三叶青乙酸乙酯提取物通过miR-515-5p/CDCA5调控结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及侵袭

结直肠癌是临床常见的一种消化系统恶性肿瘤,中药提取物具有抗氧化、抗肿瘤等作用,并可抑制结直肠癌等肿瘤细胞的增殖等生物学行为[1-3]。三叶青属于葡萄科崖爬藤属多年生藤本植物,可抑制肝癌细胞增殖并可促进细胞凋亡[4]。miR-515-5p在肿瘤细胞中表达下调,上调其表达可抑制肿瘤细胞迁移[5]。starbase预测显示CDCA5可能是miR-515-5p的靶基因,CDCA5在结直肠癌细胞中表达水平升高,并可通过激活ERK信号通路从而促进结直肠癌发展进程[6]。因此,本研究主要探究三叶青乙酸乙酯提取物对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨其对miR-515-5p/CDCA5分子轴的调控作用。

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植性肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响

目的:观察三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用及免疫功能的影响。方法:采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物高、中、低剂量对瘤重、抑瘤率、脾指数、胸腺指数的影响,ELISA法检测血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α含量。结果:三叶青各剂量组瘤重均低于模型组(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性;高、中剂量组脾指数、胸腺指数较模型组增高,差异具显著性(P<0.05);三叶青高、中剂量组IFN-γ、TNF-α含量高于模型对照组,差异具显著性(P<0.05)。结论:中药三叶青乙酸乙酯提取物具有抑制Lewis肺癌移植瘤作用,且能保护实验动物的细胞免疫器官,提高免疫功能。

三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用

目的:观察三叶青乙酸乙酯提取物对结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的诱导凋亡作用,探讨其可能的作用机制,为三叶青在临床上应用于结肠癌的治疗提供实验依据。方法:以HT-29结肠癌细胞荷瘤裸鼠为模型。实验分5组,模型组、阳性对照组及三叶青提取物低、中、高剂量组,各组裸鼠给予相应药物或生理盐水灌胃14 d。观察各组裸鼠的一般情况,以及对HT29细胞皮下移植瘤的抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织细胞形态学改变,免疫组织化学方法检测瘤组织内Caspase-3的蛋白表达水平。结果:三叶青提取物中、高剂量组及阳性组瘤重较模型组减轻(P<0.05),阳性组瘤重最轻;中药各组随着剂量的增加,抑瘤率上升。与模型对照组比较,各给药组荷瘤鼠瘤细胞凋亡程度增强;三叶青提取物中、高剂量组瘤组织Caspase-3蛋白表达水平显著上调。结论:三叶青乙酸乙酯提取物可抑制结肠癌HT29细胞皮下移植瘤的生长,作用机制之一为上调Caspase-3蛋白的表达,诱导结肠癌HT29细胞皮下移植瘤凋亡。

三叶青乙酸乙酯提取物通过miR-508-5p/CDCA5轴调控卵巢癌增殖、侵袭及迁移机制研究

目的 观察三叶青乙酸乙酯提取物卵巢癌增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 体外培养卵巢癌SK-OV-3细胞,然后分为对照组、不同剂量三叶青乙酸乙酯提取物处理组(10μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)组、NC mimic组、miR-508-5pmimic组、60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+NCinhibitor组和60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+miR-508-5pinhibitor组,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-508-5p的表达,Western blot法检测CDCA5的表达,双萤光素酶实验验证miR-508-5p和CDCA5的靶向调控关系。结果 与对照组比较,不同剂量三叶青乙酸乙酯提取物处理组(10μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)处理后,卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5表达明显下降(P<0.05),miR-508-5p表达升高,miR-508-5p mimic组细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5表达明显低于对照组和NCmimic组(P<0.05),miR-508-5p负向调控CDCA5,与60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物处理组和60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+NC inhibitor组相比,60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+miR-508-5p inhibitor组细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5明显升高(P<0.05)。结论 三叶青乙酸乙酯提取物能够明显抑制卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、侵袭以及迁移,其作用机制可能与调控miR-508-5p/CDCA5轴有关。

灵芝复合剂乙酸乙酯提取物的化学组成及其抗肿瘤活性

该文研究了灵芝复合剂乙酸乙酯提取物(Ganoderma lucidum Complex Ethyl Acetate Extract,GCE)的化学组成及抗肿瘤活性。GCE由灵芝、菟丝子、五味子、党参(质量比50.3:25.2:15.7:8.8)组成复合剂后再经乙酸乙酯萃取所得。试验采用超高压液相色谱飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q-TOF-MS)分析其物质组成;设空白组、模型组、阳性对照组、GCE低、中、高剂量组。检测其抑瘤率,脏器指数,脾淋巴细胞增殖能力,血清细胞因子。结果表明:GCE主要由11种化合物组成:L-焦谷氨酸、DL-亮氨酸腺苷、D-赤酮酸内酯、L-正亮氨酸、邻苯三酚、2-羟基-3-甲基吡喃-4-酮、绿原酸、3-(3,4,5-三甲氧基苯基)丙酸、槲皮素、五味子素;GCE低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)H22荷瘤小鼠的抑瘤率分别为35.14%、38.25%、50.87%;与模型组相比,GCE低、中、高剂量均能显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.01);GCE高剂量能显著促进小鼠的IL-6、TNF-α和IL-12分泌(P<0.05)。结论,GCE对H22荷瘤小鼠肿瘤有一定抑制作用,该研究结果可为抗肿瘤功能的产品研发提供新思路。

三叶青乙酸乙酯提取物对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物(ethylacetate fraction,EAF)对人胰腺癌PANC-1细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTT法检测三叶青EAF对人胰腺癌PANC-1细胞的生长抑制作用;光镜及Hoechst 33258荧光染色分别观察药物作用后细胞形态和细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印记法(Western blot)检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和P53的表达情况。结果与对照组比较,三叶青EAF能显著地抑制人胰腺癌细胞PANC-1的生长,并呈明显的量-效关系。药物作用后,细胞形态改变,有明显的凋亡特征。流式细胞术检测细胞凋亡率有浓度依赖性。Western blot检测表明三叶青EAF可以促进Bax、P53蛋白表达升高,Bcl-2表达下降。结论三叶青EAF对人胰腺癌PANC-1细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用,其机制可能与上调p53和Bax的表达,下调Bcl-2的表达有关。

侧柏叶乙酸乙酯提取物缓解小鼠糖尿病心肌病

目的:研究侧柏叶乙酸乙酯提取物(EAEPOL)缓解糖尿病心肌病(DCM)的作用及其机制。方法:将健康成年C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、DCM组和EAEPOL组。以小鼠心脏超声心动图为指标观察心脏结构和功能。以心肌羟脯氨酸含量、心肌组织Masson染色和天狼星红染色及心肌I型胶原(Col I)和III型胶原(Col III)免疫组化染色评价心肌纤维化程度。试剂盒检测心肌丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC),以及qRT-PCR和Western blot检测心肌血红素加氧酶1(HO-1)和核因子E2相关因子2(Nrf-2)表达水平,评价心肌氧化应激状态。Western blot检测CD31和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,qRT-PCR检测钙黏素5(CDH5)和成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)的mRNA水平,以及心肌石蜡切片α-SMA免疫荧光染色,评价心肌内皮-间充质转化(EndMT)程度。结果:(1)小鼠心脏超声心动图显示,与正常对照组相比,DCM组小鼠心率(HR)和射血分数(EF)显著下降(P<0.05或P<0.01),收缩期和舒张期左心室前壁厚度(LVAWs和LVAWd)及收缩期和舒张期左心室后壁厚度(LVPWs和LVPWd)均显著增大(P<0.05);与DCM组相比,EAEPOL组小鼠HR和EF显著增大(P<0.01);LVAWs、LVAWd、LVPWs和LVPWd显著减小(P<0.05)。(2)与正常对照组相比,DCM组小鼠心肌羟脯氨酸含量、天狼星红和Masson染色所示胶原面积比及Col Ⅰ和Col Ⅲ免疫组化阳性面积比均显著增加(P<0.01);与DCM组相比,EAEPOL组小鼠以上心肌纤维化指标均显著下降(P<0.05或P<0.01)。(3)与正常对照组相比,DCM组小鼠心肌MDA含量和Nrf-2表达显著增加,SOD活性、T-AOC水平和HO-1表达显著下降(P<0.01);与DCM组相比,EAEPOL组小鼠心肌MDA含量显著减少,SOD、T-AOC、Nrf-2和HO-1水平显著增加(P<0.05或P<0.01)。(4)与正常对照组相比,DCM组小鼠心肌CD31和CDH5的表达显著减弱,α-SMA和FSP1的表达显著增强(P<0.05或P<0.01),α-SMA免疫荧光阳性面积显著增大(P<0.01);与DCM组相比,EAEPOL显著上调CD31和CDH5的表达,下调α-SMA和FSP1的表达,α-SMA免疫荧光阳性面积显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:EAEPOL可能通过抑制氧化应激,减轻EndMT,从而抑制DCM小鼠心肌纤维化,改善心功能。

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。

鸡娃草乙酸乙酯提取物通过NF-κB信号通路对LPS诱导下RAW264.7细胞的抗炎作用研究

目的:观察鸡娃草乙酸乙酯提取物通过NF-κB信号通路对脂多糖(LPS)诱导下RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用。方法:以不同浓度鸡娃草乙酸乙酯提取物作用RAW264.7细胞24 h,分析在LPS刺激下药物对细胞形态变化的影响;CCK-8法检测RAW264.7细胞活力;倒置显微镜观察RAW264.7细胞形态;NO试剂盒检测RAW264.7细胞的NO释放量;ELISA检测细胞TNF-α、IL-6、IL-10的分泌;RT-PCR检测iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测细胞IκB-α、NF-κB(P65)蛋白表达。结果:与模型组比较,鸡娃草乙酸乙酯提取物高浓度组TNF-α、IL-10分泌显著降低,中、高浓度组NO、IL-6分泌及iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA和p-IκB-α/IκB-α、p-P65/P65水平显著降低。结论:本研究初步证实了鸡娃草乙酸乙酯提取物可通过NF-κB信号通路减少LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症相关因子的释放而发挥抗炎作用。

六君子汤乙酸乙酯提取物干预CAFs条件培养基下EC9706细胞能量代谢的机制研究

目的探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌EC9706细胞能量代谢影响的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测EAELD对EC9706增殖活性的影响;比色法检测EAELD对CAFs条件培养基(CAFM)下EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量的影响;Seahorse能量代谢分析系统检测EAELD对CAFM下EC9706细胞能量代谢的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测EAELD对能量代谢相关分子mRNA及蛋白表达的影响。结果与DMEM相比,除10μg/mL组外,EAELD对EC9706细胞增殖活性均有明显抑制作用(P<0.05),选取抑制浓度(IC30)25μg/mL,半抑制浓度(IC50)40μg/mL,作为低、高剂量组进行后续实验。在CAFM培养的EC9706细胞各组中,EAELD低、高剂量组都能显著降低非线粒体耗氧、基础呼吸值、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力、基础糖酵解、补偿糖酵解、糖酵解潜能(P<0.01),减少EC9706细胞上清乳酸含量(P<0.01),下调GLUT1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),下调p-PKM2、HK2、PKM2、MCT1蛋白表达(P<0.01);EAELD高剂量组能够下调EC9706细胞的线粒体耗氧与基础糖酵解比值(P<0.05),减少EC9706细胞葡萄糖摄取(P<0.05),下调p-PKM2、GLUT1的蛋白表达(P<0.01,P<0.05);EAELD低剂量组能够下调MCT1的mRNA表达(P<0.05)。结论六君子汤乙酸乙酯提取物能够干预CAFs条件培养基下EC9706细胞的能量代谢,其机制可能与EAELD调控HK2、PKM2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白表达相关。

巴豆叶乙酸乙酯提取物抗血吸虫活性的初步研究

目的 研究巴豆叶乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from the leaves of Croton tiglium, EAELCT)体内外抗血吸虫的活性及对血吸虫感染小鼠血清Th1/Th2型细胞因子分泌的调节作用。方法 体外抗血吸虫试验采用人工脱尾制备的血吸虫童虫,滴加于6孔培养板,45条童虫/孔,分为不同浓度EAELCT组、空白对照组、DMSO组以及吡喹酮组,比较各组童虫的死亡率;体内抗血吸虫试验采用血吸虫尾蚴腹部贴片法感染小鼠,建立血吸虫感染小鼠模型,感染后小鼠随机分为模型组、吡喹酮组、EAELCT高剂量组(0.3 g/kg)、EAELCT中剂量组(0.15 g/kg)和EAELCT低剂量组(0.075 g/kg)组。体内杀血吸虫童虫和成虫试验分别在感染后第1天和感染后第29天用不同剂量EAELCT连续灌胃7 d,并分别采集感染前、感染后第14天、第29天及感染后第21天、第42天的血液,分别于第29天和42天处死小鼠,收集肝门静脉和肠系膜静脉内的虫体,计算杀虫率。采用ELISA检测小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-5、IL-13细胞因子的含量。收集左肝进行HE染色,镜下观察肝纤维化病变的程度,并通过Imagine-pro图像软件测定肝组织中虫卵肉芽肿面积。结果 体外试验显示,EAELCT对血吸虫童虫有明显杀灭效果,培养48 h和72 h后各浓度EAELCT组中血吸虫童虫的死亡率均显著高于空白对照组和吡喹酮组(P<0.05)。体内试验显示,与模型组相比,EAELCT各浓度组均显示较好的杀虫效果,每鼠虫荷数显著减少(P<0.05);EAELCT各剂量组血清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平较模型组明显增加(P<0.05),Th2型细胞因子IL-5、IL-13表达水平明显下降(P<0.05);EAELCT各剂量组与模型组比较,肉眼可见小鼠肝脏的颜色较红润,肝脏表面的虫卵结节数目减少,HE染色显示肝脏虫卵肉芽肿面积下降明显(P<0.05)。结论 EAELCT体内外具有较好的抗血吸虫活性,可通过上调Th1型细胞应答和下调Th2型细胞应答,从而有效抑制血吸虫病肝纤维化的病变和程度。

川楝树皮乙酸乙酯提取物中甘遂烷型三萜类化学成分

从川楝(Melia azedarach Linn.)树皮乙酸乙酯提取物共鉴定到10种甘遂烷型三萜类化合物,即苦内酯(1)、3α-hydroxytirucalla-7,24(25)-dien-6-oxo-21,16-olide(2)、meliasenin B(3)、sendanolactone(4)、12β-hydroxykulactone(5)、mesendanin O(6)、6β-hydroxykulactone(7)、meliasenin L(8)、meliastatin 5(9)和toosendine G(10),其中化合物2和5首次从川楝中分离得到。

喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物对卵巢癌治疗的研究进展

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤,传统治疗方式主要是手术加化疗,但复发及耐药性的问题亟须解决。中医药在肿瘤治疗方面的应用日趋广泛,多种中药的乙酸乙酯部位有抗肿瘤作用。喙尾琵琶甲作为一种药用昆虫,具有抑菌、抗氧化等作用,民间有很多验方用于肿瘤治疗。喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物作为含酚类最丰富的部位,可通过清除DPPH自由基,调控STAT3/VEGF信号通路,显著抑制卵巢癌细胞的生长;同时通过下调β-catenin、CyclinD1蛋白的表达,阻断Wnt信号通路,影响细胞周期,从而抑制癌细胞的增殖,发挥抗肿瘤特性。该综述基于现有的研究成果,对喙尾琵琶甲乙酸乙酯提取物对卵巢癌的作用展开综述,以期开发新的药用昆虫资源,为卵巢癌的治疗提供新思路。

三叶青乙酸乙酯提取物通过P53/SLC7A11/GPX4信号通路促进铁死亡抑制前列腺癌PC-3细胞增殖

目的:探讨三叶青乙酸乙酯提取物(SYQY)抑制前列腺癌PC-3细胞增殖的作用机制。方法:将4种提取方式的三叶青予PC-3细胞给药,以CCK-8试验筛选最佳提取方式的药物用于后续试验。SYQY给药,克隆形成试验检测细胞增殖情况。网络药理学进行靶点的获取,并将三叶青主要成分与铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)进行分子对接。试剂盒检测细胞还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量;q RT-PCR及Western Blot分别检测铁死亡相关基因P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达。使用P53小干扰RNA转染细胞并同时SYQY给药,进一步检测细胞增殖情况。结果:SYQY可在一定程度上呈浓度及时间依赖性抑制PC-3细胞增殖能力(P<0.01),48 h时的药物IC50值为3.24μg/mL。三叶青主要成分儿茶素与GPX4残基形成了7个稳定氢键,并具有良好的结合活性。与DMSO组比较,SYQY给药可显著降低GSH含量(P<0.05,P<0.01),升高MDA及ROS水平(P<0.01);P53 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。P53沉默(si-P53)并同时SYQY给药可部分逆转SYQY单独给药对PC-3细胞的增殖抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论:SYQY可能通过激活P53/SLC7A11/GPX4信号通路促进铁死亡,发挥抑制PC-3细胞的增殖作用。

香加皮乙酸乙酯提取物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的:研究香加皮乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from Cortex Periplocae,CPEAE)诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度CPEAE对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的抑制作用;应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察凋亡细胞形态;应用流式细胞术分析CPEAE对细胞凋亡率的影响;RT-PCR法检测用药前后细胞凋亡相关基因survivin和bax的mRNA表达情况。结果:CPEAE呈浓度及时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为(0.943±0.005)μg/mL。CPEAE作用48 h后MCF-7细胞发生了特征性的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰,2.0μg/mL CPEAE作用72 h时细胞的凋亡率达(30.24±1.26)%。CPEAE作用后MCF-7细胞的survivin mRNA表达降低,而bax mRNA表达增加。结论:香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)可诱导乳腺癌细胞系MCF-7发生凋亡,可能通过下调survivin基因、上调bax基因的mRNA水平而发挥诱导细胞凋亡作用。

三叶青提取物抗炎、镇痛及解热作用的实验研究

目的:探讨三叶青提取物(ERT)的抗炎、镇痛及解热作用,并验证其相关功效。方法:以小鼠腹腔毛细血管通透法、小鼠耳肿胀法及大鼠足肿胀法观察其抗炎作用;以小鼠扭体法、热板法观察其镇痛作用;以干酵母致热法及2,4-二硝基苯酚致热法观察其解热作用。结果:三叶青提取物能明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出,抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及10%蛋清致大鼠足跖肿胀;减少醋酸致小鼠扭体次数,提高热板法小鼠痛阈值;并降低干酵母和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温。结论:三叶青提取物具有较好的抗炎、镇痛及解热作用,与其相关的中医临床功效及主治相符。

三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免疫功能的影响

目的:探讨三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局部和全身免疫功能的影响。方法:复制大鼠40%Ⅲ度烫伤模型,采用免疫透射比浊法测定大鼠血清中免疫球蛋白A(IgA)含量;采用双抗体夹心ELISA法,测定大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)含量;用放射免疫分析法测定大鼠回肠粘液提取液中S-IgA含量;比色法测定大鼠肠粘膜丙二醛(MDA)含量;检测大鼠脾淋巴细胞增殖情况及自然杀伤细胞(NK)活性。结果:三叶青提取物能拮抗烫伤致大鼠血清IgA含量降低、回肠粘液中S-IgA含量降低及肠粘膜中MDA含量升高作用;能拮抗烫伤致大鼠脾脏淋巴细胞增殖能力下降、NK细胞活性降低及烫伤引起的血清IL-6水平增加作用。结论:三叶青提取物对烫伤引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用。

三叶青块根乙醚提取物成分研究

目的:研究三叶青块根中的乙醚提取物成分。方法:利用有机溶剂萃取法提取三叶青块根,用GC-MS进行测定,色谱柱为HP-INnowax Polyethylene Glycol弹性石英毛细管柱(30.0 m×320μm×0.25μm),柱温50℃,保持2 min,然后以4℃·min^(-1)升温至230℃,保持20 min;载气为高纯度氦气(99.999%);载气流量2.0 mL·min^(-1);分流比40:1。质谱条件:离子源为EI源;离子源温度230℃;四极杆温度150℃;电子能量70 eV;发射电流34.6 μA;倍增器电压1.936 kV;接口温度280℃;质量范围10～550 amu。结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:分离出21个组分,鉴定出18个化学成分,检出率为98.45%。其中相对百分含量大于1%的分别确定为亚油酸35.28%、棕榈酸26.93%、油酸15.56%、二苯胺7.40%、亚麻酸甲酯7.15%、硬脂酸2.14%。结论:对三叶青乙醚提取物成分的研究,为有效控制三叶青药材质量、深入研究开发该药物提供有用的试验数据。

三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。

艾叶乙酸乙酯提取物对HBV的抑制作用

目的:通过体外实验观察艾叶乙酸乙酯提取物对乙型肝炎病毒(简称HBV)的抑制作用。方法:取HepG2.2.15细胞,以1.6、8.0、40.0、200.0和500.0 mg/L的艾叶乙酸乙酯提取物处理72 h后,采用MTT法测定细胞生长抑制率,计算半数毒性浓度。另取HepG2.2.15细胞,分别以0、10、20和40 mg/L艾叶乙酸乙酯提取物及100 mg/L拉米夫定(阳性对照)处理3、6、9 d,采用酶联免疫法检测细胞上清液中乙肝表面抗原、e抗原,用荧光定量PCR测定HBV DNA拷贝数,分别计算抑制率和半数抑制浓度,最后计算治疗指数。结果:艾叶乙酸乙酯提取物对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度为104.80 mg/L,对乙肝表面抗原、e抗原及HBV DNA的半数抑制浓度分别是1.26、8.06和38.97 mg/L,并呈剂量依赖性。治疗指数分别为HBsAg 83.2、e抗原13.0和HBV DNA 2.7。结论:艾叶乙酸乙酯提取物在体外对HBV有明显抑制作用。