紫外辐射对东北红豆杉鲜叶中紫杉醇及三尖杉宁碱含量的影响

分别采用254、365nm两种波长的紫外光对东北红豆杉鲜叶进行辐射,研究了波长、辐射时间以及样品处理方式对东北红豆杉鲜叶中紫杉醇及三尖杉宁碱含量变化的影响。结果表明,东北红豆杉鲜叶经匀浆处理后接受紫外辐射,两种波长的紫外光都可以使紫杉醇及三尖杉宁碱的含量增加,但不同波长对紫杉醇及三尖杉宁碱含量提高的趋势却不相同。365nm的紫外光辐射2h时使紫杉醇和三尖杉宁碱含量均提高到了最大值,两种物质含量分别提高了44.6%和53.0%,而254nm的紫外光在辐射8h时才达到最大值,两种物质含量分别提高了39.2%和24.3%。可以选取365nm的紫外光对东北红豆杉鲜叶水匀浆体系进行辐射,快速高效地提高鲜叶内紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。

树龄和性别对天然东北红豆杉中紫杉醇及三尖杉宁碱质量分数的影响

在黑龙江穆棱东北红豆杉自然保护区采集了不同树龄、不同性别的天然东北红豆杉(Taxus cuspidataSieb.et Zucc.)当年生和2年生枝,利用反相高效液相色谱对108株东北红豆杉(胸径d在1.8～72.2 cm之间)枝中紫杉醇及三尖杉宁碱质量分数进行测定分析。结果表明:随树龄增加,紫杉醇质量分数呈先上升后下降的趋势,而三尖杉宁碱质量分数随树龄增加而降低。d≤15 cm和d>60 cm径级组内,雄株紫杉醇质量分数高于雌株;15 cm<d≤30 cm径级组内,雌株的紫杉醇质量分数明显高于雄株。d≤15 cm径级组内,雌株三尖杉宁碱质量分数高于雄株,此后雄株三尖杉宁碱质量分数相对于雌株增加更多;在d>60 cm径级组内,雄株紫杉醇质量分数高于雌株。总体上,在d>30 cm之后,雌雄株的紫杉醇和三尖杉宁碱质量分数变化趋势一致。

天然东北红豆杉枝中紫杉醇和三尖杉宁碱含量变化特征

为研究天然东北红豆杉枝中紫杉醇和三尖杉宁碱的积累特点,系统采集了不同年龄、不同性别、不同营养时期和不同坡向的天然东北红豆杉枝样品,利用反相高效液相色谱对当年生、2年生和多年生枝中紫杉醇及三尖杉宁碱含量进行测定分析。结果表明:1)随树龄增加枝中的紫杉醇含量呈先上升后下降的趋势,而三尖杉宁碱含量随树龄增加而降低;2)雌株和雄株枝中两种紫杉烷类物质含量只在较大径级(>60cm)时有明显差异,即雌株中含量低于雄株,而在<60cm径级范围内,雌株和雄株间两种物质含量没有显著差异;3)随着营养时期的变化,从4月到10月,枝中两种紫杉烷类物质的含量整体呈先上升后下降并趋于稳定的变化趋势,其中紫杉醇含量在8、9月达到峰值,三尖杉宁碱含量在7、8月达到峰值;4)在不同坡向上,只有在较小径级植株的当年生枝中,阳坡两种物质含量高于阴坡,而在较大径级时无显著差异。

高速逆流色谱-重结晶法制备高纯度三尖杉宁碱和紫杉醇

通过高效液相色谱测定紫杉醇粗提物中三尖杉宁碱和紫杉醇的纯度分别为33.1%和36.5%,采用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-乙醇-水(5∶7∶5∶1∶6.5,v/v)体系,利用高速逆流色谱仪分离得到三尖杉宁碱和紫杉醇馏出物纯度分别为88.4%和89.7%,以50%乙腈进行重结晶后,三尖杉宁碱和紫杉醇纯度分别为98.7%和97.6%。

正相色谱和反相色谱法分离提纯东北红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱

以东北红豆杉树叶为原料,采用正相色谱和反相色谱法分离提纯了紫杉醇和三尖杉宁碱。反相色谱中使用了一种新颖的高分子填料。东北红豆杉枝叶经过一次正相色谱分离后,再经两次反相色谱分离,分离得到两种白色针状固体。经1H NMR和13C NMR测试表明,两种物质分别为紫杉醇和三尖杉宁碱,纯度达到98%以上,产率分别为树叶干重的0.0022%和0.0018%,回收率大于70%。

薄层色谱法分离紫杉醇和三尖杉宁碱

建立了用薄层色谱分离紫杉醇和三尖杉宁碱的方法。方法中以正己烷-二氯甲烷-甲醇-三乙胺(体积比4.5∶3.5∶0.5∶1.0)四元体系为展开剂,在硅胶薄层板上成功地分离了紫杉醇和三尖杉宁碱,所得斑点清晰、无拖尾。同时以该体系为展开剂,使用薄层色谱法指导分离提取紫杉醇和三尖杉宁碱过程中反相色谱流分的合并,方法快速、简单、成本低,取得了满意的结果。

紫杉醇、三尖杉宁碱和7-表-10-去乙酰基紫杉醇的分离及7-表-紫杉醇的转化研究

目的探索从云南红豆杉树皮提取物中分离紫杉醇、三尖杉宁碱和7-表-10-去乙酰基紫杉醇3种纯化合物以及7-表-紫杉醇转化成紫杉醇的高效方法。方法用乙酸叔丁酯为单流动相,硅胶为填充柱的正相色谱系统分离。使用碱性氧化铝,在40℃对7-表-紫杉醇进行催化而转化成紫杉醇。结果与结论分离得到紫杉醇、三尖杉宁碱和7-表-10-去乙酰基紫杉醇3个纯化合物.7-表-紫杉醇转化率可达30％。

云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定

目的 建立云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量测定方法。方法 采用HPLC法，选用Angilent Hypersil ODS2色谱柱，流动相甲醇-乙睛-水（20：30：50），检测波长227nm，柱温30℃，对云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量进行了测定。结果 紫杉醇和三尖杉宁碱均在0．04～1．2μg之间呈线性关系，紫杉醇平均回收率为96．93％（RSD=1．62％，n=5），三尖杉宁碱平均回收率为96．68％（RSD=1．81％，n=5）。结论 该含量测定方法准确可行，重复性好，可以作为测定红豆杉枝叶中紫杉醇和的三尖杉宁碱含量的高效液相色谱方法。

RP-HPLC法测定新乡种植红豆杉树皮中的三尖杉宁碱

建立一种反向高效液相色谱法定量检测蛹虫草培养基中活性成分腺苷含量和虫草素含量的方法.色谱柱为Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相：0.02 mol/L KH2PO4∶甲醇（体积比85∶15）溶液；流速：1.0 mL/min；检测波长：260 nm .腺苷的线性测量范围为0.5~100μg/mL（R=0.9999），平均回收率为105.3%，标准品RSD=0.76%（n=5），样品RSD=1.87%（n=5）；虫草素的线性测量范围为0.5~100μg/mL（R=0.9999），平均回收率为104.0%，标准品RSD=0.95%，样品RSD=1.23%.本测定方法线性范围宽、分离度好、具有良好精密度，可定量、准确分析不同蛹虫草培养基中活性成分腺苷和虫草素含量.

东北红豆杉中紫杉醇及三尖杉宁碱含量测定方法的研究

采用均匀设计的方法,在不同条件下对东北红豆杉中紫杉醇及三尖杉宁碱进行提取,结果表明:室温下,80%甲醇超声波辅助提取30min为样品最佳提取条件;利用高效液相色谱仪对东北红豆杉不同部位中紫杉醇和三尖杉宁碱含量进行测定,其含量排序为:树皮>当年生枝>当年生叶>假种皮,与树皮相比,虽然当年生枝叶中紫杉醇的含量低,但作为可更新资源,具有替代树皮成为提取紫杉醇原料的潜力。

分析紫杉醇与三尖杉宁碱的简易方法

以粒径单分散聚苯乙烯反相色谱填料为色谱柱固定相,即采用MKF-DK-RP型分析柱（300mm×7.8mm,8μm）,流动相为乙腈-水溶液,流速为1.0mL/min,检测波长为229nm,建立了一种分析紫杉醇与三尖杉宁碱的简易方法。结果表明,本方法可使紫杉醇与三尖杉宁碱达到有效分离,且紫杉醇的检测浓度在0.0625~2.0mg/mL范围内线性关系良好（r=0.9999）。本方法简单,重复性好。

超声波下2″,3″-二溴化三尖杉宁碱的高效还原研究

Dibromocephalomannine(DIBROCs)is the intermediate product in the purification of taxol. In this paper, we successfully realized the efficient conversion of DIBROCs to cephalomannine under ultrasound irradiation for the first time. Ultrasound irradiation, a favorable acceleration of reaction rates, could solve the problems of incomplete conversion of DIBROCs to cephalomannine and the by-products due to long reaction time under the traditional stirring condition. The results showed that under ultrasound irradiation zinc powder was more effective than other metal powder and the proper reaction temperature was 20 ℃. Under this condition the conversion was more than 98% in 40 min.

东北红豆杉一株产三尖杉宁碱内生真菌Xylaria Primorskensis Y32的分离与鉴定

目的:从东北红豆杉中分离纯化出一种产三尖杉宁碱的内生真菌,为三尖杉宁碱的来源提供了新的途径。方法:采用组织块分离法分离东北红豆杉叶内生真菌,利用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS/MS)法对内生真菌发酵液提取物成分进行分析,并通过表面形态观察及真菌ITS序列对产三尖杉宁碱的内生真菌进行种属鉴定。结果:内生真菌Y32可特异性产三尖杉宁碱,菌落呈现花纹放射状,中心呈现棕色,边缘呈现白色;经ITS序列比对,该菌与Xylaria primorskensis ITS序列相似性为98%。结论:从东北红豆杉中分离到一株产三尖杉宁碱的内生真菌Y32,鉴定为滨海炭角菌(Xylaria primorskensis)。

高效液相色谱-串联质谱法测定白酒中紫杉醇和三尖杉宁碱

将自制的红豆杉果酒注入质谱仪,确定红豆杉在白酒中的特征成分为紫杉醇和三尖杉宁碱。红豆杉酒样品用70%(体积分数)甲醇溶液稀释,离心后,采用高效液相色谱-串联质谱法测定上清液中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。以ACQUITY UPLC R BEH C18色谱柱(2.1 mm×50mm,1.7μm)为固定相,以不同体积比的甲醇和水的混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式。紫杉醇和三尖杉宁碱的质量浓度在一定范围内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)均为2.5μg·kg-1,测定下限(10S/N)均为8.3μg·kg-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为96.4%~116%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.1%~2.6%。

液相色谱-串联质谱法测定白酒中紫杉醇和三尖杉宁碱含量

目的建立液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测白酒中红豆杉特征组分紫杉醇和三尖杉宁碱含量的方法。方法样品经甲醇-水(7:3,V/V)提取液提取,采用水(A)和甲醇(B)作为流动相进行梯度洗脱,外标法定量,质谱采用电喷雾电离正模式(positive electrospray ionizationm,ESI+)和多离子检测模式(multiple reactions monitoring,MRM)对紫杉醇和三尖杉宁碱的定量离子、定性离子进行监测。结果在50~1000 ng/L范围内,紫杉醇和三尖杉宁碱呈良好的线性关系,相关系数r2不小于0.995,方法的检出限为2.5μg/kg,定量限为8.3μg/kg。紫杉醇和三尖杉宁碱在2.5、7.5、25.0μg/kg 3个水平下加标回收率为96.4%~115.6%,相对标准偏差不超过2.53%(n=6)。用该方法检测市售红豆杉果实酒、红豆杉树皮酒,均检测出紫杉醇和三尖杉宁碱。结论该方法便捷、高效、准确、灵敏,可用于测定非法添加红豆杉保健酒中紫杉醇和三尖杉宁碱含量。

通过侧链结构修饰将三尖杉宁碱转化为紫杉醇的工艺研究

目的:开发一种不需要手性侧链的简便、经济的紫杉醇半合成制备新方法。方法:以红豆杉中的紫杉烷类似物三尖杉宁碱为原料,经选择性酰化、羟基保护、裂解反应、酰基转移反应及脱保护反应后得到紫杉醇。结果:三尖杉宁碱经过5步反应后以70.5%的得率转化为紫杉醇。结论:具有与紫杉醇相同母核结构且侧链在C3’具有酰胺基的紫杉烷类似物,可以通过裂解反应形成活性氨基,然后通过酰基转移或直接酰化方式在活性氨基位置引入苯甲酰基形成紫杉醇。

喜马拉雅红豆杉与曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱含量比较

目的：测定并比较维吾尔药材喜马拉雅红豆杉与人工栽培品种曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。方法采用RP‐HPLC色谱法梯度洗脱，色谱柱为 Century SIL C18‐EPS 柱（250 mm x4．6 mm ，5μm ）；流动相为乙腈‐水；流速为1．0 mL· min－1；检测波长为227 nm ；柱温为30℃。结果紫杉醇回归方程：Y＝2．050975x107 X＋5531．887，线性范围为0．042～1．69μg（r＝0．9999），平均回收率为98．0％，RSD＝0．98％（n＝6）；三尖杉宁碱回归方程Y＝1．806535x107 X＋3046．378，线性范围为0．040～1．6μg（r＝0．9999），平均回收率为96．6％，RSD＝2．97％（n＝6），喜马拉雅红豆杉叶中三尖杉宁碱平均含量高于茎中含量，曼地亚红豆杉相反；两者叶中紫杉醇含量高于茎中含量，而曼地亚红豆杉茎叶中紫杉醇含量并不低于喜马拉雅红豆杉。结论该方法简便、准确、适用于红豆杉药材的质量评价。

7-表-10-去乙酰基三尖杉宁碱的HPLC分析方法及其溴化产物的抗癌活性研究(英文)

分别在C18柱和MetachemTaxsil 3紫杉醇专用柱上研究了云南红豆杉粗提物中紫杉醇(1)、三尖杉宁碱(2)、7 表 10 去乙酰基紫杉醇(3)和7 表 10 去乙酰基三尖杉宁碱(4)的反相色谱行为.在MetachemTaxsil 3紫杉醇专用柱上,水:乙腈(54:46)的流动相使这四种色谱行为相近的化合物获得了基线分离.使用溴化法处理含有(2)和(4)的红豆杉粗提物,通过分离纯化得到了二溴 7 表 10 去乙酰基三尖杉宁碱的两个非对映异构体(5和6).体外活性实验结果表明,5和6对于人乳腺癌(MCF 7)、人肺癌(A549)和人卵巢癌的体外毒性比紫杉醇略强.

紫杉醇联合三尖杉宁碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以HepG2细胞作为体外模型,研究紫杉醇与三尖杉宁碱联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用。方法:MTT法检测不同浓度紫杉醇、三尖杉宁碱单药及不同联合给药方案对HepG2细胞的生长抑制作用;以PI染色法流式细胞仪分析不同给药方案对HepG2细胞周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法分析不同联合给药方案对HepG2细胞凋亡的影响。结果:MTT法证实不同给药方案对HepG2细胞抑制强度不同,紫杉醇和三尖杉宁碱同时给药无明显协同作用;先给予三尖杉宁碱24 h再给予紫杉醇和先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱可见明显协同作用,先给予紫杉醇24 h再给予三尖杉宁碱协同作用更加明显,流式细胞仪检测结果显示,紫杉醇与三尖杉宁碱联合用药较二者单独用药可诱导更多HepG2细胞凋亡。结论:紫杉醇与三尖杉宁碱联合应用可协同抑制HepG2细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。

循环高速逆流色谱从曼地亚红豆杉枝叶提取物中分离紫杉醇和三尖杉宁碱

目的研究曼地亚红豆杉枝叶提取物中分离紫杉醇及其类似物三尖杉宁碱的方法,提高紫杉醇的回收率及质量分数。方法曼地亚红豆杉枝叶提取物先经Al2O3柱纯化后,再以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-乙醇-水(5∶7∶5∶1∶6.5)为溶剂系统,利用循环高速逆流色谱分离紫杉醇和三尖杉宁碱。结果经循环高速逆流色谱循环一次后,三尖杉宁碱与紫杉醇即达到基线分离,紫杉醇质量分数达98.2%以上,回收率83.0%。结论循环HSCCC法为分离紫杉醇和三尖杉宁碱提供了一条简便、快速的方法,使制备高质量分数、高回收率的紫杉醇成为可能。