三叶青藤叶粉对崇仁麻鸡生长性能、血清生化指标及空肠形态结构的影响

【目的】研究三叶青藤叶粉(THL)对崇仁麻鸡生长性能、血清抗氧化和免疫功能及空肠形态结构的影响。【方法】试验选用360只50日龄崇仁麻鸡母鸡,随机分为5组(每组6个重复,每个重复12只),对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0.5%、1%、2%和4%三叶青藤叶粉,试验期56 d。试验结束时以重复为单位称重,记录肉鸡采食量,统计生长性能指标;采集血液和肠道组织样品,检测血清抗氧化、免疫指标,制备空肠组织切片并观察空肠形态,测量空肠绒毛高度和隐窝深度,统计绒隐比(V/C)。【结果】与对照组相比,饲粮中添加1%三叶青藤叶粉后崇仁麻鸡料重比(F/G)显著降低(P<0.05),血清免疫球蛋白A(IgA)、IgM、转化生长因子-β(TGF-β)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);添加2%三叶青藤叶粉后血清IgA、TGF-β含量显著升高(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和TNF-α含量显著降低(P<0.05);添加4%三叶青藤叶粉后血清TGF-β含量显著升高(P<0.05),IL-1β含量显著降低(P<0.05);饲粮中添加0.5%和1%三叶青藤叶粉后空肠绒毛高度和V/C显著增加(P<0.05)。【结论】饲粮中添加0.5%~4%三叶青藤叶粉能在一定程度上促进崇仁麻鸡生长,提高机体免疫力,改善肠道组织形态,本试验条件下三叶青藤叶粉添加水平为1%~2%效果较好。

三叶青藤醇提物的急性毒性及抗炎作用研究

目的对三叶青藤醇提物的急性毒性及抗炎作用进行研究。方法三叶青藤醇提物以最大浓度及最大给药体积的药液对实验组小鼠灌胃给药,对照组给予等体积的溶媒,连续观察14 d,记录小鼠毒副反应情况。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、角叉菜胶致大鼠足肿胀法观察三叶青藤醇提物的抗炎作用。结果观察14 d后,给药组与对照组全部动物健存,对照组及给药组小鼠体质量平均增长分别为38.40%,36.29%,无明显差异(P>0.05),未见任何急性毒性反应,小鼠灌胃三叶青藤醇提物的最大耐受量为3 063 mg/kg。三叶青藤醇提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致大鼠足肿胀有显著的抑制作用。结论三叶青藤醇提物毒性较小并有显著的抗炎作用。

三叶青藤叶配方颗粒的质量标准研究及其5种有效成分的含量测定

目的:建立三叶青藤叶配方颗粒的质量标准,并同时测定其中5种有效成分的含量。方法:采用薄层色谱法(TLC)对三叶青藤叶配方颗粒中绿原酸、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷进行定性鉴别。采用紫外分光光度法测定3批样品中总黄酮(以异荭草苷计)含量,并对其粒度、水分、溶化性及装量差异进行检查。以异荭草苷为内参物计算其余成分的相对校正因子,采用一测多评法测定样品中新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷的含量,并与外标法测定结果进行比较。结果:绿原酸、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰。样品中异荭草苷检测质量浓度的线性范围为7.73~61.82μg/mL(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%;加样回收率为93.75%~97.85%(RSD=1.41%,n=6)。3批样品不能通过一号筛且能通过五号筛的平均百分率分别为1.51%、1.55%、1.29%(n=3),含水量分别为4.63%、5.18%、4.03%(n=3);颗粒均在5 min内溶化;装量差异为4.8%~5.0%,均符合2015年版《中国药典》(四部)颗粒剂的相关规定。一测多评法测定5种成分质量浓度的线性范围分别为2.325~93μg/mL(r=0.999 9)、5.125~205μg/mL(r=0.999 9)、1.150~46μg/mL(r=0.999 3)、2.625~105μg/mL(r=0.999 9)、4.725~189μg/mL(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为99.78%~106.13%(RSD=2.33%,n=6)、95.07%~103.32%(RSD=2.72%,n=6)、97.17%~105.43%(RSD=2.98%,n=6)、95.52%~101.33%(RSD=2.46%,n=6)、99.42%~105.56%(RSD=2.34%,n=6)。异荭草苷相对于新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷的相对校正因子分别为0.731、0.805、0.821、0.590;一测多评法测得5种成分的含量分别为0.828~1.123、2.379~3.118、0.281~0.880、1.039~1.393、2.121~3.209 mg/g,外标法测得的含量分别为0.803~1.099、2.345~3.085、0.269~0.872、1.039~1.393、2.113~3.201 mg/g;两种方法测定结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:所建质量标准简便、快速,可用于三叶青藤叶配方颗粒的质量控制;所建一测多评法准确、高效,可用于同时测定三叶青藤叶配方颗粒中5种有效成分的含量。

三叶青藤抗炎活性部位研究

目的筛选三叶青藤的抗炎活性部位。方法分步溶剂萃取法制备不同极性部位,采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性模型、大鼠棉球肉芽肿模型筛选抗炎活性部位。结果三叶青藤正丁醇提取部位和水溶液部位能显著抑制小鼠腹腔毛细血管通透性增高以及大鼠棉球肉芽肿的形成。结论正丁醇提取部位和水溶液部位为三叶青藤的抗炎有效部位。

三叶青藤醇提物对胶原性关节炎大鼠关节肿胀率和组织病理学作用的研究

目的研究三叶青藤醇提物对Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎关节肿胀率和病理改变作用。方法用SD大鼠建立CIA动物模型,用三叶青藤醇提物从造模第2周开始灌胃给药,时间为4周,用毛细管放大法每周测量注射侧踝关节肿胀率,并用苏木素-伊红(HE)染色方法,观察注射侧踝关节病理组织学改变。结果三叶青藤醇提物能显著减轻胶原性关节炎大鼠的关节肿胀率,但对关节组织病理学没有明显的改善作用。结论三叶青藤醇提物对大鼠胶原性关节炎有一定抑制作用,其机制与非特异性抗炎作用有关。

三叶青藤醇提物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

目的:研究三叶青藤醇提物的抗炎作用。方法:采用醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性试验观察三叶青藤醇提物的抗炎作用。结果:三叶青藤醇提物能显著抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高。结论:三叶青藤醇提物有显著的抗炎作用。

三叶青藤生药学研究

目的对三叶青藤进行生药学研究,为鉴别、临床应用和进一步开发利用提供参考资料。方法采用性状鉴别,显微鉴别和理化鉴别的方法。结果发现三叶青藤根的导管主要集中成一条带状;叶栅栏组织细胞通过主脉;主脉维管束外韧形,上方又有一小外韧形维管束,两维管束被一条纤维束分开,其外侧均有纤维束,呈环状;薄壁细胞中含有大量针晶和少量砂晶。结论以上特征可作为鉴别三叶青藤的参考依据。

三叶青藤正丁醇部位化学成分的研究

目的研究三叶青藤Illigera rhodantha Hance.正丁醇部位的化学成分。方法三叶青藤乙醇提取液的正丁醇部位采用Sephadex LH-20、MCI、ODS C_(18)进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离到8个化合物,分别鉴定为赤式-紫丁香酰甘油(1)、黑风藤苷A(2)、黑风藤苷(3)、阿江榄仁树葡糖苷Ⅱ(4)、β-谷甾醇(5)、没食子酸(6)、没食子酸甲酯(7)、没食子酸乙酯(8)。结论化合物1~8为首次从该植物中分离得到,化合物1~4和6~8为首次从青藤属植物中分离得到。

三叶青藤叶配方颗粒急性毒性试验

目的观察三叶青藤叶配方颗粒的小鼠急性毒性反应,初步评价其用药安全性。方法采用最大耐受量(MTD)试验法,取昆明小鼠40只,雌雄各半,按体质量随机分为给药组及空白组;给药组以0.76 g/mL三叶青藤叶配方颗粒最大给药浓度药液按小鼠灌胃最大给药体积40 mL/kg给药;空白组灌服40 mL/kg蒸馏水,连续观察14 d,观察2组急性毒性症状谱,记录2组小鼠累计死亡数、脏器指数及体质量变化。结果无法得出三叶青藤叶配方颗粒半数致死量。最大耐受实验观察期间给药组小鼠未见中毒反应,无动物死亡;给药后10~15 min,给药组小鼠行动减缓,对外界刺激反应迟钝;给药25~30 min后,开始逐渐恢复正常活动及饮食饮水;给药组给药14 d后解剖肉眼未见脏器异常。比较2组的脏器指数及小鼠体质量变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论三叶青藤叶配方颗粒的小鼠灌胃给药最大耐受剂量大于最大给药量30.4 g/(kg·d),相当于是临床按60 kg体重计算每公斤体质量日用量的121.6倍以上;三叶青藤叶配方颗粒口服毒性小,临床剂量下用药安全可靠。

三叶青藤叶配方颗粒稳定性研究

目的考察三叶青藤叶配方颗粒的稳定性,为三叶青藤叶配方颗粒的生产、包装、贮存提供科学依据及指导意见。方法通过影响因素稳定性试验及常温3个月初步稳定性试验,按照已建立的质量标准方法和《中华人民共和国药典》(2015年版)规定,分别对三批样品进行鉴别、检查和含量测定。结果三批三叶青藤叶配方颗粒的性状、薄层色谱鉴别、水分检查、总黄酮含量、效应组分群含量测定等检测项目均符合规定,在高湿影响因素试验中,颗粒水分含量略有增加。结论提示三叶青藤叶配方颗粒生产过程及设计包装时应注意控制颗粒吸潮,密封贮存,且存储条件宜阴凉干燥。

超临界二氧化碳流体萃取三叶青藤挥发油成分分析

目的采用GC-MS法分析三叶青藤挥发油成分,为其质量评价提供科学依据。方法采用二氧化碳超临界萃取法(SFE-CO2)萃取并分离三叶青藤药材中的挥发油,所提取得到的挥发油运用GC-MS进行分析,用面积归一化法确定其相对含量。结果从三叶青藤药材中提取的挥发油经GC-MS分析,共检测到84个色谱峰,通过NIST库检索一共鉴定出39个化合物的具体结构,占所提取的三叶青藤挥发油总量的56.47%(g/g),其中棕榈酸、十三烷酸、芳樟醇等在该药材挥发油中占的比例较高。结论该方法提取条件优良,初步揭示了该药材挥发性成分,对进一步研究其化学成分打下基础,为药材的质量评价提供科学参考。

三叶青藤挥发油成分的GC-MS分析

目的通过GC-MS分析三叶青藤挥发油成分,为其质量评价提供科学依据。方法采用水蒸汽蒸馏法提取三叶青藤挥发油成分,用气相色谱-质谱联用法分析鉴定其化学成分,用面积归一化法确定其相对含量。结果水蒸汽蒸馏法提取的挥发油共分离出89个色谱峰,鉴定其中47个化合物,相对含量占挥发油总量的75.94%,主要化学成分是芳樟醇、棕榈酸、反式石竹烯等。结论该方法提取简单、实用,初步揭示了该药材挥发性成分,对进一步研究其化学成分打下基础,为药材的质量评价提供科学参考。

三叶青藤特性及苗木繁育技术研究

在3、5、7、9、11月五个月份采集三叶青藤二年生茎藤,分别用北京产双吉尔GGR6号生根粉50 mg.kg-1浸泡2小时进行扦插试验;用随采随播、5天后播种、10天后播种、15天后播种、20天后播种五种方法进行种子发芽试验。结果表明,扦插育苗试验时五个月份的生根率分别是79.2%、82.8%、69.6%、62.4%、44%;种子育苗时五种处理的发芽率分别是96%、79%、57%、20%、11%。5月份扦插育苗效果最好,生根率达到82.8%;播种育苗时随采随播的效果最好,发芽率达到96%;在生产上采用扦插育苗会有更多的优势。

三叶青地上部分对肉鸡肠道菌群、免疫功能和生长性能的影响

为探究三叶青地上部分(三叶青藤叶)对肉鸡生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响,将240只健康肉仔鸡随机分成4组,分别为对照组(饲喂基础日粮)和低剂量组、中剂量组、高剂量组(分别饲喂添加1%、3%、5%三叶青藤叶粉的基础日粮)。测定各组21日龄与42日龄试验鸡只体质量,42日龄试验鸡只免疫器官指数和血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、IgG、IgM含量以及盲肠内容物的肠道菌群相对丰度。结果表明:与对照组相比,添加三叶青藤叶粉可显著提高42日龄肉鸡的平均日采食量(P<0.05)和平均日增重(P<0.05),且中剂量组促进效果最明显。同时,低、中剂量组肉鸡胸腺指数和法氏囊指数较对照组显著升高(P<0.05)。各剂量组的肉鸡血清中IgA、IgM含量均显著高于对照组(P<0.05),中、高剂量组的IgG含量显著高于对照组(P<0.05)。添加适量三叶青藤叶粉(3%)可显著增加毛螺菌科(Lachnospiraceae)和梭菌科(Clostridiaceae)的相对丰度(P<0.05)。上述结果表明,三叶青藤叶粉可显著提高肉鸡的免疫功能,改善肉鸡肠道菌群组成,提高肉鸡生长性能,其中,以添加3%三叶青藤叶粉的促进效果最为显著。

三叶青藤叶配方颗粒与饮片化学等量性及抗炎等效性研究

目的基于特征图谱探究三叶青藤叶配方颗粒与饮片汤剂间的相关性和等量性,评价二者的抗炎药理等效性。方法建立三叶青藤叶饮片汤剂、中间体及配方颗粒的HPLC特征图谱共有模式;基于特征图谱与主要效应组分含量,建立等效比数学模型,计算迁移率,综合分析比较配方颗粒与饮片汤剂间的共有特征组分群的相似性及其含量的等量关联性。采用大鼠棉球肉芽肿增生炎症模型的抗炎抑制作用的药效实验,考察三叶青藤叶配方颗粒与饮片汤剂的等同药效相关性。结果基于HPLC特征图谱共有模式,辨识归属特征共有峰10个,汤剂与配方颗粒的相似度>0.900;由饮片煎煮对照汤剂各组分平均迁移率仅14.97%~23.89%,由饮片经优化工艺制得配方颗粒各组分平均迁移率为54.61%~92.30%。3批次配方颗粒与饮片平均等量等效比为3.72,以平均值的80%计,配方颗粒与饮片的等效比是2.98倍,提示1 g三叶青藤叶配方颗粒相当于饮片3 g。与模型组相比,配方颗粒与饮片汤剂均能显著减少大鼠肉芽肿的质量(P<0.05),对大鼠棉球肉芽肿炎症组织增生的抑制率,低、高剂量组的配方颗粒分别为15.70%,37.27%,饮片汤剂分别为14.59%,35.73%,二者均具有抗炎作用且呈剂量依赖性,二者对肉芽肿炎症抑制率在统计学上无显著性差异,提示配方颗粒与饮片汤剂(1∶3)之间具有等同的药效相关性。结论三叶青藤叶配方颗粒与饮片汤剂的共有药效组分群相似,配方颗粒与饮片的量效关联性为1∶3,以此量效比例用药,二者具有等同的药效相关性。

三叶青藤醇提物的镇痛抗炎作用

目的:研究三叶青藤醇提物的镇痛及抗炎作用。方法:采用小鼠热水缩尾法和醋酸扭体法观察镇痛作用;采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱导大鼠足肿胀的试验模型观察抗炎作用;并测定角叉菜胶诱导大鼠足肿胀炎性渗出液中前列腺素E2(PGE2)的含量。结果:三叶青藤醇提物能明显提高小鼠的痛阈值,但未能减少小鼠的扭体次数。同时,三叶青藤醇提物能显著减轻小鼠耳肿胀和大鼠足爪肿胀反应,能明显减少大鼠角叉菜胶性炎症渗出液中PGE2含量。结论:三叶青藤醇提物没有明确的镇痛作用,但有显著的抗炎作用,其机制可能与抑制PGE2的合成有关。

三叶青藤正丁醇部位对DBA/1小鼠胶原性关节炎的作用及机制

目的:观察三叶青藤正丁醇部位(nbuIR)对胶原性关节炎小鼠关节病变及血清炎症因子的抑制作用。方法:用DBA/1小鼠建立胶原性关节炎(CIA)动物模型,将造模成功小鼠随机分为模型对照组、甲氨蝶呤组、nbuIR低、中、高剂量组,另设正常对照组。灌胃给药,给药期间每周进行一次关节炎指数评分。干预结束后,ELISA法检测各组小鼠血清IL-23和IL-17水平,H-E染色观察各组小鼠踝关节组织病理学改变。结果:与模型对照组比较,nbuIR高剂量组血清IL-23和IL-17水平明显降低(P<0.01),滑膜细胞增生与炎症细胞浸润程度明显减轻。结论:nbuIR能改善CIA小鼠局部关节肿胀,下调血清IL-23和IL-17水平,减少滑膜炎症程度,其机制可能与调节IL-23/IL-17轴有关。

三叶青藤叶配方颗粒大鼠体内药代动力学生物等效性评价

目的:研究建立同时测定大鼠血浆中三叶青藤叶配方颗粒5个效应组分的UPLC-MS定量分析方法,比较配方颗粒与汤剂在大鼠体内的药动学特性及生物等效性。方法:运用超高效液相色谱-质谱联用分析(UPLC-MS/MS)法,建立同时测定三叶青藤叶配方颗粒5个主要效应组分新绿原酸、绿原酸、荭草苷、异荭草苷、异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷大鼠血浆血药浓度的定量分析方法,比较大鼠分别口服给药三叶青藤叶配方颗粒与汤剂后的血药浓度、口服生物利用度和主要药动学参数,及其药动学特性,评价其生物等效性。结果:5个主要效应组分的药动学参数分别为Cmax新绿原酸:配方颗粒(39.08±0.85)ng·m L^-1、汤剂(37.68±0.46)ng·m L^-1,绿原酸:配方颗粒(67.13±0.59)ng·m L^-1、汤剂(65.65±1.02)ng·m L^-1,荭草苷:配方颗粒(51.92±0.27)ng·m L^-1、汤剂(51.90±0.26)ng·m L^-1,异荭草苷:配方颗粒(12.89±0.05)ng·m L^-1、汤剂(12.67±0.12)ng·m L^-1,异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷:配方颗粒(119.45±0.81)ng·m L^-1、汤剂(117.70±0.53)ng·m L^-1;AUC(0-∞)新绿原酸:配方颗粒(523.95±5.47)ng·h·L^-1、汤剂(492.82±89.41)ng·h·L^-1,绿原酸:配方颗粒(400.19±57.48)ng·h·L^-1、汤剂(390.83±6.56)ng·h·L^-1,荭草苷:配方颗粒(553.67±9.175)ng·h·L^-1、汤剂(591.72±482)ng·h·L^-1,异荭草苷:配方颗粒(564.50±23.24)ng·h·L^-1、汤剂(493.08±33.67)ng·h·L^-1,异荭草苷-2′-O-鼠李糖苷:配方颗粒(665.78±10.41)ng·h·L^-1、汤剂(651.06±2.14)ng·h·L^-1。方差分析结果表明,配方颗粒与汤剂比较,5个效应组分的药动学参数Cmax及AUC(0-∞)均无显著性差异,双单侧检验法在90%的置信度下检验,配方颗粒与汤剂具有生物等效性。结论:三叶青藤叶配方颗粒与饮片汤剂的药代动力学特性表征无显著性差异,两剂型具有生物等效性,为三叶青藤叶配方颗粒替代饮片汤剂提供了临床应用实验基础。

三叶青藤提取物经皮给药抗炎镇痛作用研究

目的对三叶青藤提取物经皮给药抗炎镇痛的作用进行研究。方法采取二甲苯致小鼠耳肿胀、弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎来研究三叶青藤提取物不同剂量组经皮给药的抗炎效果;采取小鼠扭体反应,热板致痛法,尾巴压痛法和大鼠光热甩尾法观察三叶青藤提取物各剂量组的镇痛作用。结果三叶青藤提取物经皮给药在二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀和大鼠佐剂性关节炎中显现出有抗炎作用,并且能明显减轻小鼠醋酸和热板致痛、大鼠鼠尾光热和压痛作用。结论三叶青藤提取物经皮给药具有明显的抗炎镇痛效果。