三抗体间接Dot-ELISA检测犬旋毛虫病IgG抗体的研究

本试验成功地建立了检测旋毛虫病犬血清中的特异性抗体的一种新的免疫学诊断法 -三抗体间接 Dot-EL ISA法 ,并与压片镜检法 (TSM)和琼脂扩散试验 (AGID)进行了比较。试验结果表明 ,Dot- EL ISA和 AGID对2 4 5份被检血清的阳性检出率为 2 2 .86 % (5 6 / 2 4 5 )和 6 .94 % (17/ 2 4 5 ) ,两者符合为 30 .36 %。该法的检出率比AGID高 15 .92 % ,比 TSM高 18.37%。Dot- EL ISA的相对灵敏度为 AGID的 6 7.4

溶血三项试验诊断新生儿溶血病的影响因素分析

目的探讨溶血三项试验诊断新生儿溶血病的影响因素。方法选取溶血三项试验诊断新生儿溶血病85例(观察组)及同期未发生溶血病健康新生儿105例(对照组),比较两组新生儿性别、胎龄、身长、体质量、血清间接胆红素水平以及两组产妇年龄、孕次、分娩方式、血清IgG抗体效价。采用Logistic回归分析影响溶血三项试验诊断新生儿溶血病的因素,利用R软件构建新生儿溶血病发生风险Nornogram预测模型列线图,并绘制受试者工作特征曲线评估风险模型的预测效能。结果两组新生儿血清间接胆红素水平及产妇孕次、血清IgG抗体效价比较差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,产妇孕次、血清IgG抗体效价及新生儿血清间接胆红素水平是溶血三项试验诊断新生儿溶血病的影响因素(P均<0.05)。成功构建新生儿溶血病发生风险Nornogram预测模型,模型区分度C-index为0.857。绘制风险模型评估新生儿溶血病的标准曲线,受试者工作特征曲线下面积为0.851(95%CI:0.780~0.923,P<0.05)。结论溶血三项试验诊断新生儿溶血病的影响因素为新生儿血清间接胆红素水平以及产妇孕次、血清IgG抗体效价,基于以上因素构建的风险预测模型对新生儿溶血病的发生有良好预测价值。

海产蟹类血卵涡鞭虫间接荧光抗体快速检测技术

以寄生于三疣梭子蟹血淋巴中的血卵涡鞭虫虫体为抗原,制备了多克隆血清抗体。抗体经健康梭子蟹血淋巴吸附处理后,间接ELISA检测效价达7 680。应用该抗体建立了血卵涡鞭虫的间接荧光抗体检测技术(IFAT)。采用常规显微镜检、PCR及IFAT 3种方法对采集的养殖青蟹、梭子蟹及海捕梭子蟹等18个样本进行了检测。检测结果显示:常规显微镜检阳性检出率为33.3%,而IFAT及PCR检测阳性率77.8%,符合率达100%;阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血细胞则未被染色;可检测到血卵涡鞭虫不同生活阶段的营养体、腰鞭孢子及合孢体阶段。为血卵涡鞭虫的流行病学调查及生活史研究提供了简便实用的方法。

定向偶联制备三肽囊素人工抗原及其多克隆抗体的研制

为研制三肽囊素(Bursin,KHG-NH2,BS)抗体,采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA、OVA)定向偶联,分别制备免疫抗原(BSA-KHG-NH2)和检测抗原(OVA-KHG-NH2)。以BSA-KHG-NH2免疫5只BALB/c小鼠,经4次免疫后,均产生了较高的抗体水平,其中5号小鼠血清抗体效价达1∶125 000。免疫小鼠血清多克隆抗体与检测抗原的结合不仅能被三肽囊素阻断,而且能被GKHG-NH2四肽特异性阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明本试验制备的三肽囊素人工抗原是由载体蛋白的羧基与三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基定向偶联而成。利用小鼠多克隆抗体建立了三肽囊素间接竞争ELISA检测方法,线性范围为15～1 000 ng/mL,IC50为160 ng/mL。

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH2)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH2)和检测抗原(OVA-KHG-NH2)。以BSAKHG-NH2免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH2四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4ng/mL,线性范围为4～500ng/mL,加标检测回收率为85.0%～92.4%。

单抗间接Dot-ELISA检测禽脑脊髓炎病毒抗原的研究

利用制备的禽脑脊髓炎病毒 (AEV)单抗建立了检测AEV抗原的间接Dot ELISA方法 ,对AEV最低检出量为 1 6 0 8μg/mL。人工感染 1日龄SPF鸡 ,取发病鸡 (6～1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本阳性检出率分别为 :脑 1 0 0 % ,胰 96 % ,十二指肠 98% ,腺胃 98%。对 40份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 92 %。对 1 0份AEV病原分离阳性样品 ,检测阳性率为 1 0 0 % 。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原现场应用结果

嘉兴市郊区原为血吸虫病严重流行区,经30余年努力防治,已经达到消灭血吸虫病标准.粪检很难查到阳性病人.单克隆抗体Dot-ELISA检测循环抗原(以下简称Dot-ELISA)的方法具有较高的敏感性和特异性,其循环抗原的检出能反映宿主活动性感染.为此,以本法试用于现场,并同时采用IHA(红细胞间接凝集试验)及COPT(环卵沉淀试验)法比较,以评价其实用价值.

血卵涡鞭虫单克隆抗体的制备与初步应用

用血卵涡鞭虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经常规融合、间接ELISA方法筛选,将所得阳性克隆再经3次亚克隆后,共获得3株针对血卵涡鞭虫的单克隆抗体(2B2、3G4、4G7),单克隆抗体亚类鉴定表明,三者为IgG类抗体。用筛选的杂交瘤细胞株制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为5.12×10-4和8.00×10-4。进一步利用单克隆抗体建立间接荧光抗体方法对单抗特异性进行鉴定,阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血淋巴则未被染色。用单克隆抗体和多克隆兔抗血清以羊抗鼠HRP-IgG为酶标抗体,建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法,该方法对血卵涡鞭虫阳性标本检测符合率为100%。结果表明,制备的单克隆抗体效价高、特异性好,可用于血卵涡鞭虫的早期临床诊断。

525例晚期血吸虫病人循环抗原及抗体检测

嘉兴市是已接近达到消灭血吸虫病标准的地区,粪检很难查到病人。为此,我们应用Dot-ELISA法和COPT法对我市525例晚期血吸虫病人(以下简称晚血)的循环抗原及抗体进行了现场检测,现将结果报道如下。 材料和方法 1 检测对象 嘉兴市城区、郊区的现症、在册晚血病人。均经血防846和锑273治疗过多次,距末次治疗时间都在10年以上。 2 检测方法 2.1 血吸虫循环抗原(CAg)检测 应用中国预防医学科学院寄生虫病研究所提供的单克隆抗体Dot-ELISA试剂盒,按严自助等方法进行。 2.2 血清抗体检测 先用间接血凝试验(IHA)过筛,以血清1∶5稀释出现凝集者进一步作环卵沉淀试验(COPT)。常规操作。COPT以环沉率≥1％为阳性。IHA抗原由宁海县防疫站提供。环卵抗原为热处理超声虫卵,由嘉善县凤桐卫生院提供(系省定点生产单位)。

一宗输血性三日疟的调查报告

目前国内原发感染的三日疟较少见,但近几年输血诱发三日疟感染屡有报导。 1989年7月11日,我市检出首例输血性三日疟。经调查发现,曾在某医院接受同一供血员输血的5例住院病人中,4例输血后感染过三日疟。现报告如下。

检测牛布氏杆菌抗体的血清学方法

印度学者Batra等对斑点ELISA(dot-ELISA)检测牛布氏杆菌抗体进行了实验性评价。第一个实验中共检测776份血样,其结果与血清凝集试验(SAT)和平板ELISA进行了比较。结果三种试验均阴性的有555份、均阳性的有117份,dot-ELISA和平板ELISA阳性而SAT阴性的有68份,仅dot-

西尼罗病毒抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及其应用

目的建立及验证西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)抗体间接ELISA检测方法,并用于评价疫苗的免疫效果。方法以纯化后的WNV E蛋白第三结构域(EDⅢ)蛋白作为包被抗原,建立WNV抗体间接ELISA检测方法,对抗原包被浓度(2.5、5、10、20、40、80μg/ml)、血清稀释度(1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320)、抗原封闭时间(0.5、1、1.5、2 h)、血清孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)、HRP标记的山羊抗马Ig G稀释倍数(1:5 000、1:10 000、1:20 000、1:40 000、1:80 000稀释)及其孵育时间(0.5、1、1.5、2 h)进行优化,并验证该方法的特异性、敏感性及精密性。采用建立的方法检测WNV阴性马血清和病毒样颗粒(WNV-VLPs)疫苗免疫的马血清,与ALPHA公司试剂盒的检测结果进行比较。结果间接ELISA法最佳检测条件为:抗原包被浓度为20μg/ml,4℃包被过夜;Blocking ACE封闭液于37℃封闭1.5 h;加入血清(1:80稀释),37℃孵育1.5 h;加入HRP标记的山羊抗马Ig G(1:20 000稀释),37℃孵育1 h。该方法可特异性检测WNV阳性血清中的WNVE-Ig G抗体;阳性血清稀释至1:2 560时,检测结果仍为阳性;批内和批间的变异系数(CV)均小于7%。25份WNV阴性马血清检测结果均为WNVE-Ig G抗体阴性,经WNV-VLPs疫苗免疫的马血清中的WNVE-Ig G抗体效价水平随免疫次数的增加呈递增趋势,间接ELISA法与ALPHA公司试剂盒的检测结果完全一致。结论成功建立了WNV抗体间接ELISA检测方法,可用于疫苗免疫效果的评价,为开展WNV流行病学调查、诊断及新型疫苗的研发奠定了基础。

系统性红斑狼疮患者血脂异常的临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血脂变化及其与病情活动度和肾脏受累的关系。方法常规方法检测105例SLE组和60例对照组三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的水平,间接免疫荧光法检测抗双链(ds)DNA抗体,并对SLE患者进行活动度评分和肾脏受累情况的评估。结果 SLE组血清中TG水平高于对照组,HDL水平低于对照组(P<0.01),2组LDL水平差异无统计学意义(P>0.05);SLE活动组TG水平高于非活动组,HDL水平低于非活动组(P<0.01或P<0.05),2组LDL水平差异无统计学意义(P>0.05);TG和LDL水平与SLE活动指数(SLEDAI)积分呈正相关,HDL与SLEDAI积分呈负相关(r分别为0.53、0.27及-0.62);dsDNA(+)组TG水平高于dsDNA(-)组,HDL水平低于dsDNA(-)组(P<0.01或P<0.05),2组LDL水平差异无统计学意义(P>0.05);肾脏受累组中TG水平高于非肾脏受累组,而HDL水平低于非肾脏受累组(P<0.01),2组LDL水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLE患者的血脂异常与疾病活动度和肾脏受累有关。

广东潮州某部登革热、流行性乙型脑炎的监测及综合防制研究

目的探索潮州某驻军登革热和流行性乙型脑炎(乙脑)等虫媒病综合防制效果,为预防和控制虫媒病毒病提供科学依据。方法收集发热可疑患者和健康人血标本及蚊虫标本作病毒分离和血清学抗体调查;按全面或随机法调查营区内蚊虫孳生情况,人诱法监测成蚊叮刺率;用C6/36细胞培养法分离病毒并用间接免疫荧光法(IFAT)或逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法鉴定;用IFAT调查健康人群登革热和乙脑抗体;以“治本清源”为原则,普及防病知识和开展爱国卫生运动,针对不同孳生地类型和栖息特点采用不同方法处理。结果经监测发热待查病人和媒介蚊虫均未分离出病毒;健康人群登革热和乙脑的抗体水平不高;处理前蚊类优势种为白纹伊蚊和致倦库蚊,有少量三带喙库蚊和骚扰阿蚊,其中白纹伊蚊的容器指数(CI)为24.1,百户指数(BI)为30.0,均高于规定的危险地区界限20.0。结论该驻地存在登革热和乙脑暴发流行潜在危险,蚊虫密度较高,人群抗体水平低,采用综合防制措施后,经3年连续观察,蚊媒已控制在不足为害的水平。

吉林省1989年医药卫生科研进展

(一)基础医学 1.人C反应蛋白的研究白求恩医大三院合成的CPPC-Sepharose4B是寿命长、易保存、可反复使用、适用大量分离制备CRP高效率的亲和吸附剂。用其提取的CRP产率高,质量达到了日本荣研株式会社CRP标准品质量标准。该研究用杂交瘤技术获得的16株分泌鼠抗人CRP-McAb的细胞是国内最先建立的CRP单克隆细胞株。制备的鼠抗人CRP-McAb的特异性高、亲和力强,用其建立的McAb-PcAb-HRP双抗体夹心ELISA检测CRT的方法,具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便、速度快、定量准确而稳定等优点,适于临床某些疾病的追踪观察。

荨麻疹

982091 慢性荨麻疹患者血清抗幽门螺旋杆菌抗体的检测及意义/顾富祥（南京大学医学院附属鼓楼医院）…//临床皮肤科杂志.-1998,27（1）.