基于斑马鱼模型的三峡阳菊叶水提物安全性评价研究

目的以斑马鱼为模型,评价三峡阳菊叶水提物(WELTGY)对斑马鱼整体形态以及心脏、肾脏和肝脏等主要脏器的影响。方法用不同浓度(2.8、3.4、3.8、4.8、5.8、6.8 mg/mL)的WELTGY处理受精后72 h(72 hpf)的斑马鱼,处理24、48 h后,观察斑马鱼死亡率、畸形率和整体形态;显微镜下观察斑马鱼心脏形态并拍照,记录心率,使用ImagePro Plus 5.1测量斑马鱼静脉窦-动脉球(SV-BA)距离,评价WELTGY对斑马鱼心脏的影响;显微镜下观察拍照记录各组斑马鱼是否有眼水肿,判断WELTGY对斑马鱼肾脏的影响;用WELTGY处理肝脏标记绿色荧光的转基因斑马鱼Tg(LFABP:EGFP),荧光显微镜下拍照记录斑马鱼肝脏荧光情况,评价WELTGY对斑马鱼肝脏的影响。结果与对照组比较,2.8 mg/mL及以下浓度的WELTGY对斑马鱼的整体形态、心脏、肾脏和肝脏无明显影响;3.4 mg/mL以上浓度的WELTGY导致斑马鱼鱼鳔减小,对心脏、肝脏、肾脏无影响;4.8 mg/mL以上浓度的WELTGY导致斑马鱼心率显著降低(P<0.01),对心脏SV-BA距离、肾脏、肝脏荧光强度和荧光面积无明显影响。结论WELTGY毒性微弱,对斑马鱼幼鱼几乎没有毒性;高浓度下会导致轻微心脏毒性,在家禽养殖业的使用中有必要合理控制用量。

三峡阳菊叶水提物的抗炎作用研究

目的利用斑马鱼炎症模型,评价三峡阳菊叶水提取物(WELTGY)的抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法选取受精后3 d(3 dpf)的转基因斑马鱼移入6孔板中,设置对照组(胚胎培养用水)、模型组(胚胎培养用水)和WELTGY 0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL组,作用3 h后,向除对照组外的其他组中分别加入硫酸铜,终浓度为20μmol/L,作用1 h后在荧光显微镜下观察转基因品系Tg(zlyz:EGFP)斑马鱼体内炎症细胞迁移情况;应用DCFH-DA活性氧(ROS)探针对AB野生型斑马鱼染色,观察荧光强度;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)测定野生型斑马鱼炎症相关基因的mRNA水平。结果与模型组比较,0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL WELTGY组斑马鱼中迁移至侧线部位的炎症细胞数量显著减少(P<0.01),斑马鱼荧光强度明显降低,ROS含量减少。与模型组比较,0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL WELTGY组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达显著升高(P<0.05、0.01),核因子抑制蛋白A(IκBαA)、激活蛋白-1(AP-1)的mRNA表达显著降低(P<0.01),炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和前列腺素E2合成酶(PTGES)、髓样分化因子(MyD88)、环氧化酶(COX)-2的mRNA表达显著降低(P<0.01);1.6、3.2 mg/mL WELTGY组核转录因子(NF-κB)的mRNA表达显著下降(P<0.05、0.01);1.6 mg/mL WELTGY组IL-12α的mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论通过构建斑马鱼急性炎症模型验证了WELTGY具有抗炎作用,其机制可能是WELTGY抑制ROS释放,激活PPARγ表达,抑制NF-κB和AP-1转录活性,降低炎症因子表达,从而缓解炎症,为三峡阳菊叶在饲料添加剂中的应用提供参考。