抗白血病药物——三尖杉酯碱类生物碱研究进展

本文综述了近年来三尖杉酯碱类生物碱的药化、药理、药物动力学及临床应用等方面的研究进展,并介绍了此类药物抗肿瘤作用的新机理——对肿瘤细胞诱导分化作用的研究及其在临床上的应用。

高三尖杉酯碱对人急性髓系白血病干细胞的杀伤作用

目的:观察高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)干细胞的杀伤作用,探讨其分子学机制。方法:用流式细胞仪(FACS)分析AML细胞株白细胞干细胞(LSC)的表型特征,用MTT法检测HHT对具有LSC特征的KG-1细胞的生长抑制作用,用FACS观察HHT对CD34+CD38-CD96+的KG-1细胞数量的影响,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变。结果:KG-1和Kasumi-1细胞CD34+CD38-CD96+分别为69%和26.7%,U937细胞不表达CD96。HHT能显著抑制KG-1细胞的生长,并呈剂量依赖性(r2=0.9971,P<0.05)。48 h的半数抑制浓度为16.9 ng/ml。HHT作用KG-1细胞后,CD34+CD38-CD96+细胞的比例从63.6%下降到17.1%。HHT能显著激活Caspase-3、Caspase-9和PARP,抑制磷酸化Akt和Bcl-2的表达。结论:HHT能显著抑制人AML细胞KG-1的增殖,减少CD34+CD38-CD96+白血病干细胞数量;对Akt活性和Bcl-2的调控可能是其重要的作用机制。

三尖杉酯碱对HL-60细胞凋亡及原癌基因表达的影响

目的 :探讨三尖杉酯碱对急性白血病治疗作用的机制。方法 :用细胞培养、DNA片断凝胶电泳、Westernblot和cDNA阵列杂交等方法检测三尖杉酯碱对HL - 60白血病细胞凋亡及原癌基因表达的影响。结果 :三尖杉酯碱使HL - 60细胞BCL - 2蛋白表达明显较低、c -myc表达较弱、而p15表达较强。结论 :三尖杉酯碱抑制HL - 60细胞增殖、诱导其分化和凋亡 ,其机制可能与三尖杉酯碱下调原癌基因BCL - 2和c-myc、上调抑癌基因p15有关。

HL-60细胞高三尖杉酯碱诱导后CD44表达变化及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱(homohar-ringtonine,HHT)诱导HL-60细胞分化后CD44表达变化及其与细胞周期调控的关系,探讨HHT的作用机制。方法:建立HHT诱导分化模型,瑞氏染色观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达及细胞周期变化,RT-PCR检测CD44、p27、p21和Cyclin E基因在mRNA水平的表达变化。结果:MTT实验显示,HHT对HL-60细胞产生增殖抑制作用,HL-60细胞G0/G1期细胞百分比明显上升,S期细胞百分比明显下降,P<0.05。半定量分析PCR扩增产物光密度相对表达量显示,HHT诱导后HL-60细胞中CD44基因表达逐渐减弱,p27和p21基因逐渐增强,Cyclin E基因逐渐减弱。CD44与p27表达呈明显负相关,r=-0.686,P<0.05。结论:HHT可能通过下调CD44基因,进而提高p27和p21表达,抑制Cyclin E活性而对HL60细胞产生诱导分化作用。

高三尖杉酯碱抑制K562细胞端粒酶活性的实验研究

目的 研究高三尖杉酯碱 (HHT)对 K5 6 2细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) -酶联免疫吸附试验 (EL ISA)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) -银染法检测了 K5 6 2细胞的端粒酶活性变化。结果 0 .0 1～ 5 .0 0μg/ m l HHT处理 K5 6 2细胞 3～ 48小时 ,K5 6 2细胞端粒酶活性由 1.2 0 3± 0 .0 78下降至 0 .0 5 4± 0 .0 17,并呈剂量依赖性和时间依赖性。结论 HHT能有效抑制 K5 6

三尖杉酯碱毫微囊的制备

采用氰丙烯酸丁酯、右旋糖酐和葡萄糖制备三尖杉酯碱毫微囊注射剂，其粒径大小、成囊效率、半数致死量以及肿瘤抑制率实验表明，三尖杉酯碱毫微囊在灭菌前后用电子扫描显微镜测得的平均粒径分别为１９．７５±６．７６ｎｍ和３５．０７±１１．４１ｎｍ，透析法测得成囊效率为４９．６％，三尖杉酯碱和三尖杉酯碱毫微囊注射剂的半数致死量分别为３．８３±０．８１ｍｇ／ｋｇ和４．８０±１．１０ｍｇ／ｋｇ，对Ｓ１８０的肿瘤抑制率分别为５４．１７％和６２．１２％．

高三尖杉酯碱诱导原代白血病细胞凋亡及临床意义

目的研究高三尖杉酯碱(HHT)对原代急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞的促凋亡作用及临床意义。方法以20例急性白血病(AL)患者(ALL 7例,ANLL 13例)为研究对象,DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测凋亡细胞。结果HHT体外处理后ANLL和ALL细胞均出现典型凋亡细胞。HHT对ALL和ANLL细胞促凋亡作用差异无显著性[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(26.64±20.67)%,P>0.05]。与柔红霉素(DNR)比较,HHT对ALL细胞促凋亡作用较弱[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(31.64±18.84)%,P<0.05]。联合应用HHT和阿糖胞苷(A ra-C)处理原代ALL细胞,TUNEL阳性细胞率高于单用HHT处理(P<0.001)。体外HA联合处理TUNEL阳性细胞率≥39.6%组,CR率80.0%,TUNEL阳性细胞率<39.6%组,CR率25.0%。结论HHT对原代ALL和ANLL细胞均有促凋亡作用。

survivin mRNA表达水平与高三尖杉酯碱诱导恶性血液病细胞凋亡的相关性研究

目的:研究surv iv in mRNA在细胞株MUTZ-1、K 562、Jurkat、RPM I、HL 60的表达水平与高三尖杉酯碱(HHT)诱导的凋亡率的关系。方法:应用流式细胞仪技术,研究HHT诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1、人急性红白血病细胞株K 562、人淋巴瘤细胞株Jurkat和人骨髓瘤细胞株RPM I,以及人急性粒细胞白血病细胞株HL 60细胞凋亡。用半定量逆转录酶-多聚酶链式反应,检测上述细胞株及HHT作用MUTZ-1细胞后凋亡蛋白抑制因子surv iv in、X IAP的表达。结果:细胞株MUTZ-1、K 562、Jurkat、RPM I、HL 60均表达surv iv in、X IAP mRNA,HHT能诱导各细胞株凋亡,HHT诱导的凋亡率与细胞株surv iv in mRNA表达呈负相关。结论:surv iv in在细胞中的表达水平可能直接影响细胞对化疗药物的敏感性,可作为预测细胞耐药的指标之一,同时也可能将成为肿瘤治疗的新靶向。

含高三尖杉酯碱方案治疗急性髓系白血病疗效与安全性评价

[目的]用meta分析系统评价含高三尖杉酯碱（homoharringtonine，HHT）方案治疗急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）的疗效、并发症及不良反应。[方法]计算机检索PubMed、The Cochrane Library、EMbase、VIP、WanFang Data、CBM和CNKI数据库，检索时限均为从建库至2015年1月，收集HHT治疗AML的临床试验。由两位研究者按照纳入与排除标准，独立进行文献筛选、资料提取和评价纳入研究的方法学质量，采用RevMan5．2软件进行Meta分析。[结果]共纳入7项研究，1051例患者；Meta分析结果显示：含HHT组的方案的完全缓解率（complete remission，CR）及3年无病生存率（event free survival，EFS）高于柔红霉素＋阿糖胞苷（DA）组（P〈0．05），但白细胞减少、出血和感染发生率等并发症与DA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；心脏损害和心脏损害等不良反应发生率明显低于DA组。[结论]含HHT的方案治疗AML安全而有效，且不增加并发症的发生率；HHT获取方便，价格低廉，对于AML的治疗是一种较好的选择，值得临床推广应用。

注射用高三尖杉酯碱无菌粉针处方及工艺研究

目的:确定注射用高三尖杉酯碱合理的处方及制备工艺。方法:用冷冻干燥法将高三尖杉酯碱制备为粉针剂,试验筛选了冻干前药液的浓度、适宜的助溶剂和支架材料,并对高三尖杉酯碱注射用无菌粉末的稳定性进行考察。结果:最佳处方为每100支以1.7g甘露醇与1g乳糖为支架剂,加入0.1g酒石酸制得的粉针剂稳定性良好。结论:经冷冻干燥法制备的高三尖杉酯碱无菌粉针剂成型性、水溶性好,较注射液稳定。

高三尖杉酯碱对急性白血病NB4细胞凋亡机制的影响

目的观察高三尖杉酯碱(HHT)对急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞凋亡的作用及对PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将不同浓度(5、10、50、100、500μg/L)HHT作用于NB4细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞生长的抑制作用,Western blot测定PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果 5～500μg/L HHT可有效抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,且随药物浓度的增加,细胞凋亡率、增殖抑制率明显增加(P<0.05)。Western blot测定结果表明:随着药物浓度(5、50、500μg/L)的增加,PI3K、p-Akt的表达逐渐下降,而Akt的表达无明显变化。结论 HHT能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,并能下调PI3K、p-Akt蛋白的表达,这可能是HHT促使NB4细胞凋亡的机制之一。

急性非淋巴细胞白血病祖细胞集落形成作三尖杉酯碱药物敏感试验与疗效观察

应用PHA—LCM刺激的甲基纤维素体系进行了25例ANLL骨髓细胞去T细胞后的CFU-L培养及Har和Adr药物敏感试验。发现CFU-L体外对Har敏感性与用Har治疗的病人疗效相关,表明Har体外药敏试验能提示临床疗效、CFU-L对Adr的敏感性与Har具有高度一致性。

联合小剂量阿糖胞苷/三尖杉酯碱治疗急性白血病

本文试用小剂量阿糖胞苷/三尖杉酯碱治疗急性白血病11例(急非淋7例,急淋3例原始细胞过多性难治性贫血RAEB1例),结果2例完全缓解,5例部分缓解,总有效为7/11。临床观察认为,大剂量是细胞毒性作用,小剂量则有诱导分化作用。

三尖杉脂碱联合不同干扰素治疗羟基脲无效的原发性血小板增多症疗效观察

目的:观察三尖杉脂碱加不同干扰素治疗羟基脲无效的原发性血小板增多症(PT)的临床疗效。方法:将29例PT患者分为单用化疗组、α干扰素组、γ干扰素组,每组均包括有临床症状组及无临床症状组。结果:三组的总有效率分别为70%、80.0%和100%(P<0.01)。结论:对于PT患者,α干扰素组与γ干扰素组疗效优于单用化疗组;对于α干扰素疗效欠佳的患者可以考虑改用γ干扰素,可能有效。

硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱、三氧化二砷对耐药白血病细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱（HT）、三氧化二砷（As2O3）对HL-60／ADM多药耐药细胞株和难治、复发急性白血病原代细胞增殖、凋亡的影响。方法以HL-60／ADM白血病细胞株及难治、复发急性白血病患者原代细胞为研究对象，采用硼替佐米单独或联合HT、As2O3处理细胞，MTT法观察细胞增殖活力，Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡率及检测胞内阿霉素荧光阳性率，进一步分析硼替佐米逆转耐药能力。结果10～50nmol/L硼替佐米能够抑制HL-60／ADM细胞增殖并引起凋亡，其中40nmol/L处理48h达最大抑制效果；应用15μmol／L As2O3和752nmol/L HT分别与不同浓度硼替佐米联合处理HL-60／ADM细胞，其对HL-60／ADM细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于硼替佐米单药处理组（P值均〈0．05）。10nmol／L硼替佐米能使HL-60／ADM细胞对阿霉素的蓄积作用大大提高。硼替佐米对难治、复发急性白血病患者原代细胞的增殖抑制作用与HL-60/ADM细胞一致。结论硼替佐米能够抑制HL60／ADM细胞及难治、复发急性白血病原代细胞增殖并诱导其凋亡，与HT或As2O3联合具有相加作用。

K562／H20和K562／Mel细胞株对高三尖杉酯碱与马法兰耐药机制的比较研究

为比较高三尖杉酯碱和马法兰的耐药机制，对天然来源抗肿瘤药物高三尖杉酯碱耐药株Ｋ５６２／Ｈ２０与烷化剂马法兰耐药株Ｋ５６２／Ｍｅｌ耐药机制进行研究，发现前者对长春新碱、柔红霉素、阿霉素具有广泛交叉耐药，对马法兰耐药水平较低；后者对氮芥、噻替派有明显交叉耐药。在耐药机制上，前者主要由于多药耐药基因过度表达所致，谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）π、α基因也参与部分耐药机制；后者主要由于ＧＳＴα基因及ＧＳＴ总活性所致。两者似乎均通过ＧＳＴα基因表达升高起作用。

K_（562）和L_（210）耐高三尖杉酯碱细胞系的建立及其耐药机制的初步研究

通过逐渐递增高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）剂量的方法，分别克隆筛选出两株耐ＨＨＴ１６．７和１３．４倍的Ｋ５６２和Ｌ１２１０白血病细胞系。各命名为Ｋ５６２ＨＨＴ和Ｌ１２１０ＨＨＴ。二者对阿霉素、长春新碱、柔红霉索和马法兰等抗肿瘸药物均呈不同程度的交叉耐药。斑点杂交的结果表明二者的多药耐药基因（ＭＤＲ－１）表达明显增强，且用ＭＤＲ－１基因表达产物Ｐ１７０糖蛋白特异性的ＪＳＢ－１单克隆抗体检测Ｋ５６２ＨＨＴ细胞，结果呈强阳件反应，而敏感株为阴性。此外，二者的谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）α和π基因ｍＲＮＡ水平均有提高，而ＧＳＴμ无明显改变。

沙利度胺联合小剂量HA方案治疗老年急性髓系白血病23例

目的:观察沙利度胺联合小剂量HA方案治疗老年人急性髓细胞白血病(AML)的疗效及安全性。方法:回顾分析接受沙利度胺联合小剂量HA方案治疗的老年AML患者23例的临床资料。沙利度胺100mg/d连续口服,小剂量HA方案为高三尖杉酯碱(har)1～2mg/d,静脉滴注,d1～14。阿糖胞苷(Ara-c)25～50mg/d静脉滴注,d1～14。14d为1疗程。1～2疗程结束后评价疗效。治疗1疗程达完全缓解者用常规DA、MA、EA等方案进行巩固治疗,连用2疗程不缓解者则更换方案。观察治疗效果及不良反应。结果:23例患者中,完全缓解7例,部分缓解9例,CR率30.4%,总有效率69.2%。所有患者均顺利完成化疗,不良反应除骨髓抑制外,无严重感染、出血及重要脏器损伤,无早期死亡病例。结论:沙利度胺联合小剂量HA方案治疗老年人AML疗效确切,相对安全,耐受性好。

抗肿瘤植物药的非抗肿瘤临床应用

抗肿瘤植物药是抗肿瘤药物的重要组成部分.已有的植物类抗肿瘤药在肿瘤的治疗中发挥着一定作用,而且在其他疾病尤其是疑难杂病治疗中显示出活力.本文就抗肿瘤药物三尖杉酯碱类、长春碱类、秋水仙碱类、鬼臼毒素、喜树碱和紫杉醇在临床中用于治疗非肿瘤疾病的现状作一综述.