三叶青黄酮通过TLR4/NF-κB通路调控NLRP3小体激活改善大鼠心肌细胞缺氧再复氧损伤的作用及机制

目的探究三叶青黄酮(RTHF)对大鼠心肌细胞缺氧再复氧(H/R)损伤的作用及其可能机制。方法以大鼠心肌细胞H9C2为研究对象,分为对照组、H/R组、H/R+低浓度RTHF(L-RTHF)组(25μg/mL)、H/R+中浓度RTHF(M-RTHF)组(50μg/mL)和H/R+高浓度RTHF(H-RTHF)组(100μg/mL)。通过CCK-8法检测各组细胞活力;试剂盒检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D的N端切割产物(GSDMD-N)、Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、核因子κB p65(NF-κB p65)的表达水平。结果与对照组比较,H/R组H9C2细胞活力[(71.33±1.70)%比(100.00±2.94)%,P<0.01]、SOD水平[(15.54±0.36)U/mg prot比(34.54±0.87)U/mg prot,P<0.01]降低,ROS相对DCF强度[(3.72±0.12)比(1.00±0.10),P<0.01]和LDH水平[(387.57±9.37)U/L比(182.80±11.53)U/L,P<0.01]升高,NLRP3[(2.75±0.04)比(1.00±0.02)、(4.71±0.18)比(1.00±0.11),P<0.01]、Caspase-1[(3.02±0.11)比(1.00±0.06)、(3.33±0.09)比(1.00±0.12),P<0.01]、ASC[(3.32±0.12)比(1.00±0.09)、(5.30±0.15)比(1.00±0.10),P<0.01]、GSDMD-N[(3.69±0.14)比(1.00±0.13)、(3.23±0.08)比(1.00±0.06),P<0.01]、TLR4[(4.00±0.12)比(1.00±0.09)、(5.68±0.20)比(1.00±0.10),P<0.01]、p-NF-κB p65[(6.81±0.16)比(1.00±0.10)、(3.25±0.07)比(1.00±0.05),P<0.01]相对mRNA和蛋白水平升高;与H/R组比较,H/R+M-RTHF组和H/R+H-RTHF组的细胞活力[(77.00±2.16)%、(82.00±2.16)%比(71.33±1.70)%,P<0.05或P<0.01]、SOD水平[(23.43±1.50)U/mg prot、(28.66±1.22)U/mg prot比(15.54±0.36)U/mg prot,P<0.05或P<0.01]升高,ROS[(3.24±0.05)、(2.57±0.04)比(3.72±0.12),P<0.05或P<0.01]、LDH[(332.77±5.76)U/L、(253.36±9.43)U/L比(387.57±9.37)U/L,P<0.05或P<0.01]水平降低,NLRP3[(1.86±0.06)、(1.56±0.09)比(2.75±0.04),(2.97±0.11)、(1.86±0.06)比(4.71±0.18),P<0.05或P<0.01]、Caspase-1[(2.06±0.13)、(1.27±0.06)比(3.02±0.11),(2.12±0.15)、(1.42±0.09)比(3.33±0.09),P<0.05或P<0.01]、ASC[(2.40±0.25)、(2.19±0.14)比(3.32±0.12),(2.46±0.08)、(1.28±0.05)比(5.30±0.15),P<0.05或P<0.01]、GSDMD-N[(2.43±0.07)、(2.19±0.13)比(3.69±0.14),(1.91±0.07)、(1.46±0.07)比(3.23±0.08),P<0.05或P<0.01]、TLR4[(3.52±0.09)、(1.88±0.11)比(4.00±0.12),(4.04±0.32)、(2.07±0.07)比(5.68±0.20),P<0.05或P<0.01]、p-NF-κB p65[(4.09±0.12)、(3.03±0.20)比(6.81±0.16),(1.93±0.31)、(1.39±0.12)比(3.25±0.07),P<0.05或P<0.01]相对mRNA和蛋白水平降低,且这种变化呈现RTHF剂量依赖性。结论在H/R诱导的大鼠心肌细胞中,RTHF可能通过抑制ROS和TLR4/NF-κB通路调控NLRP3小体激活,进而抑制细胞焦亡。

三叶青黄酮干预荷肺癌小鼠MDSCs生成及相关因子表达的研究

目的:研究三叶青黄酮对荷肿瘤小鼠MDSCs、PGE2和COX-2的影响,以及它们在调控肿瘤免疫和逆转肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为实验组、环磷酰胺组和三叶青黄酮高、中、低剂量组;每组8只小鼠(以下简称高,中,低)。结果:其它各组的肿瘤体积、肿瘤重量均明显低于模型组(P < 0.05),外周血中COX-2和PGE2的水平以及脾脏中MDSCs的比例均明显低于模型组(P < 0.05)。小剂量组第8,12,14天的肿瘤体积明显大于环磷酰胺组(P < 0.05),且外周血中COX-2和PGE2的浓度明显高于小剂量组(P < 0.0.05),差异有统计学意义。中剂量组在第8天时,肿瘤变大,PGE2在外周血中的含量明显高于对照组(P < 0.05);高剂量组第14天的瘤体明显缩小(P < 0.05),与对照组比较差异有统计学意义。中低剂量组的肿瘤抑制率低于对照组(P < 0.05),而MDSCs的比例高于对照组(P < 0.05);结论:三叶青黄酮对肿瘤细胞有一定的抑制作用,这种抑制作用可能是通过抑制肿瘤细胞的增殖和凋亡而实现的。

三叶青黄酮对肺癌小鼠抗肿瘤作用的研究

三叶青为葡萄科崖爬藤属植物,其属于我国东南地区重要的药源植物。其能体现出活血止痛、祛风化痰、解毒清热的效果。其在治疗肺炎、惊厥、高热、各类肿瘤方面,能取得满意效果。三叶青黄酮为三叶青的主要成分。基于此,本文分析三叶青黄酮对肺癌小鼠抗肿瘤作用研究情况,旨意为相关人员的研究工作提供参考文献。

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤组织凋亡相关蛋白的影响

观察三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠免疫功能以及肿瘤组织凋亡相关蛋白的影响。方法 选择60只小鼠样本研究,收取在2021年4月-2023年4月,分为环磷酰胺组、对照组、三叶青黄酮高剂量组、三叶青黄酮低剂量组、三叶青黄酮中剂量组、模型组,每组10例小鼠,持续研究2周,对小鼠肿瘤组织凋亡相关蛋白以及免疫功能等数据分析。结果 比较于模型组,经中剂量以及高剂量三叶青黄酮组治疗的小鼠肿瘤凋亡率较高、脾脏指数以及胸腺指数较高,凋亡相关蛋白表达上升显著,P<0.05。与对照组比较,其他组别的IL-2指标下降显著,而与模型组比较,中剂量三叶青黄酮组以及高剂量三叶青黄酮组、环磷酰胺组IL-2水平显著上升,结论 Lewis肺癌小鼠经三叶青黄酮治疗后可降低Treg细胞比例,对于免疫力的改善具有一定联系,且可以消灭肿瘤细胞组织,对于癌症相关因子具有抑制作用,有效控制病情进展。

三叶青黄酮对食管鳞状细胞癌细胞迁移、侵袭及自噬的影响

目的 探讨三叶青黄酮对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法 取对数生长期的人ESCC细胞株KYSE150细胞(以下简称KYSE150细胞)分为0μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组、75μg/mL组,采用CCK-8法检测三叶青黄酮溶液干预0、24、48 h后各组细胞活力并计算干预48 h的半抑制浓度(IC_(50)),筛选出三叶青黄酮溶液最佳干预浓度为50μg/mL。取对数生长期的KYSE150细胞分为0μg/mL组、50μg/mL组,采用Transwell小室法检测三叶青黄酮溶液干预48 h后2组细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Snail、Slug蛋白表达量。取对数生长期的KYSE150细胞分为空白组、氯喹组、三叶青黄酮组、三叶青黄酮+氯喹组,空白组不使用药物干预,氯喹组加入10μmol/L氯喹,三叶青黄酮组加入50μg/mL三叶青黄酮溶液,三叶青黄酮+氯喹组加入10μmol/L氯喹与50μg/mL三叶青黄酮溶液干预,均干预48 h后采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量。结果 与0μg/mL组比较,各药物组随着三叶青黄酮溶液浓度的增加,KYSE150细胞活力均逐渐下降(P均<0.05);与0μg/mL组比较,50μg/mL组KYSE150细胞迁移和侵袭数量,N-cadherin、Snail、Slug蛋白表达量均降低(P均<0.05);与空白组比较,氯喹组、三叶青黄酮组及三叶青黄酮+氯喹组KYSE150细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量均显著增高(P均<0.05);与氯喹组比较,三叶青黄酮+氯喹组KYSE150细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量增高更显著(P<0.05)。结论 三叶青黄酮可下调N-cadherin、Snail、Slug蛋白表达量以抑制ESCC细胞的迁移和侵袭能力,上调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与p62的表达诱导自噬体的产生,从而抑制细胞自噬流,发挥对ESCC细胞活力的抑制作用。

三叶青黄酮通过调控miR-497表达对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨三叶青黄酮(RTHF)对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-497的调控作用。方法 体外培养人肺癌细胞A549,加入不同剂量的RTHF处理细胞;miR-NC、miR-497 mimics转染至A549细胞,anti-miR-NC、anti-miR-497转染至A549细胞后加入RTHF处理细胞;采用噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌组织、癌旁组织及各组A549细胞中miR-497的表达量;Western印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果 RTHF可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率及p21、Bax蛋白水平明显降低细胞周期蛋(Cyclin)D1、Bcl-2蛋白水平(均P<0.05);与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-497的表达水平明显降低(P<0.05);RTHF可明显提高A549细胞中miR-497的表达水平(P<0.05);转染miR-497 mimics可明显提高细胞增殖抑制率与凋亡率及p21、Bax蛋白水平,明显降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平(均P<0.05);抑制miR-497表达可明显逆转RTHF对A549细胞增殖、凋亡的作用。结论 RTHF可通过上调miR-497的表达从而抑制肺癌细胞增殖及促进细胞凋亡。

三叶青黄酮诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察三叶青黄酮对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的诱导作用,初步探讨其可能的机制。方法:体外培养SGC-7901人胃癌细胞,并用MTT法检测三叶青黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,光镜和电镜观察细胞形态改变,酶谱分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达改变。结果:三叶青黄酮能显著地抑制SGC-7901细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能降低细胞上清液中MMP-2的含量。结论:三叶青黄酮具有抗肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用,有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。

三叶青黄酮对H-22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用及其机理研究

[目的]观察三叶青总黄酮对H-22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用,探讨其作用机理。[方法]小鼠肝癌H-22细胞右前肢腋窝皮下接种造膜,观察低、中、高剂量三叶青黄酮对荷瘤小鼠抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数的影响,并通过定量RT-PCR检测小鼠皮下移植瘤Fasp-3、CytC的表达情况。[结果]低、中、高剂量三叶青黄酮对H-22荷瘤小鼠的瘤重抑制率分别为34.28%、32.56%和29.24%;皮下移植瘤Fasp-3、CytC mRNA的表达低剂量组明显高于空白组(P<0.05)。[结论]三叶青黄酮可显著抑制肿瘤细胞,这一作用与其能促进肿瘤细胞的促凋亡基因Fasp-3、CytC的表达相关。

三叶青黄酮诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用。方法通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用。结果三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长,并具有浓度依赖性。光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰。结论三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,有抗肝癌的药用价值。

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌鼠免疫抑制相关细胞因子的干预作用

目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠的瘤体及免疫抑制相关细胞因子表达的影响,初步探讨三叶青总黄酮逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制。方法:匀浆接种法建立C57BL/6小鼠Lewis细胞肺癌模型,连续给药14d后观察正常组、模型对照组、三叶青黄酮高、中、低剂量组瘤体增长情况及血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)表达含量。结果:瘤体:高剂量组、中剂量组与模型对照组相比较瘤体大小有统计学差异(P<0.05),瘤体大小依次为:模型对照组>低剂量组>中剂量组>高剂量组。血清TGF-β1表达、PGE2和COX-2含量:各实验组均明显高于正常组(P<0.01),高剂量组<低剂量组(P<0.05)。结论:三叶青黄酮高剂量组抑瘤效果较好,中剂量抑瘤效果次之,低剂量组抑瘤效果不明显。三叶青黄酮的抑瘤作用可能与降低外周血中TGF-β1的表达水平有关,可能通过影响PGE2、COX-2表达水平,从而达到逆转肿瘤逃逸,起到抗肿瘤作用。

三叶青黄酮对H_(22)荷瘤小鼠TIMP-2mRNA表达的影响

目的:观察三叶青总黄酮对H22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用,并探讨其作用机理。方法:小鼠肝癌H22细胞右前肢腋窝皮下接种,观察低、中、高剂量三叶青黄酮对荷瘤小鼠抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数的影响,并通过定量RT-PCR检测小鼠皮下移植瘤基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的表达情况。结果:低、中、高剂量三叶青黄酮对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制率分别为34.28%、32.56%和29.24%;皮下移植瘤TIMP-2 mRNA的表达低剂量组明显高于模型组(P<0.05)。结论:三叶青黄酮可显著抑制肿瘤细胞生长,这一作用与其上调肿瘤细胞TIMP-2基因的表达相关。

三叶青黄酮调节PI3K/Akt-eNOS信号通路对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的分析三叶青黄酮调节PI3K/Akt-eNOS信号通路对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法将对数生长期T24细胞分为空白对照组、高浓度组、低浓度组,空白组在处理时采用空白培养基培养,高浓度组和低浓度组细胞在处理时采用100μg/mL和50μg/mL浓度三叶青黄酮干预;检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性,检测细胞中PI3K、Akt、p-Akt、eNOS、β-actin蛋白表达水平。结果空白组、低浓度组和高浓度组T24细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性存明显差异,其中高浓度组细胞增殖、迁移和侵袭活性最低,高浓度组细胞凋亡活性最高,且组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);Hoechest染色结果显示,空白组细胞细胞核相对较为完整,且颜色均一,低浓度组和高浓度组细胞细胞核出现坍缩,出现裂解碎块并可见凋亡小体,且随给药浓度增高,细胞凋亡越高;空白组、低浓度组和高浓度组T24细胞PI3K、p-Akt、eNOS水平存明显差异,其中高浓度组细胞PI3K、pAkt、eNOS水平最低,且组间两两比较均存统计学意义(P<0.05)。结论三叶青黄酮可通过调节PI3K/Akt-eNOS信号通路实现抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制研究

目的分析三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法将膀胱癌T24细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别使用空白培养基、50μg/mL三叶青黄酮、100μg/mL三叶青黄酮干预;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,使用MTT法检测T24细胞的凋亡抑制率;使用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、STAT3、β-actin水平。结果高剂量组的膀胱癌细胞细胞增殖抑制率明显高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、低剂量组、高剂量组膀胱癌细胞凋亡率有明显差异,其中高剂量组中细胞凋亡率最高,差异有统计学意义(P<0.05);各组Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、STAT3表达水平有明显差异,其中高剂量组细胞Caspase-3、Caspase-9、Bax表达水平最高,Bcl-2、STAT3水平最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三叶青黄酮调控STAT3信号通路抑制膀胱癌细胞增殖并促进其凋亡。

基于内吞作用途径的三叶青黄酮抗肺癌细胞A549的miRNA调控作用

目的:探讨三叶青黄酮抑制肺癌细胞A549增殖、侵袭及诱导凋亡的机理。方法:通过miRNAseq结合生物信息学技术,分析三叶青黄酮处理肺癌细胞A549后细胞miRNA参与调控增殖抑制、侵袭抑制和凋亡诱导的作用途径。结果:三叶青黄酮处理肺癌细胞A549后,差异表达已知miRNA靶基因KEGG聚类分析显示细胞内吞作用途径显著富集,且该途径中靶基因与肿瘤细胞发生与发展存在密切关系。结论:基于内吞作用途径的miRNA调控作用是三叶青黄酮抑制肺癌细胞A549增殖和侵袭及诱导凋亡的重要机理之一。

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤组织凋亡相关蛋白的影响

探索三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠免疫功能及肿瘤组织凋亡相关蛋白的影响。将60只小鼠随机分为对照组、模型组、三叶青黄酮高、中、低剂量组(100、50、25 mg/mL)各10只。连续干预14天后,检测各组胸腺指数、脾脏指数、移植瘤组织凋亡及凋亡相关蛋白表达,检测外周血调节性T细胞(Treg)比例。结果显示,与模型组比,三叶青黄酮高中剂量组胸腺指数、脾脏指数和移植瘤组织凋亡率升高(P<0.05),凋亡相关蛋白表达升高(P<0.05),外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞所占比例降低(P<0.05)。综上,三叶青黄酮可降低荷Lewis肺癌小鼠Treg细胞比例,提高免疫功能,诱导移植瘤组织凋亡。

三叶青黄酮诱导髓系白血病NB-4细胞凋亡及信号通路的研究

目的:研究三叶青黄酮(RTHF)对人急性早幼粒细胞白血病NB-4细胞活力、凋亡及MAPK信号通路的影响。方法:采用CCK-8法及BrdU实验分别检测RTHF对NB-4细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测RTHF诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用。Western blot分析RTHF对细胞凋亡及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果:RTHF有效地抑制NB-4细胞的活力及增殖,呈时间和剂量依赖性,作用48 h的IC50为2.26 g/L。RTHF阻滞NB-4细胞进入增殖周期,停滞在G2期,并诱导其凋亡(P<0.01),呈剂量依赖性。RTHF下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax、caspase-3和Cyt-C的表达,呈剂量依赖性(P<0.05)。RTHF对ERK1/2及JNK的表达无明显影响,但可降低ERK5蛋白表达,提高p38的表达水平(P<0.05)。结论:RTHF在体外有效地抑制白血病NB-4细胞活力及增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过p38 MAPK信号通路及凋亡蛋白途径。

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠脾脏单个核细胞PGE2、COX-2表达的影响

目的研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠脾脏单个核细胞前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。方法皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠动物模型,接种14天后取脾脏,分离单个核细胞培养,以转化生长因子β1(TGF-β1)刺激为模型组,塞来昔布(SC58635)为阳性对照,设三叶青黄酮低、中、高浓度组,无TGF-β1及药物为空白对照组。ELISA法测定单个核细胞分泌PGE2、COX-2浓度。结果 TGF-β1刺激24h后,与空白对照组PGE2(99.31±3.82)pg/m L、COX-2(290.49±5.37)pg/m L比较,其余五组PGE2、COX-2均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组脾脏单个核细胞体外分泌PGE2[(138.18±4.00)pg/m L]、COX-2[(331.58±5.78)pg/m L]含量最高。与模型组比较,给药组PGE2、COX-2含量均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。PGE2含量依次为塞来昔布组(110.13±2.38)pg/m L<三叶青黄酮高剂量组(118.18±1.96)pg/m L<中剂量组(121.62±4.44)pg/m L<低剂量组(128.90±4.24)pg/m L。COX-2含量依次为塞来昔布组(309.51±2.85)pg/m L<三叶青黄酮高剂量组(319.64±2.29)pg/m L<中剂量组(323.92±2.61)pg/m L<低剂量组(327.07±4.53)pg/m L。给药组组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论三叶青黄酮在体外可能通过影响PGE2、COX-2表达水平,改善肿瘤微环境,起到抗肿瘤作用,其作用与剂量呈正比。

三叶青总黄酮通过STAT3信号通路诱导膀胱癌细胞凋亡

目的 探讨体外使用三叶青总黄酮(TFTH)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其对信号转导与转录激活因子(STAT)3信号通路的作用机制。方法 对人膀胱癌BIU-87细胞进行体外培养,将不同浓度TFTH加入培养基对BIU-87细胞进行培养,通过细胞对数试剂盒(CCK)-8试验分别检测不同浓度TFTH(0、20、50、100μg/ml)组作用24、48 h后对细胞增殖的影响;流式细胞技术分析不同浓度TFTH作用24、48 h后对细胞凋亡率的影响;Western印迹检测不同浓度TFTH对Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)2、STAT3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的影响。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,对癌细胞增殖均有抑制作用(P<0.01);细胞凋亡检测结果显示,不同浓度TFTH处理BIU-87细胞24或48 h后,均有诱导癌细胞凋亡作用(P<0.01),且TFTH对细胞增殖或凋亡呈剂量时间依赖性;Western印迹结果显示,不同浓度TFTH处理后的BIU-87细胞,其JAK2、STAT3、VEGF和TGF-β1蛋白表达均明显降低,Bax蛋白表达明显升高,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 TFTH可通过体外抑制膀胱癌BIU-87细胞JAK2/STAT3信号通路表达,使JAK2、STAT3、TGF-β1、VEGF蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,从而抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖和诱导细胞凋亡。

三叶青总黄酮克服吉非替尼耐药的体外研究

目的研究三叶青总黄酮克服人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞对吉非替尼的耐药性及机制。方法首先,采用大孔吸附树脂分离纯化三叶青总黄酮。然后,将PC9/R细胞(PC9细胞的获得性吉非替尼耐药株)分为对照组(CK组)、吉非替尼组(G组)、三叶青总黄酮组(TF组)、吉非替尼联合三叶青总黄酮组(G+TF组),运用MTT法检测不同浓度三叶青总黄酮、吉非替尼对PC9/R细胞增殖情况以及两药联用效果。G组、TF组和G+TF组分别加入吉非替尼17μM、三叶青总黄酮20或30μg/mL、吉非替尼17μM+三叶青总黄酮20或30μg/mL,CK组则不加药处理。加药24 h后,利用流式细胞术分别检测不同组别PC9/R细胞凋亡情况。最后,运用Western blot法检测不同处理后,细胞内表皮生长因子受体(EGFR)信号通路及其旁路肝细胞生长因子(HGF)/MET/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)中各蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示,与G组细胞活性[(80.24±7.12)%]比较,G+20μg/mL TF组[(40.16±1.43)%]和G+30μg/mL TF组[(29.89±3.19)%]可显著抑制PC9/R细胞增殖(P<0.01);流式细胞术结果显示,G+20μg/mL TF组[(16.96±1.04)%]和G+30μg/mL TF组[(25.70±3.83)%]细胞凋亡率显著高于G组[(4.19±0.82)%],差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果表明,G+TF组EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、p-PI3K、STAT3、p-STAT3、MET和p-MET蛋白的表达量分别低于G组。结论三叶青总黄酮抑制人NSCLC细胞对吉非替尼的耐药性,其作用机制可能与调控EGFR信号通路及其旁路HGF/MET/PI3K/AKT通路有关。

Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响

目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC)EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制。方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5~20 g·L^(-1))三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P<0.05,P<0.01),三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一。