钝顶螺旋藻多糖提取工艺的研究——三氯乙酸(TCA)法的正交实验优化

研究了用三氯乙酸(TCA)脱除蛋白质提取钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)多糖的工艺,并以提取率、样品糖含量与蛋白含量为指标,应用正交实验设计优化了提取液pH值、提取温度及提取时间3个因素。结果表明,在提取液pH值为12、提取温度为90℃及提取时间为8h的最佳条件下,所得螺旋藻多糖为白色粉末,提取率为3.10%,糖质量分数为81.79%,蛋白质量分数为0.57%。

三氯乙酸/丙酮蛋白质提取法在白内障晶状体蛋白提取中的应用

目的：比较不同蛋白质提取方法在白内障晶状体蛋白提取中的效果，寻找适合白内障晶状体蛋白质组学研究的蛋白质提取方法。 方法：采用裂解液溶解白内障晶状体组织样本，超声裂解离心后分别采用三氯乙酸/丙酮法和 ReadyPrep 2 D Cleanup Kit对晶状体蛋白样本进行提取、二维电泳，并对电泳后凝胶进行染色、图像采集和图像分析。 结果：在2-DE图谱上蛋白斑点的相对分子量在14～97．4kDa之间，等电点在5～9之间，其中高丰度蛋白相对分子量处于20～31 kDa范围内，低丰度蛋白斑点相对分子量处于31～43 kDa范围内。经TCA/丙酮沉淀法处理的含有透明质酸钠白内障晶状体蛋白样本，二维电泳凝胶图谱背景较清晰，蛋白斑点较清楚，共检测到35～40个左右的蛋白斑点。 结论：在人白内障晶状体蛋白质组学研究中，TCA/丙酮法具有较好的纯化效果，为人晶状体组织蛋白质组学的质谱分析研究提供了可靠的二维电泳凝胶图谱。

铝在三氯乙酸介质中的腐蚀动力学

采用失重法、极化曲线法和动力学分析,研究了铝在三氯乙酸(TCA)中的腐蚀行为,分析了TCA的浓度和温度对铝腐蚀速率的影响,导出了相应的动力学方程,求得了有关的动力学参数,测算出腐蚀电流密度和腐蚀电位等电化学参数,探讨了铝在TCA中的阳极溶解机理和阴极析氢机理。结果表明,在研究浓度范围内,铝在TCA中为匀速腐蚀,受活化控制;腐蚀速率与TCA浓度的关系遵循Mathur经验式,腐蚀速率和温度的关系符合Arrhenius公式;阴极和阳极反应动力学方程在理论和试验上一致;极化曲线法和失重法结果相吻合,腐蚀过程中铝表面无钝化层产生。

添加TCA循环中间产物加速光滑球拟酵母积累丙酮酸

在维生素限制的条件下 ,研究了添加TCA循环中间产物对光滑球拟酵母多重维生素营养缺陷型菌株CCTCCM2 0 2 0 19生长和积累丙酮酸的影响。该菌株能以TCA循环中间产物为唯一碳源进行生长 ,且在以葡萄糖、乙酸和TCA循环中间产物为复合碳源的平板上菌落数高于分别以葡萄糖和乙酸或TCA循环中间产物为唯一碳源时的菌落数。与其它TCA循环中间产物相比 ,草酰乙酸更能促进细胞的生长、提高丙酮酸产量和对葡萄糖的得率。草酰乙酸能够促进细胞生长 ,是因为T .glabrataCCTCCM2 0 2 0 19菌株能够利用乙酸作为乙酰辅酶A供体。在含有10 0g L葡萄糖和 6g L乙酸钠的培养基中再添加 10g L草酰乙酸进行分批发酵实验 ,可使菌体浓度从 11 8g L提高到 13 6g L ,增长幅度为 15 % ;丙酮酸对葡萄糖的得率 (0 6 6g g)以及生产强度 (1 19g·L- 1 ·h- 1 )分别高出 6 %和2 4 % ,使发酵结束时间提前 8～ 12h。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。

TCA/丙酮沉淀对脑脊液标本中蛋白质双向电泳的影响分析

目的探讨三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀对脑脊液标本中蛋白质双向电泳结果的影响,为脑脊液标本中蛋白检测提供参考。方法采用丙酮沉淀法及TCA/丙酮沉淀法沉淀脑脊液标本中蛋白质,并进行双向电泳实验,观察两种沉淀方法蛋白双向电泳蛋白点数目及形态。结果TCA/丙酮沉淀标本后双线电泳图谱蛋白点342个,蛋白点形态呈点状、边缘清晰,丙酮沉淀标本双向电泳图谱蛋白位点276个,多呈条带状,边缘不清晰,TCA/丙酮沉淀法双向电泳图谱蛋白点数及清晰度高于丙酮沉淀法。结论TCA/丙酮沉淀法能够增加脑脊液标本蛋白沉淀效果,提高脑脊液标本中蛋白双向电泳的灵敏度。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的对TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中的微量蛋白进行测量的效果进行分析。方法采用随机抽样的方法,抽取2007年9月～2010年9月就诊的进行尿液标本检测的患者90例,再将其随机分为A、B、C3组,平均每组30例。A组采用丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定;B组患者采用CAN/TFA沉淀法对微量蛋白进行测定;C组患者采用TCA/丙酮沉淀法对微量蛋白进行测定。对三组的测量结果进行比较分析。结果分析结果表明,C组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显高于其他两组患者,差异有显著的统计学意义(P<0.01);A组患者的蛋白回收率和所得蛋白点数均值都明显低于其他两组患者,有显著的统计学意义(P<0.01)。结论采用TCA/丙酮沉淀法对尿液微量蛋白含量进行测量的效果比较理想,具有操作简单、高效等特点,可以作为临床对患者进行尿液微量蛋白测量的首选方法,值得进一步推广。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的 :探讨TCA/丙酮沉淀法对尿液标本中微量蛋白的效果影响。方法:分别选用丙酮沉淀法和TCA/丙酮沉淀法对尿液标本进行处理,并对两种方法双向电泳结果进行比较分析。结果 :TCA/丙酮沉淀后的尿液标本蛋白点数高于单纯丙酮沉淀,且单纯丙酮沉淀处理的标本清晰度及分辨率均低于TCA/丙酮沉淀处理标本。讨论:在丙酮沉淀前应用TCA可以消除干扰等电聚焦的盐类物质,进一步降低标本的导电能力,提高蛋白提取率。

三氯乙烯亚急性毒作用研究

[目的]探讨静式吸入三氯乙烯(TCE)对SD清洁级雄性大鼠的亚急性毒作用。[方法]将TCE分4个浓度组0 (对照组)、1、5、10g/m3 ,每组2 5只,SD雄性大鼠,对其进行静式吸入染毒,2h/d ,5d/周,连续4周,染毒结束后,再继续饲养1周。于每星期三染毒后每组各随机抽取5只大鼠,收集2 4h尿液,分析其三氯乙酸(TCA)含量作为TCE接触指标,并做尿常规;尿液收集完后采血检测生化指标,同时进行大鼠肝、肾、肺等脏器的病理检查。[结果]各剂量组大鼠4周内均无死亡,体重增长无显著性差异;第3周中、高剂量组和第4、5周高剂量组的肝脏脏器系数变大,与对照组相比,差异有显著性(P <0 .0 5 ) ;第5周高剂量组肾脏脏器系数变大,与对照组相比,其差异有显著性(P <0 .0 5 )。血液生化功能检测未见异常;病理组织学检查发现:染毒组与对照组相比,1～4周肺、肝、肾各脏器病变差异无显著性,第5周高剂量组肺部炎浸(支气管炎)及肾小管内蛋白管型明显增多;1～5周对照组大鼠尿液中均未检测到TCA ;第1、3、4周的中、高剂量组和第2周高剂量组尿中TCA含量增加,和低剂量组相比,差异均有显著性(P <0 .0 5 ) ;同时也发现,1～4周各剂量组大鼠尿中TCA含量随着TCE染毒用量的增加而增加,有一定的线性趋势,各剂量组脱离接触TCE 1周后尿中皆未检测到TCA ;在染毒4周?

以醪中的丙酮酸为指标进行的发酵管理

丙酮酸是糖分解系统的中间体，是TCA循环分支点的重要有机酸。一般的酒醪在发酵初期，丙酮酸生成量最高，以后逐渐减少。若对丙酮酸含量最高的初期醪进行压榨，丙酮酸会大量转换成乙醛，形成一种木香味。后期酒醪中有少量丙酮酸，能增强酒味的刚性，如果丙酮酸含量接近0mg／L，则酒味显得缠绵。佐藤等报告认为丙酮酸与酵母的增值、活性和发酵有关。为此，用吟酿酒醪为样品，测定其丙酮酸浓度、波美度、日本酒度、酒精含量、氨基酸、酵母数、ATP浓度，结果表明，丙酮酸浓度值与醪的熟成度有很大关系，是决定醪可否进行压榨的重要指标。

适用于盐生植物的双向电泳样品制备方法

比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA)、三氯乙酸沉淀法(E-TCA)和酚抽法(Phe)3种方法对盐生植物盐角草(SalicorniaeuropaeaL.)总蛋白的提取效果。3种方法分别得到579、343和535个蛋白点;TCA和E-TCA法所得图谱均存在严重的横向纹理,Phe法所得图谱则背景干净,基本上没有纹理。说明Phe法不仅能很好地提取盐角草蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。对Phe法的提取液进行了改进,所得图谱背景更加清晰,蛋白点数增加。为其他盐生植物以及嗜盐微生物蛋白质的提取提供了重要参考。

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。

改良TCA/丙酮沉淀法去除肥胖人群血浆中的高丰度蛋白质

目的对传统的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法进行改良,探索一种较好的高脂血浆的高丰度蛋白去除方法。方法分别用不同体积(1、3、4、5、6、8、10和20倍样品体积)、不同TCA浓度(10%、30%、40%、50%、60%、70%)的TCA/丙酮溶液处理高脂血浆处理所得上清和沉淀蛋白样品分别进行一维十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证比较,确定去除效果最佳的TCA/丙酮溶液,用该浓度TCA/丙酮溶液与含有10%三氯乙酸的TCA/丙酮溶液同时处理血浆,对所得沉淀蛋白进行二维SDS-PAGE验证,并对所得上清和沉淀蛋白质进行Nano HPLC-Chip-MS/MS鉴定比较。结果 4倍样品体积的TCA/丙酮溶液去除高丰度蛋白的效果较好,增加或减少TCA/丙酮溶液的体积都会影响去除效率;60%TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效率比10%、20%、30%、50%TCA/丙酮好,而70%TCA/丙酮溶液处理血浆的重复性较差。质谱鉴定结果显示,4倍样品体积的60%TCA/丙酮溶液与10%TCA/丙酮溶液处理后的血浆样品相比,可鉴定更多的低丰度蛋白质。结论用4倍样品体积的60%TCA/丙酮溶液去除血浆中高丰度蛋白质的效果最为理想,尤其适用于较高脂含量的样品的处理。

2型猪链球菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

为改进适用于2型猪链球菌分泌组双向电泳样品的制备方法,本研究将无蛋白细菌培养液培养2型猪链球菌,分别以超滤-冻干法、超滤-冻干-丙酮沉淀法和改良超滤-冻干-三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法富集培养物上清中的细菌分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高。因此,改良浓缩-冻干-TCA/丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的2型猪链球菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。

小麦幼穗蛋白质双向电泳条件的优化

本研究以温光敏小麦为试材,用TCA/丙酮和酚提取法提取小麦幼穗蛋白样品,进行了双向电泳优化分析,并对双向电泳过程中出现的问题进行了讨论。结果表明,用TCA/丙酮法提取小麦幼穗蛋白质其产率(浓度)高于酚提取法。SDS-PAGE电泳显示,用TCA/丙酮提取法提取的蛋白质能获得较清晰条带,分辨率较高,而酚提取法提取的蛋白质其条带模糊,分辨率低。对蛋白质纯化除盐可以提高分辨率,减少横竖纹,获得背景清晰的圆形蛋白点。通过ImageMasterTM 2D Platinum5.0软件分析凝胶图谱,结果显示纯化后可降低噪点,纯化后蛋白点数可从未纯化蛋白点数的216增加到583。显然,采用TCA/丙酮法可获得高浓度高质量的蛋白质,而进一步纯化、除盐离子可进一步获得背景清晰可高重复性的电泳图谱。在双向电泳实验过程中,观察到一些异常缺陷胶的出现,如双向电泳图谱中蛋白点扩散,蛋白聚集形成斑点串,没有点或点很少,出现纵纹横纹及图谱扭曲等影响图谱质量的严重问题,本研究对这些问题做了分析并提出了解决方案。

水稻根系蛋白质提取方法的改良

提取出高纯度的根系蛋白质是获得分离效果好、清晰度高的水稻根系蛋白质双向电泳图像的关键。本研究以水稻六叶期幼苗根系为材料,运用改良的TCA/丙酮/SDS法和TCA/丙酮法、TCA/丙酮/Tris-HCl对水稻根系蛋白质进行抽提,进行蛋白质双向凝胶电泳。结果表明:改良的TCA/丙酮/SDS法适用于水稻根系蛋白质组研究,并且350μg上样量获得的双向凝胶电泳图像更为清晰、重现性好,具有较好蛋白质分离效果。

大鼠皮质双向电泳样品制备方法的优化

目的优化大鼠皮质双向电泳样品制备方法,初步建立双向电泳条件,提高电泳分辨率和重复性。方法分别应用三氯乙酸/丙酮沉淀法、超速离心法及改良超速离心法制备电泳样品,并比较各处理方法对电泳的影响。改良超速离心法即将混合了匀浆液Ⅱ的匀浆物4℃放置过夜后再进行后续处理。结果改良超速离心法所制备的电泳样品,不仅可以减少蛋白的降解,还可以增加蛋白的溶解性,从而获得分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论改良超速离心法更适于制备来源于中枢神经系统双向电泳样品。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。

米糠多糖脱蛋白方法及条件的优化

木瓜蛋白酶结合三氯乙酸(TCA)法对米糠粗多糖进行脱蛋白,研究不同的酶添加量、酶解温度、酶解pH、酶解时间、TCA用量、TCA处理次数、TCA处理时间对米糠粗多糖脱除蛋白效果和多糖损失的影响。结果表明,米糠粗多糖脱蛋白最佳工艺条件为酶添加量140 U/mL,酶解最适温度55℃,最适pH6.0,时间60 min;再用6%TCA作用30 min,3次重复,蛋白质脱除率为85.52%,多糖损失率为11.20%。

极大螺旋藻多糖提取方法研究

对TCA法和Sevag法两种螺旋藻多糖提取方法进行了比较研究,根据研究结果,指出TCA法在多糖提得率、蛋白去除率、色素去除率方面均优于Sevag法;同时对TCA法提取多糖进行了正交实验,从固液比、pH值、时间、温度4个方面进行优化组合得到了最佳提取条件:当pH值为10、固液比为1∶30、提取时间为6h、温度为90℃时达到TCA法提取多糖的最佳提取条件,多糖提得率为3.935%。