大鼠三叉神经尾侧亚核内Fos及SP受体免疫反应神经元向丘脑腹后内侧核的投射

为了探讨三叉尾侧亚核（Ｖｃ）内向丘脑腹后内侧核（ＶＰＭ）直接投射的神经元与面口部伤害性刺激信息传递和ＳＰ能传入的关系，本研究用四甲基罗达明（ＴＭＲ）逆行追踪与Ｆｏｓ和ＳＰ受体免疫组织化学染色相结合的双标方法研究了Ｖｃ向ＶＰＭ投射的神经元。结果表明：（１）Ｆｏｓ阳性神经元主要分布在Ｖｃ浅层（Ⅰ、ⅠⅠ层）；（２）ＳＰ受体（ＳＰＲ）阳性神经元也主要分布在Ｖｃ浅层；（３）ＴＭＲ注射入一侧ＶＰＭ，逆标神经元仅见于对侧Ｖｃ和双侧延髓网状结构（ＭＲＦ）；（４）ＶｃⅠ层内ＴＭＲ逆标神经元总数的２２．３％为Ｆｏｓ阳性，１１．７％为ＳＰＲ阳性；（５）Ｖｃ深层内ＴＭＲ逆标神经元总数的１３．１％为Ｆｏｓ阳性，８．５％为ＳＰＲ阳性；（６）ＭＲＦ内ＴＭＲ逆标神经元总数的４３．３％为Ｆｏｓ阳性，５．１％为ＳＰＲ阳性。上述结果提示：（１）Ｖｃ及ＭＲＦ内直接向ＶＰＭ投射的部分神经元感受面口部伤害性刺激信息；（２）ＶｃⅠ层内直接向丘脑投射的部分神经元可能接受外周ＳＰ能的初级传入。

大鼠三叉神经节及尾侧亚核内降钙素基因相关肽在面口部伤害性刺激时的动态变化

为了探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在面口部伤害性刺激条件下合成、运输和释放的规律，将福尔马林注入大鼠一侧口周皮下，分别于刺激后不同时间取材，用原位杂交和免疫组织化学方法观察ＣＧＲＰｍＲＮＡ及ＣＧＲＰ样阳性结构（ＣＧＲＰ－ＬＩ）在三叉神经节（ＴＧ）和三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内的动态变化。原位杂交结果显示：ＴＧ内表达ＣＧＲＰ的两种亚型α－ＣＧＲＰ和β－ＣＧＲＰｍＲＮＡｓ神经元的数量分别于福尔马林刺激后２ｈ和４ｈ有明显增加，８ｈ达到高峰，然后渐下降，至４８ｈ后恢复至正常。免疫组织化学结果显示：Ｖｃ浅层ＣＧＲＰ－ＬＩ的含量在刺激后１ｈ内明显减少，２ｈ后渐增，１２ｈ达到高峰，２４ｈ后趋向正常。ＴＧ内ＣＧＲＰ－ＬＩ神经元的数量在刺激后１ｈ内也明显减少，此后逐渐回升至正常并有轻度增加，但与正常间无明显差异。

辣椒素处理对电针“四白”穴诱导三叉神经脊束核尾侧亚核c-fos表达的影响

目的:探讨四白穴针刺效应的传入途径。方法:SD大鼠36只,随机分成空白组、假手术组、辣椒素组、溶媒组、电针"四白"穴+辣椒素组、电针"四白"穴+溶媒组。游离一侧眶下神经,辣椒素组将浸泡有1.5%辣椒素的棉条包绕在眶下神经上。溶媒组用浸泡在溶媒中的棉条包绕在眶下神经上。采用免疫组化技术观察三叉神经脊束核尾侧亚核(cSTN)的c-fos表达。结果:空白组在cSTN各层可见到零星、散在的阳性细胞。溶媒组、辣椒素组以及假手术组cSTN的c-fos阳性细胞数与空白组相似。电针"四白"穴+溶媒组c-fos在cSTN内主要集中在浅层(Ⅰ-Ⅱ层),其阳性细胞的数量明显多于其余各组(P<0.01);cSTN的深层(Ⅲ-Ⅳ层)c-fos数量多于空白组、溶媒组和假手术组(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。电针"四白"穴+辣椒素组cSTN的Ⅰ-Ⅱ板层的c-fos阳性细胞数与电针"四白"穴+溶媒组相比明显减少(P<0.01),但cSTN的Ⅲ-Ⅳ板层的c-fos阳性细胞数与电针"四白"穴+溶媒组相比无明显变化(P>0.05)。结论:C纤维可能是四白穴针刺效应(调节胃功能活动)的主要传入途径。

痛刺激后大鼠三叉神经尾侧亚核星形细胞和神经元相互关系的电镜观察

目的 :观察大鼠上唇皮下注射福尔马林后 ,三叉神经尾侧亚核 (Sp5C)内反应性星形细胞和神经元之间相互关系的超微结构。 方法 :用DAB染色的抗胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、抗connexin4 3(Cx4 3)和金颗粒标记抗Cx32双标记免疫电镜方法。结果 :电镜下观察到Sp5C内反应性星形细胞和神经元之间存在 4种联系结构 :第一种是突触样结构 ;第二种是三成分的突触复合体 ;第三种是缝隙连接 ;第四种是由Cx32和Cx4 3构成的异源性缝隙连接 (HGJ)。HGJ表现为两侧膜增厚 ,Cx4 3阳性物质和Cx32阳性金颗粒分别位于星形细胞和神经元一侧 ,痛刺激后HGJ数量明显增加。 结论 :神经元和星形细胞之间有多种信息通道 ,HGJ可能是一种快速、适应性信息通道。Sp5C星形细胞可能通过HGJ调节神经元的活动 ,共同参与中枢神经系统对刺激反应的调节。

大鼠三叉神经尾侧亚核内星形胶质细胞对疼痛刺激的反应及与神经元的关系

目的 研究大鼠三叉神经尾侧亚核 (Sp5C)星形胶质细胞对唇下注射福尔马林所致疼痛的反应及其与神经元的关系。 方法 用免疫组织化学方法 ,显示注射后不同时间Sp5C星形胶质细胞与神经元内抗磷脂酶C(PLC)、抗Fos和抗胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组织化学产物的表达和分布。 结果 正常大鼠Sp5C无免疫组织化学阳性染色 ,唇下注射福尔马林后 ,Sp5C内的星形胶质细胞出现抗PLC、抗Fos和抗GFAP阳性染色 ,神经元出现抗PLC和抗Fos阳性染色 ,且有相同的亚核分布 ,关系密切。抗PLC和抗Fos免疫组织化学阳性先出现于星形胶质细胞 ,而后在神经元出现表达。 结论 Sp5C内星形胶质细胞可能参与中枢神经系统对疼痛刺激的调节 ,并主动调节神经元的活动。

三叉神经根慢性压迫损伤对大鼠三叉神经尾侧亚核内WDR神经元电活动的影响

目的:观察三叉神经根慢性压迫损伤对大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核(caudal subnucleus of the spinaltrigeminal nucleus,Vc)内广动力范围(wide dynamic range neurons,WDR)神经元自发放电和诱发放电活动的影响。方法:通过慢性压迫损伤三叉神经根的方法建立三叉神经痛(TN)动物模型,采用在体细胞外记录技术观察空白对照组和TN模型组大鼠Vc内WDR神经元的自发放电和诱发的放电活动。结果:对照组和TN模型组大鼠Vc内WDR神经元自发放电频率分别为0.84±0.15 Hz和3.18±0.59 Hz;口面部感受野分别给予刷、压、夹机械刺激后,对照组大鼠Vc内WDR神经元的诱发放电频率分别为3.27±1.28 Hz、5.62±0.74 Hz和6.76±1.22 Hz,而TN组大鼠诱发放电频率则分别为7.85±1.57 Hz、10.04±0.72 Hz和12.04±1.77 Hz。结论:TN模型组大鼠Vc内WDR神经元的自发放电频率和诱发放电频率均显著高于对照组大鼠,提示三叉神经根慢性压迫损伤可诱导Vc内WDR神经元兴奋性增强。

三叉神经脊束核尾侧亚核星形胶质细胞对咬合创伤的反应

目的:观察大鼠咬合创伤后三叉神经脊束核尾侧亚核(Sp5C)内星形胶质细胞的反应,探讨星形胶质细胞在咬合创伤中的作用。方法:用方丝将大鼠左侧上颌第一磨牙咬合抬高0.5mm,形成左侧磨牙早接触的创伤咬合。粘固后1,3,7,14,30d取三叉神经脊束核尾侧亚核,免疫荧光染色观察星形胶质细胞在三叉神经脊束核尾侧亚核的表达变化。结果:对照组见少量胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞呈散在分布,咬合创伤3d时,实验侧GFAP阳性面积增加,荧光强度增强;7d时达到高峰,14d组GFAP阳性反应产物开始减少。结论:咬合创伤激活了星形胶质细胞,提示星形胶质细胞在口颌面痛产生及维持中发挥作用。

面部皮下福尔马林注射致大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核c-fos和GFAP表达的动态变化

目的:观察福尔马林致炎性鼠中枢三叉神经尾侧亚核(Sp5C)c-fos和胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrilary acidic protein GFAP)表达的动态变化。方法:选择体重200-250g健康SD大鼠,在左上唇皮下注射2.5%福尔马林50μl建立炎性痛模型。分别在注射后30,60,120,240,360min等时间点处死,每组6只。免疫荧光染色观察各组大鼠同侧Sp5C核c-fos和GFAP表达的情况。结果:在面部皮下注射福尔马林后,fos阳性(fos-immunoreactivity,Fos-IR)神经元在注射后30分钟即可观察到,120分钟达到峰值,到360分钟观察结束仍有较高的表达。GFAP-IR在福尔马林注射后30分钟即有较高表达,60分钟达峰值后下降,240分钟即恢复到正常水平,二者分布区域相同。结论:在福尔马林致炎性痛模型中Sp5C内神经元和星形胶质细胞共同参与中枢神经系统对炎性疼痛刺激的调节,星形胶质细胞可能对神经元的活动有调节作用。

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。

咬合创伤下大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核星形胶质细胞的反应及其与细胞因子的关系

目的:观察咬合创伤时大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核(Sp5C)中胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及白介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNFα)、一氧化氮合酶(nNOS)mRNA的表达变化,探讨星形胶质细胞及细胞因子在咬合创伤中的作用。方法:将大鼠左侧第一磨牙咬合抬高0.5mm,造成对颌牙的创伤。粘固后1、3、7、14、30d时取三叉神经脊束核尾侧亚核,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Sp5C中GFAP,IL-1,TNFα,nNOSmRNA的表达变化。结果:(1)创伤后1dGFAP,IL-1,TNFαmRNA表达即上调,3d时达到峰值,三者呈现相关性一致变化规律,以后虽有下调,仍高于对照组。(2)nNOSmRNA创伤后1d表达上调,14d时达峰值。结论:咬合创伤能导致Sp5C中GFAP,IL-1,TNFα,nNOSmRNA表达上调,且GFAP,IL-1,TNFαmRNA呈现一致性相关变化规律,提示星形胶质细胞及细胞因子参与了咬合创伤的调节过程。

谷氨酸样阳性神经终末和NMDAR_1、GluR_1在大鼠三叉脊束核尾侧亚核的分布

目的 :显示三叉神经脊束核尾侧亚核 (Vc)中谷氨酸 (Glu)样阳性神经终末和NMDAR1、GluR1的分布 ,观察两者是否匹配 ,从而证明其在牙痛信息初级传入中的可能作用。方法 :取大鼠延髓切片 ,采用免疫组化方法进行Vc中Glu样阳性神经终末和NMDAR1、GluR1的呈色。结果 :Glu样阳性神经终末和NMDAR1、GluR1免疫反应阳性产物均主要分布在Vc的Ⅰ、Ⅱ层。结论 :牙痛信息初级传入的过程中 ,Glu很可能起着兴奋性递质的作用 ,其离子型受体与伤害性信息传递密切相关。

实验性牙移动后三叉神经脊束核尾侧亚核CGRP的研究

目的: 研究实验性牙移动过程中,三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)内降钙素基因相关肽(CGRP)的改变。方法:在大鼠左侧上颌第一、二磨牙间塞入一弹性橡皮圈模拟临床正畸加力状态。于不同加力时间点对三叉神经脊束核尾侧亚核进行CGRP免疫组化染色。结果: 加力后6h和24h,实验侧三叉神经脊束核尾侧亚核CGRP样纤维明显少于对侧;施力3d后Vc浅层中CGRP 样阳性终末与对照侧无明显差异,加力后1w大于对侧,2w时恢复至对侧水平。结论:实验性牙移动引起CGRP在三叉神经脊束核尾侧亚核释放。

猫背中缝核向三叉神经脊束核尾侧亚核的投射——HRP法研究

向6例猫右侧三叉神经脊束核尾侧亚核注入30%HRP溶液,观察和分析背中缝核内出现的标记细胞状况。发现标记细胞较集中于核的中段及稍偏吻侧部,向吻尾方向逐渐减少,靠近尾端部全无标记。标记细胞主要出现于核的腹侧部及两外侧部腹缘处,核的背侧部及外侧部的背侧部分甚少,两侧无差别。标记细胞形态多样,但腹侧部及外侧部腹缘处以梭形细胞为主,此处标记也最多。除背中缝核外,脑干尾侧中缝核群(大中缝核、苍白中缝核、隐中缝核)也出现少量标记细胞。结合文献分析,作者等推论背中缝核向尾侧亚核的投射可能与大中缝核向脊髓后角的投射意义相同,两者之间显示着既有分工又有联系的体部定位关系,即背中缝核以向三叉神经脊束核投射为主,也发出少量纤维向脊髓后角投射;以大中缝核为主的脑干尾侧中缝核群主要投射向脊髓后角,但也发出少量纤维投射于三叉神经脊束核。

咬合创伤对三叉神经脊束核尾侧亚核c-fos的影响

目的:观察三叉神经脊束核尾侧亚核(Sp5C)中c-fos(核磷酸蛋白原癌基因)对咬合创伤的反应,探讨神经元在咬合创伤中的功能变化。方法:将直径0.5mm方丝粘固于大鼠左侧上颌第一磨牙,形成左侧磨牙早接触的创伤咬合,观察咬合创伤后1,3,7d,2w,4w,5w时Sp5C中c-fos蛋白的表达变化。结果:正常大鼠Sp5C中偶见极少量c-fos阳性神经元细胞,咬合创伤后7d,c-fos阳性神经元明显增加,2w时达到高峰,4w时开始下降。结论:咬合创伤刺激诱导了Sp5C中神经元的激活。

三叉神经尾侧亚核大颗粒小泡的非突触部位胞吐及膜再循环的形态观察

在切除大鼠刚髭部皮肤的刺激下,从常规醛-锇酸固定的三叉神经脊束核尾侧亚核的超薄切片中观察到:1.大颗粒小泡轴突终末非突触部位的胞吐影像;2.含致密物质的大有衣小泡,由终末质膜内陷而成,提示大颗粒小泡在终末通过有衣小泡进行膜再循环;3.大颗粒小泡也可由含致密物质的平滑内质网样的管状结构形成。本研究支持大颗粒小泡在非突触部位,通过胞吐释放递质或神经调节物的假说。

骨形成蛋白-2 mRNA在咬合创伤大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核的表达变化

目的:研究咬合创伤大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)内骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA的表达变化。方法:于大鼠右上第一磨牙粘结方丝,抬高咬合0.5-0.8mm,建立1、3、7、14、28d组咬合创伤模型,通过拍摄X线片及HE染色观察牙周组织的损伤程度,实时荧光定量PCR(QPCR)观察各大鼠Vc内BMP-2 mRNA的表达及变化。结果:咬合创伤第1天BMP-2表达下调,第3、7、14d BMP-2表达持续上调,28d组BMP-2表达量下调趋于正常水平,14d组表达量最高(P<0.05)。结论:BMP-2 mRNA在咬合创伤大鼠Vc内表达,表达量的高低与牙周组织的损伤程度相一致,即牙周损伤程度重时Vc内BMP-2高表达,牙周损伤程度轻时Vc内BMP-2低表达。

大鼠三叉神经脊束核Ⅱ尾侧亚核层内CB样、PV样阳性结构的分布及其突触联系

本研究用免疫组织化学方法观察了 Calbindin D-2 8k( CB)样和 Parvalbumin ( PV)样胞体、纤维和终末在三叉神经脊束核尾侧亚核 ( Vc) 层内的分布及它们的突触联系。在光镜下观察到 CB样和 PV样阳性胞体、纤维和终末在 II层内侧带 ( IIi)最为密集 ,PV样阳性神经元的胞体稍大 ,但数量少于 CB样阳性神经元。在电镜下观察到 CB样或 PV样阳性结构主要形成下列 4种突触联系 :( 1)阳性轴突终末与阳性或阴性轴突终末形成对称性轴 -轴突触和少量非对称性轴 -轴突触 ;( 2 )阳性轴突终末与阳性树突形成非对称性和对称性轴 -树突触 ;( 3 ) CB样阳性轴突终末与阴性树突主要形成非对称性轴 -树突触 ,PV样阳性轴突终末与阴性树突主要形成对称性轴 -树突触 ;( 4 )阴性轴突终末与阳性树突形成非对称性和对称性轴 -树突触。另外还可见到 CB样或PV样阳性或阴性树突、轴突及终末与 CB样、PV样阳性或阴性的初级传入纤维终末形成 型和 II型突触小球。 型突触小球数量较多 ,有典型的扇贝样初级传入纤维终末和不均一的小泡 ,线粒体少 ;II型突触小球的初级传入纤维终末粗大而清亮 ,外观不规则 ,有均匀一致的小泡和丰富的线粒体。根据上述结果可以推知在面口部伤害性信息的传递和调控过程中 ,Vc

三叉神经尾侧亚核与该神经感觉核簇各部间的联系——HRP法及ARG法研究

将HRP注射于猫三叉神经尾侧亚核(Vc),观察了该神经感觉核簇各段的标记细胞和标记纤维终末分支;并用ARG法配合观察了Vc向上位各段的投射。核簇上位各段都出现了标记细胞,数量顺序为Vo>Vj>Vp>Vmes。Vo、Vi、Vp中标记细胞多为中、小型,是核簇内下行投射的起源细胞,应属于中间神经元类型。Vmes中主要是假单极样的大细胞,应属于初级感觉神经元。顺向标记的纤维终末分支,散在分布于核簇上位各段,是Vc发出的核内上行投射。它们不仅分布于各段未标记的细胞周围,也分布在一些标记细胞的周围,本文认为这是一种直接的往返联系。标记的终末分支出现在各段的数量顺序是Vi>Vp>Vo>Vmes。

大鼠三叉神经尾侧亚核内SPR阳性神经元与初级传入和下行投射纤维之间的突触联系

用追踪和免疫电镜技术研究三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内Ｐ物质受体（ＳＰＲ）阳性神经元与初级传入和下行投射之间的突触联系。光镜观察发现，在Ｖｃ浅层，ＳＰＲ阳性神经元的分布与ＲＭｇ下行投射终末的分布有重叠。电镜观察发现，三叉初级传入终末和ＳＰＲ阳性神经元树突形成非对称性轴树突触；ＲＭｇ下行投射终末与ＳＰＲ阳性神经元树突也形成非对称性轴树突触，提示ＲＭｇ下行投射纤维可能通过直接作用于丘脑投射神经元对三叉初级传入的伤害性信息进行调控。

AMPA受体与谷氨酸在大鼠三叉神经尾侧亚核内分布的免疫组织化学研究

本文用免疫组织化学ＡＢＣ法调查了４种ＡＭＰＡ受体亚单位（ＧｌｕＲ１、２／３、４）和谷氨酸（Ｇｌｕ）在大鼠三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内的分布及其匹配关系。我们发现，ＧｌｕＲ１和２／３免疫阳性胞体和纤维密集分布于Ｖｃ的Ⅱ层和Ⅲ层外侧部，在Ｖｃ的其余各层呈散在性分布。ＧｌｕＲ４免疫阳性胞体和纤维在Ｖｃ各层均无分布。Ｇｌｕ免疫阳性胞体分布于Ｖｃ各层，尤以浅层（Ⅰ、Ⅱ层）密集，Ｇｌｕ免疫阳性纤维及终末结构主要分布于Ｖｃ浅层。结果表明，Ｇｌｕ免疫阳性纤维及终末样结构与ＡＭＰＡ受体免疫阳性胞体和纤维在Ｖｃ浅层的分布总体上是相互匹配的，但ＡＭＰＡ受体各亚单位在Ｖｃ内的分布存在明显的差异。本文提示。