三叶青总黄酮通过STAT3信号通路诱导膀胱癌细胞凋亡

目的 探讨体外使用三叶青总黄酮(TFTH)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其对信号转导与转录激活因子(STAT)3信号通路的作用机制。方法 对人膀胱癌BIU-87细胞进行体外培养,将不同浓度TFTH加入培养基对BIU-87细胞进行培养,通过细胞对数试剂盒(CCK)-8试验分别检测不同浓度TFTH(0、20、50、100μg/ml)组作用24、48 h后对细胞增殖的影响;流式细胞技术分析不同浓度TFTH作用24、48 h后对细胞凋亡率的影响;Western印迹检测不同浓度TFTH对Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)2、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的影响。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,对癌细胞增殖均有抑制作用(P<0.01);细胞凋亡检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,均有诱导癌细胞凋亡作用(P<0.01),且TFTH对细胞增殖或凋亡呈剂量时间依赖性;Western印迹结果显示,不同浓度TFTH处理后的BIU-87细胞,其JAK2、STAT3、VEGF和TGF-β1蛋白表达均明显降低,Bax蛋白表达明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 TFTH可通过体外抑制膀胱癌BIU-87细胞JAK2/STAT3信号通路表达,使JAK2、STAT3、TGF-β1、VEGF蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,从而抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖和诱导细胞凋亡。

三叶青总黄酮克服吉非替尼耐药的体外研究

目的研究三叶青总黄酮克服人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞对吉非替尼的耐药性及机制。方法首先,采用大孔吸附树脂分离纯化三叶青总黄酮。然后,将PC9/R细胞(PC9细胞的获得性吉非替尼耐药株)分为对照组(CK组)、吉非替尼组(G组)、三叶青总黄酮组(TF组)、吉非替尼联合三叶青总黄酮组(G+TF组),运用MTT法检测不同浓度三叶青总黄酮、吉非替尼对PC9/R细胞增殖情况以及两药联用效果。G组、TF组和G+TF组分别加入吉非替尼17μM、三叶青总黄酮20或30μg/mL、吉非替尼17μM+三叶青总黄酮20或30μg/mL,CK组则不加药处理。加药24 h后,利用流式细胞术分别检测不同组别PC9/R细胞凋亡情况。最后,运用Western blot法检测不同处理后,细胞内表皮生长因子受体(EGFR)信号通路及其旁路肝细胞生长因子(HGF)/MET/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)中各蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示,与G组细胞活性[(80.24±7.12)%]比较,G+20μg/mL TF组[(40.16±1.43)%]和G+30μg/mL TF组[(29.89±3.19)%]可显著抑制PC9/R细胞增殖(P<0.01);流式细胞术结果显示,G+20μg/mL TF组[(16.96±1.04)%]和G+30μg/mL TF组[(25.70±3.83)%]细胞凋亡率显著高于G组[(4.19±0.82)%],差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果表明,G+TF组EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、p-PI3K、STAT3、p-STAT3、MET和p-MET蛋白的表达量分别低于G组。结论三叶青总黄酮抑制人NSCLC细胞对吉非替尼的耐药性,其作用机制可能与调控EGFR信号通路及其旁路HGF/MET/PI3K/AKT通路有关。

三叶青总黄酮通过Wnt/β-catenin通路抑制结肠癌细胞周期及增殖

目的三叶青总黄酮(Total Flavonoids of Tetrastigma Hemsleyanum,TFTH)对多种肿瘤具有较强的抑制作用。分析TFTH对结肠癌细胞周期及细胞增殖能力的影响,并进一步探索其分子机制。方法采取CCK-8试验及克隆形成试验检测不同浓度TFTH(0、1.6、3.2及6.4 mg/m L)对人结肠癌细胞HT29及SW620细胞增殖能力的影响,并运用流式细胞术检测不同浓度TFTH对肿瘤细胞周期的调节作用;通过免疫印迹及实时荧光定量聚合酶链反应等方法证实TFTH对Wnt/β-catenin通路有效调控及细胞周期相关蛋白Cylin D1和c-myc的表达。结果在0、1.6、3.2和6.4 mg/m L TFTH孵育后,SW620细胞在6孔板中形成的克隆数量分别为(196±25.06)、(75.33±7.64)、(19±6.08)、0个/孔,HT29细胞为(206.67±30.55)、(106±12.17)、(9.67±4.04)、0个/孔,各浓度间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌细胞S+G2/M期细胞的比例降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。同时,TFTH干预的HT29细胞及SW620细胞内活化的β-catenin蛋白的表达随药物浓度增高而逐渐降低,将0、1.6、3.2和6.4 mg/m L TFTH作用于SW620细胞后,a-β-catenin蛋白的IOD分别为231.46±20.66、109.42±15.58、63.14±2.33、6.38±11.05;作用于HT29细胞时,其IOD分别为817.28±76.55、566.10±96.80、324.23±53.51、141.67±34.35,与0 mg/m L相比,差异均有统计学意义(P<0.01),进一步研究发现,与0 mg/m L相比,1.6、3.2、6.4 mg/m L的TFTH干预后细胞内Cyclin D1和c-myc在mRNA及蛋白质水平的表达也显著下调(P<0.05)。结论 TFTH抑制结肠癌细胞增殖能力,其作用机制与下调肿瘤细胞Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制细胞周期有关。

挤出滚圆法制备三叶青总黄酮微丸及其性质研究

目的应用挤出滚圆法制备三叶青总黄酮微丸,对其进行质量评定。方法利用挤出滚圆法制备微丸,筛选最优处方,评价了微丸的粉体学性质,含量测定,收率和体外溶出度。结果所得微丸的制备工艺简单,以微晶纤维素、微粉硅胶为辅料,药粉含量为35%,包衣。所得微丸的质量评定较好。结论利用挤出滚圆法制备微丸方法简单,适于工业化生产。

三叶青总黄酮对大鼠H9C2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究三叶青总黄酮对大鼠H9C2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:基于大鼠H9C2细胞,于培养箱内调节给予N_(2)和O_(2)建立H/R损伤模型。H/R前加入终浓度分别为3、6、9μg·mL^(-1)的三叶青总黄酮,并检测细胞上清液中的LDH,细胞内的MDA含量,以及SOD活性;通过MTT法测定H/R损伤后细胞成活率,采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况,Westen blot免疫印迹检测细胞HIF-1α蛋白表达,以考察三叶青总黄酮对细胞H/R损伤的保护作用。结果:与模型组比较,三叶青总黄酮可降低大鼠H9C2细胞H/R损伤后LDH的释放量及细胞内MDA含量,提高细胞SOD的活性,减少细胞凋亡,且逆转HIF-1α的下降。结论:三叶青总黄酮对细胞H/R损伤具有一定的保护,其机制可能与抗氧化应激、提高自由基清除能力、降低脂质过氧化物产生以及抑制细胞凋亡有关。

三叶青总黄酮影响心肌细胞的活性及DJ-1表达

目的:研究三叶青总黄酮对H9C2细胞缺血/复氧损伤的保护。方法:基于H9C2细胞,于二氧化碳培养箱内调节,并且给予建立H/R损伤模型。H/R前加入终浓度分别就为3,6,9μg·mL-1的三叶青总黄酮,并检测细胞的上清液中的LDH,细胞内的SOD活性;通过MTT法的测定H/R损伤后细胞的成活率,westen blot免疫印迹检测细胞DJ-1蛋白表达,以考察三叶青总黄酮对H/R损伤的保护作用。结果:同模型组比,三叶青总黄酮可降低H9C2细胞H/R损伤后LDH的释放量及细胞内MDA含量,提高细胞SOD的活性,且逆转DJ-1的下降。结论:三叶青总黄酮对细胞H/R损伤具有一定的保护,其机制可能与抗氧化应激以及抑制DJ-1的下降有关。

三叶青总黄酮抗肿瘤作用的研究进展

三叶青又名金线吊葫芦、蛇附子、石老鼠等,是分布在长江以南流域的葡萄科的草质藤本植物。作为一种传统中草药,具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能。三叶青全草均可入药,以干燥的块根和果实药用效果最好,既可以汤剂口服,也可捣烂用于局部外敷。中医临床中,内服主要用于治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎等。外用则治毒蛇咬伤,扁桃炎,蜂窝织炎,跌打损伤、肛裂及痈疽等疾病[1]。

三叶青总黄酮增强三阴性乳腺癌细胞对EGFR-TKI敏感性的机制研究

目的探讨三叶青总黄酮(RTF)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制药(EGFR-TKI)药物吉非替尼(GEF)敏感性的影响及其机制。方法以不同浓度的RTF或RTF联合不同浓度的GEF处理MDA-MB-231细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;将细胞分为对照组(培养基处理)、RTF(25μg·mL^(-1) RTF处理)组、GEF(10μg·mL^(-1) GEF处理)组、GEF+RTF组(10μg·mL^(-1) GEF和25μg·mL^(-1) RTF共同处理)和GEF+RTF+RAPA组(10μg·mL^(-1) GEF、25μg·mL^(-1) RTF和10 nmol·L^(-1) RAPA共同处理)。流式细胞仪检测细胞周期与凋亡;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和Beclin-1的表达。结果对照组、RTF组、GEF组、GEF+RTF组和GEF+RTF+RAPA组处于S期的细胞比例分别为(43.89±3.20)%,(36.36±3.73)%,(30.28±2.87)%,(18.12±1.54)%和(23.82±2.20)%;凋亡细胞的比例分别为(3.60±0.68)%,(12.46±2.80)%,(22.77±3.10)%,(36.19±3.87)%和(27.04±2.84)%;上述5组Cleaved Caspase-3蛋白表达水平分别为0.12±0.03,0.36±0.03,0.48±0.03,0.74±0.06和0.56±0.03;Bcl-2蛋白表达水平分别为0.84±0.06,0.71±0.06,0.57±0.04,0.36±0.03和0.48±0.04;Bax蛋白表达水平分别为0.15±0.03,0.20±0.02,0.30±0.03,0.45±0.03和0.38±0.03;LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平分别为0.98±0.05,0.20±0.02,4.36±0.91,1.10±0.07和2.75±0.58;P62蛋白表达水平分别为0.27±0.03,0.53±0.04,0.12±0.03,0.38±0.03和0.18±0.02;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.11±0.02,0.06±0.01,0.40±0.03,0.22±0.03和0.33±0.03。RTF组和GEF组与对照组比较,各项指标差异均具有统计学意义(均P<0.05);GEF+RTF+RAPA组与GEF+RTF组比较,各项指标差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论RTF可通过抑制自噬增强MDA-MB-231细胞对EGFR-TKI药物敏感性的敏感性。

三叶青总黄酮对乳腺癌细胞增殖、转移的影响

目的:探讨三叶青总黄酮对乳腺癌细胞增殖、转移的影响,并分析其作用机制。方法:通过Cell Counting Kit-8/CCK8法检测不同质量浓度三叶青总黄酮(10 g·L^-1、20 g·L^-1及40 g·L^-1)作用24 h、48 h和72 h对MCF-7细胞增殖的影响。细胞集落实验测定不同质量浓度三叶青总黄酮作用24 h对MCF-7细胞增殖的影响。Transwell技术和流式细胞术检测三叶青总黄酮作用24 h后对细胞迁移、侵袭和细胞周期的影响。采用蛋白质印迹技术检测CyclinD1、C-Myc、E-cadherin、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、β-catenin和p-β-catenin蛋白表达水平。实时荧光定量核酸扩增检测系统法(real-time quantitative PCR detecting system,q-PCR)检测CyclinD1、C-Myc、E-cadherin和MMP-9 mRNA的表达水平。结果:各组MCF-7细胞抑制率比较,差异有统计学意义(F组别=77.265,P=0.000),随着时间的延长,细胞抑制率逐渐增加(F时间=14.581,P=0.000)。药物处理24 h后,三叶青总黄酮10 g·L^-1组、20 g·L^-1组及40 g·L^-1组的细胞集落数分别为(90.43±9.17)个、(45.64±4.67)个和(10.21±1.26)个,均显著低于对照组(F=919.002,P<0.05)。三叶青总黄酮10 g·L^-1组、20 g·L^-1组及40 g·L^-1组的G0/G1期细胞比例分别为(70.59±7.13)%、(73.64±7.28)%和(78.83±7.89)%显著高于对照组(F=18.812,P=0.000)。三叶青总黄酮10 g·L^-1组、20 g·L^-1组及40 g·L^-1组的迁移、侵袭细胞数分别为(120.17±13.36)个、(96.75±9.81)个和(75.44±7.68)个,(84.08±8.62)个、(66.39±6.81)个和(42.45±4.41)个,均显著低于对照组(F=141.487、286.712,P=0.000)。三叶青总黄酮10 g·L^-1组、20 g·L^-1组及40 g·L^-1 CyclinD1、C-myc、E-cadherin和MMP-9蛋白及mRNA表达水平均低于对照组,p-β-catenin蛋白表达水平低于对照组,E-cadherin蛋白和mRNA水平高于对照组(P<0.05)。结论:三叶青总黄酮具有抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的作用,其可能的机制是将细胞周期阻滞于G0/G1期,调节Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。

三叶青总黄酮通过MAPK途径诱导乳腺癌细胞凋亡

目的探索三叶青总黄酮抗乳腺癌活性的作用机制。方法用MCF-7、MDA-MB-468、4T1和T47D等细胞考察三叶青总黄酮的抗乳腺癌活性,实验组在细胞培养24 h后,分别添加终浓度为3.125,6.25,12.50,25.00,50.00和100.00μg·mL^-1的三叶青总黄酮,对照组添加等量不含药的培养基,继续培养48 h。用MCF-7和MDA-MB-468细胞考察细胞周期、凋亡及相关蛋白表达变化,实验组在细胞培养24 h后,分别添加终浓度为3.125,6.25和12.50μg·mL^-1的三叶青总黄酮,对照组添加等量不含药的培养基,继续培养48 h。用噻唑兰比色法检测三叶青黄酮对乳腺癌细胞活力的影响,用4’,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色结合流式细胞分析检测乳腺癌细胞凋亡和凋亡比例,用免疫印迹法检测影响细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果三叶青总黄酮对MCF-7、MDA-MB-468、4T1和T47D 4株乳腺癌细胞都存在抑制作用。当浓度达到25μg·mL^-1时,对4T1和MDA-MB-468的抑制率达到80%,T47D和MCF-7的抑制率分别在65%和69%左右。DAPI染色可见细胞数量随三叶青总黄酮浓度增加而逐渐减少,而且存在明显的细胞凋亡现象。随着三叶青总黄酮作用浓度的增大,S期和G2/M期细胞的比例逐渐降低,凋亡细胞数增加。三叶青总黄酮处理后,2株细胞中p44/42蛋白磷酸化程度均有下调,而Caspase-3的活化形式(cl-Caspase-3)上调。结论三叶青总黄酮能够有效抑制乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-468,4T1和T47D增殖,诱导细胞周期阻滞,促进乳腺癌细胞凋亡,且其作用效果呈现出一定范围内的剂量依赖性,其作用机制与抑制p-p42/44表达,阻断MAPK信号通路有关,同时可活化细胞凋亡途径关键蛋白Caspase-3。