阳性率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。至随访结束,TRG-AS1低表达患者的累积生存率为55.6%,高于TRG-AS1高表达患者的31.5%(P﹤0.05);HuR阴性患者的累积生存率为56.9%,高于HuR阳性患者的37.0%(P﹤0.05);TRIM21阴性患者的累积生存率为22.4%,低于TRIM21阳性患者的59.0%(P﹤0.05);HIF-1α阴性患者的累积生存率为72.0%,高于HIF-1α阳性患者的36.6%(P﹤0.05)。结论结直肠癌组织中TRG-AS1、HIF-1α及HuR表达均升高,TRIM21表达降低,TRG-AS1、HuR、TRIM21、HIF-1α表达情况与结直肠癌侵袭、转移及患者预后密切相关,对评估结直肠癌患者病情及预后具有一定的临床价值。

PAK2磷酸化激活TRIM28在前列腺癌进展中的作用机制研究

目的:研究P21蛋白活化酶2(p21-activated protein kinase 2,PAK2)在前列腺癌(prostate cancer,PCa)中的表达水平,并分析PAK2与PCa患者临床资料及PCa进展的相关性,进一步研究及分析PAK2磷酸化激活KRAB相关蛋白1即三重基序蛋白28(tripartite motif-containing 28,TRIM28)促进PCa进展的相关性,阐明PAK2在去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)进展中的作用关系,探讨PAK2磷酸化激活TRIM28通路在PCa进展中扮演的角色,为治疗CRPC提供方法和思路。方法:使用ONCOMINE数据库预测PAK2在PCa组织和癌旁正常组织中的表达差异。分别采用Western Blot和RT-qPCR检测PAK2在收集的临样本(癌旁正常组织和PCa组织)中的表达差异。采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测PAK2在前列腺增生(BPH)组织、激素性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer,HNPC)组织和CRPC组织中的表达差异,通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库预测PAK2的不同表达水平对患者疾病无进展的影响差异。使用医学统计学方法收集、整理、分析统计140例PCa患者的临床病理特征与PAK2的关系。利用GEPIA数据库预测TRIM28与PAK2在PCa中的相关性。采用Western Blot方法检测PAK2表达水平的不同对TRIM28的磷酸化水平的影响。结果:在数据库ONCOMINE中显示,PCa组织中PAK2的表达水平高于其在癌旁正常组织中的表达水平,与我们收集的临床组织中的检测结果一致。PAK2在PCa组织中的RNA表达水平高于癌旁正常组织的表达水平。同样PAK2在PCa组织中的蛋白表达水平高于癌旁组织的表达水平。IHC结果显示PAK2在BPH组织、HNPC组织和CRPC组织中的表达水平逐渐升高。TCGA数据库显示,PCa患者中PAK2低表达水平较高表达水平有一个较长的疾病无进展生存期。患者临床资料统计分析得出PAK2的表达水平与患者的PSA水平、Gleason评分、临床分期、病理分级、转移、总生存期及疾病的生化复发情况密切相关,患者的PSA水平越高,Gleason评分越高,临床分期及病理分期越高,PAK2的表达水平越高,患者越容易发生转移及生化复发,患者的生存期越短,反之亦然。GEPIA数据库显示,PAK2与TRIM28呈正向相关性。荧光素酶报告基因实验显示,只转染PAK2过表达组的SOX2启动子区活性最高。而转染PAK2过表达及敲低TRIM28组的SOX2启动子区活性低于只转染PAK2过表达组,但是明显高于对照组。结论:PAK2在PCa中表达水平显著高于癌旁正常组织,在CRPC中表达水平最高,并且PAK2的表达水平与患者的PSA水平、Gleason评分、临床分期、病理分级、转移、总生存期及疾病的生化复发情况密切相关,与患者年龄无关。PAK2表达水平可以影响SOX2的表达水平,说明PAK2可能调节肿瘤细胞的干性来影响疾病进展,PAK2可以磷酸化激活TRIM28,活化的TRIM28可以增强SOX2启动子区的活性,使肿瘤细胞的细胞学行为更为活跃。