三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的生物活性及临床应用

概述了从粗榧科植物中分离的抗肿瘤生物碱三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱等的生物活性 ,包括其实验及临床药理、临床毒性、分子药理机制、化学研究和未来市场的研究展望。

高效液相色谱法检测血清中的高三尖杉酯碱

目的：利用高效液相色谱法测定血清中的高三尖杉酯碱的含量。方法：以内标法为基础，取１ｍＬ血清标本加入内标三尖杉酯碱，经二氯甲烷２次重复提取，减压蒸干，残渣用流动相溶解，进样。色谱条件：以Ｃ１８反相柱为分析柱，流动相组成为０１ｍｏｌ·Ｌ－１甲酸铵－甲醇（２∶１），流速为１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，在紫外检测器波长２９０ｎｍ处进行检测。结果：方法学检查：最低检测限２ｎｇ·ｍＬ－１，在４～１５００ｎｇ·ｍＬ－１范围内呈线性，回收率９１３％（ｎ＝８），批内和批间的相对标准偏差分别为１２％（ｎ＝８）和３６％（ｎ＝４）。结论：对临床化疗常与之配伍使用的３种药物，进行干扰实验，未发现干扰峰。

高三尖杉酯碱和异三尖杉酯碱对人急性早幼粒白血病细胞凋亡的诱导作用

目的研究高三尖杉酯碱和异三尖杉酯碱对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０凋亡的影响。方法采用流式细胞术、ＤＮＡ凝胶电泳、光镜及透射电镜等方法。结果证明高三尖杉酯城及异三尖杉酯碱能快速、显著地诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡，其作用有明显的浓度及时间依赖性。高三尖杉酯碱的活性明显高于异三尖杉酯碱。结论高三尖杉酯碱及异三尖杉酯碱皆可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，但高三尖杉酯碱的生物活性明显高于异三尖杉酯碱。

survivin mRNA表达水平与高三尖杉酯碱诱导恶性血液病细胞凋亡的相关性研究

目的:研究surv iv in mRNA在细胞株MUTZ-1、K 562、Jurkat、RPM I、HL 60的表达水平与高三尖杉酯碱(HHT)诱导的凋亡率的关系。方法:应用流式细胞仪技术,研究HHT诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1、人急性红白血病细胞株K 562、人淋巴瘤细胞株Jurkat和人骨髓瘤细胞株RPM I,以及人急性粒细胞白血病细胞株HL 60细胞凋亡。用半定量逆转录酶-多聚酶链式反应,检测上述细胞株及HHT作用MUTZ-1细胞后凋亡蛋白抑制因子surv iv in、X IAP的表达。结果:细胞株MUTZ-1、K 562、Jurkat、RPM I、HL 60均表达surv iv in、X IAP mRNA,HHT能诱导各细胞株凋亡,HHT诱导的凋亡率与细胞株surv iv in mRNA表达呈负相关。结论:surv iv in在细胞中的表达水平可能直接影响细胞对化疗药物的敏感性,可作为预测细胞耐药的指标之一,同时也可能将成为肿瘤治疗的新靶向。

用改进逆流分配法分离三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱

对三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱混合物的分离利用经改进的逆流分配法，用经ｐＨ５缓冲液饱和的氯仿作流动相，经氯仿饱和的ｐＨ５磷酸氢二钠－枸橼酸作固定相，醋酸乙酯∶丙酮（６∶２．５）作展开剂，碱性硅胶板作薄层板，经对５批混合物进行分离，均分别获得三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的白色结晶。各项指标检查均符合标准。

微量液体克隆形成法体外检测三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱对CFU—GM及L—CFU的细胞毒作用

基于琼脂半固体培养法和极限稀释微孔池培养法,建立了一种新的体外药敏检测体系——微量液体克隆形成法。并应用该体系检测了三尖杉酯碱(H)和高三尖杉酯碱(HH)对CFU—GM及L—CFU的细胞毒作用。结果提示:24h及168h作用法时,HH对CFU—GM以及L—CFU的细胞毒作用均大于H,H、HH对L—CFO的细胞毒作用选择性均大于CFU—GM,但HH的细胞毒作用选择性不及H;H、HH的TDI(Time—schedule Depne—dence Index),IC_(90-24h)÷IC_(-90-168h)分别为68、60,说明两药物均为细胞周期时相特异性药物;并对H、HH之间可能存在的同系物间的交叉耐药性作了探讨。

抗癌物质高三尖杉酯碱的提取和研究

前 言 三尖杉(Cephalolaxus Fortunel Hook.f.)属裸子植物,主产我国。民间很早用于消积、润肺、驱虫,1963年国外首先发现其生物碱有抗癌作用。70年代起我国开展研究,均发现三尖杉的总生物碱有一定的抗癌活性,并从其总生物碱中分离出20几种生物碱。经化学和光谱分析鉴定,证明三尖杉酯碱,高三尖杉酯碱,异三尖杉酯碱。

三尖杉酯碱(HA)及高三尖杉酯碱(HHA)治疗急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的临床评价

三尖杉属植物,主产我国。民间用于消积、润肺、驱虫,也用于治疗肿瘤。1971年福建、广东、浙江等地曾分别开展研究,从抗癌药物筛选及初步临床观察,发现三尖杉及海南粗榧总碱具有一定的抗癌活性。本文仅对10年来HA及HHA在临床应用的情况,作一综述。一、10年前临床使用情况 (一)

抗三尖杉酯碱HL－60细胞的抗程序性细胞死亡及其克服

三尖杉酯碱（ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎ，ＨＴ）是中国产植物海南粗榧（ＣｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓＬｉ）中提取的一种抗肿瘤药物，对急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病有较好疗效（１）。三尖杉酯碱可非常有效地诱导敏感ＨＬ－６０细胞程序性死亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ａｐｏ）（２，３）。但超过半致死剂量（ＩＣ５０）近百倍的ＨＴ却不能诱导抗三尖杉酯碱细胞ＨＴ１２程序性死亡。如用维拉帕米（ｖｅｒａｐａｍｉｌ，Ｖｐ）１０μｇ·ｍｌ－１逆转多药抗性后，ＨＴ虽可诱导ＨＴ１２细胞程序性死亡，但与敏感细胞相比，出现程序性细胞死亡的时间大大推迟，用药浓度也提高约１０倍。这些结果提示：程序性细胞死亡可能作为肿瘤细胞是否已形成抗药性的标志之一，同时也说明程序性细胞死亡相关因子可能参与肿瘤细胞抗药性的形成。

三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱诱导人早幼粒白血病细胞的程序性死亡

体外实验证明２×ｌ０７ｍｏｌ·Ｌ－１三尖杉酯碱和１０７ｍｏｌ·Ｌ－１高三尖杉酯碱与ＨＬ－６０细胞作用４ｈ，可诱导该细胞产生程序性死亡。提取细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ梯，同时出现细胞核染色体断裂、核固缩及细胞空泡样变等形态变化。并且在一定范围内具有作用时间和浓度依赖性，二者诱导ＨＬ－６０细胞程序性死亡作用的强弱与其细胞毒作用平行。

硼替佐米单用或联合三尖杉酯碱体外诱导HL-60细胞凋亡实验研究

本研究探讨硼替佐米(bortezomib,Bor)单用或联合三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对HL-60细胞凋亡的影响。以不同浓度Bor、HT处理HL-60细胞12-48小时,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,以DNA凝胶电泳、荧光显微镜检、流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明:10-50nmol/LBor可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。其中10nmol/L剂量处理12小时即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量可使细胞凋亡率明显增加。30nmol/LHT与10nmol/LBor联合应用时,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加。结论:Bor对HL-60细胞具有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应,与HT联合应用有明显的协同作用。

双向凝胶电泳分析三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡

背景与目的:三尖杉酯碱(harringtonine,HT)作为一种抗肿瘤药,已广泛用于治疗急、慢性髓系白血病,并已获得了良好的疗效。目前的研究表明其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关,但具体分子机制不详。本研究主要是分析HT诱导K562细胞凋亡的蛋白谱,寻找凋亡相关蛋白。方法:应用AnnexinⅤ和PI双染法,通过流式细胞术区分HT诱导K562细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段;进一步采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法,对HT诱导凋亡的K562细胞与对照K562细胞进行分离和比较。结果:10μg/mlHT作用于K562细胞5h和24h,凋亡早期细胞(AnnexinⅤ+/PI-)分别为28.3%和18.1%(P<0.01),凋亡晚期细胞(AnnexinⅤ+/PI+)分别为9.1%和20.2%(P<0.01)。配比分析对照组细胞和凋亡早期组、晚期组细胞的蛋白图谱,统计分析表明:对照组K562细胞可分离出1300±50个蛋白点,组内蛋白点匹配率为(88.3±2.0)%。凋亡晚期组细胞中有10个蛋白点发生了明显和稳定的质和量的改变(P<0.01),其中8个蛋白点在凋亡后表达量上调,1个蛋白点表达下调,1个蛋白点只在对照细胞内表达。结论:差异表达的蛋白可能是三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的相关蛋白。

高三尖杉酯碱对人急性髓系白血病干细胞的杀伤作用

目的:观察高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)干细胞的杀伤作用,探讨其分子学机制。方法:用流式细胞仪(FACS)分析AML细胞株白细胞干细胞(LSC)的表型特征,用MTT法检测HHT对具有LSC特征的KG-1细胞的生长抑制作用,用FACS观察HHT对CD34+CD38-CD96+的KG-1细胞数量的影响,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变。结果:KG-1和Kasumi-1细胞CD34+CD38-CD96+分别为69%和26.7%,U937细胞不表达CD96。HHT能显著抑制KG-1细胞的生长,并呈剂量依赖性(r2=0.9971,P<0.05)。48 h的半数抑制浓度为16.9 ng/ml。HHT作用KG-1细胞后,CD34+CD38-CD96+细胞的比例从63.6%下降到17.1%。HHT能显著激活Caspase-3、Caspase-9和PARP,抑制磷酸化Akt和Bcl-2的表达。结论:HHT能显著抑制人AML细胞KG-1的增殖,减少CD34+CD38-CD96+白血病干细胞数量;对Akt活性和Bcl-2的调控可能是其重要的作用机制。

三尖杉酯碱对HL-60细胞凋亡及原癌基因表达的影响

目的 :探讨三尖杉酯碱对急性白血病治疗作用的机制。方法 :用细胞培养、DNA片断凝胶电泳、Westernblot和cDNA阵列杂交等方法检测三尖杉酯碱对HL - 60白血病细胞凋亡及原癌基因表达的影响。结果 :三尖杉酯碱使HL - 60细胞BCL - 2蛋白表达明显较低、c -myc表达较弱、而p15表达较强。结论 :三尖杉酯碱抑制HL - 60细胞增殖、诱导其分化和凋亡 ,其机制可能与三尖杉酯碱下调原癌基因BCL - 2和c-myc、上调抑癌基因p15有关。

三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血病K-562细胞凋亡的实验研究

目的阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测,观察HT对K562细胞株的作用方式,进一步用RT-PCR方法研究bcr/abl基因在转录水平的改变。结果0.01～100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。随着药物作用时间的延长,bcr/abl基因的转录下调。结论低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达,诱导K562细胞凋亡。

HL-60细胞高三尖杉酯碱诱导后CD44表达变化及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱(homohar-ringtonine,HHT)诱导HL-60细胞分化后CD44表达变化及其与细胞周期调控的关系,探讨HHT的作用机制。方法:建立HHT诱导分化模型,瑞氏染色观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达及细胞周期变化,RT-PCR检测CD44、p27、p21和Cyclin E基因在mRNA水平的表达变化。结果:MTT实验显示,HHT对HL-60细胞产生增殖抑制作用,HL-60细胞G0/G1期细胞百分比明显上升,S期细胞百分比明显下降,P<0.05。半定量分析PCR扩增产物光密度相对表达量显示,HHT诱导后HL-60细胞中CD44基因表达逐渐减弱,p27和p21基因逐渐增强,Cyclin E基因逐渐减弱。CD44与p27表达呈明显负相关,r=-0.686,P<0.05。结论:HHT可能通过下调CD44基因,进而提高p27和p21表达,抑制Cyclin E活性而对HL60细胞产生诱导分化作用。

三尖杉酯类生物碱的半合成及结构与抗肿瘤活性的关系

报道１０个氨基酸三尖杉碱醋类衍生物的半合成及抗肿瘤活性，药理实验结果表明，化合物６有显著的抗癌活性，其它化合物亦有不同程度的抗癌活性。通过化学结构与抗癌作用的比较，初步探讨了此类生物碱的构效关系。

小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎

目的 :观察小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎的近期疗效。方法 :三尖杉酯碱 1mg +生理盐水 5 0 0ml/d静脉滴注 ,5～ 7d为 1疗程 ,间隔 2～ 3周 ,总共 3～ 6疗程。结果 :2 0例中显效 12例 (6 0 % ) ,有效 8例 (40 % )总有效率 (10 0 % )。结论 :小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎有效、安全 ,使用方便、费用低廉 ,值得临床应用。