三氯醋酸沉淀法测定食蟹猴体内^(125)I-rhIL-12的含量

目的建立三氯醋酸(Trichloroacetic acid,TCA)沉淀法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,并进行验证及初步应用。方法采用Na125I标记结合TCA沉淀蛋白的方法测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量,对建立的方法进行线性、精密度及回收率验证;将2μg/kg125I-rhIL-12单剂量皮下注射食蟹猴,分别于注射后4、8、24、32、48、72、96、120、144和168 h收集尿和粪,用建立的方法测定放射性,计算排出放射性占注入放射性的百分比。结果125I-rhIL-12的效价与未标记对照品效价无显著差异;在0.02～200 ng-当量范围内,不同组织/体液中125I-rhIL-12的加入量与总放射性及TCA沉淀放射性之间线性关系良好,变异系数(CV)多小于20%;125I-rhIL-12原形主要在TCA沉淀部分。125I-rhIL-12经皮下注射食蟹猴后,放射性主要经尿排泄,少量经粪排泄,皮下注射后168 h,可排泄完全。结论125I与rhIL-12在体内结合稳定,TCA沉淀法可用于测定食蟹猴体内125I-rhIL-12的含量。

三氯醋酸-丙酮沉淀法用于骨组织蛋白的提取

目的探讨三氯醋酸-丙酮沉淀法提取骨组织蛋白的可行性和效率。方法采用盐酸脱钙法和三氯醋酸-丙酮沉淀法,分别用于骨组织蛋白的提取,并对两种方法的提取效率进行对比。结果三氯醋酸-丙酮沉淀法可获得较高的骨蛋白提取率,与盐酸脱钙法相比,分子条带分布范围相近,且不受骨髓造血组织影响。结论三氯醋酸-丙酮沉淀法可以用于骨组织蛋白质组的研究。

三氯醋酸/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白效果的对比研究

目的探讨三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果。方法选取2017年6月至2019年6月长春市中心血站采集的O型RHD阳性新鲜冰冻血浆12例,组成4个样品并分别编号为A1、A2、B1、B2。采用TCA/丙酮沉淀法去除A1、A2样品血浆中高丰度蛋白,硫酸铵沉淀法去除B1、B2样品血浆中高丰度蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证血浆中高丰度蛋白去除的效果。Clean-up Kit去除蛋白质中干扰物质,并采用SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)验证Clean-up Kit的效果。结果银染的SDS-PAGE胶图显示,TCA/丙酮沉淀法与硫酸铵沉淀法均可有效去除血浆高丰度蛋白,但与硫酸铵沉淀法相比,TCA/丙酮沉淀法的SDS-PAGE条带更清晰。SDS-PAGE和2-DE显示两种方法去除清蛋白的血浆Clean-up Kit后对去除血浆中其他干扰物质效果并不明显。结论TCA/丙酮沉淀法去除血浆高丰度蛋白的效果更好,且去除血浆中清蛋白后的血浆Clean-up Kit对去除效果无显著影响,可直接进行2-DE、图像分析及质谱检测分析。

离心超滤法测定蛋白质标记物的放射化学纯度

用高效液相色谱法(HPLC)、三氯醋酸(TCA)沉淀法和超滤法分离测定125I-AAFP(抗过敏融合蛋白)标记物的放射化学纯度(RCP),并对其进行比较。结果表明:三种方法均能有效分离标记物和游离碘,用超滤法、TCA沉淀法和HPLC三种方法测定125I-AAFP低、中、高放射化学纯度,样本的RCP分别为0.62%±0.21%、7.25%±1.38%、0.97%±0.12%,61.58%±0.52%、63.18%±1.98%、63.77%±1.23%,98.89%±0.31%、98.76%±0.41%、98.80%±0.82%。当RCP很低时,超滤法与HPLC法测得的RCP间无明显差异(P>0.05),而要低于TCA沉淀法(P<0.05);除此之外,三种方法无明显差异(P>0.05)。这说明离心超滤法可用于分离测定蛋白质标记物的放射化学纯度。

同位素标记示踪法测定G蛋白竞争性抑制肽-27在动物体内的分布与排泄

目的:利用同位素标记示踪法研究G蛋白竞争性抑制肽(GCIP)-27在动物体内的分布和排泄。方法:125I-GCIP采用Iodogen法标记,按组织器官直接测定法和TCA沉淀法进行体内分布实验,以每毫克组织器官的125I-GCIP放射性计数表示GCIP在小鼠体内的分布;以不同时间段大鼠胆汁、尿、粪及小鼠的尿、粪放射性总排泄量占给药量放射性的百分比表示其在体内的排泄。结果:GCIP-27在小鼠体内分布广泛,其中肾、血管、胃、肺、心、小肠等组织分布较高,肌肉、脂肪等组织相对较低,脑最低。大鼠72h粪、尿、胆汁原形药物排泄量分别为给药量的26.13%,0.95%和4.12%。小鼠72h粪、尿原形药物排泄量分别为给药量的27.92%,0.84%。结论:GCIP-27在小鼠体内广泛分布,主要经尿液排泄,肾为主要排泄器官。

日粮中添加铜和锰对山羊瘤胃消化代谢及日增重的影响

本试验采用6只装有永久性瘤胃瘘管的本地母山羊,研究了日粮中单独或混合添加铜、锰对瘤胃消化代谢和日增重的影响。试验按照对照设计,在舍饲条件下进行。具体测定指标有:瘤胃PH值、三氯醋酸沉淀蛋白(TCA—P)、细菌蛋白(B—P)、原虫蛋白(P—P)氨氮(NH_3—N)、总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸(C_2)、丙酸(C_3)、丁酸(C_4)、戊酸(C_5)、异戊酸(iC_5)、C_2/C_3比值以及日增重。试验结论如下: 1、铜对瘤胃PH值、NH_3—N、P—P、TCA—P、TVFA、C_5及iC_5含量不产生影响,但它可刺激瘤胃细菌生长繁殖,增加瘤胃内B—P含量,提高日增重,同时还抑制瘤胃C_4的产生,增加C_3浓度,降低C_2/C_3比值,使瘤胃趋向丙酸型发酵。 2、锰不影响瘤胃PH值,NH_3—N、TCA—P、C_2、C_3、C_4、C_5含量,以及C_2/C_3比值,但它可以促进瘤胃细菌和原虫数量上升,增加瘤胃内B—P和P—P含量,提高TVFA浓度和日增重,同时还抑制瘤胃iC_5的生成。 3、日粮中同时添加铜和锰、它们相互抑制对方的作用,表现出拮抗关系。

人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法的探究

目的:探究适宜的人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法。方法:分别应用《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和两种改良后的三氯醋酸法测定6批人纤维蛋白原制剂中的蛋白质含量,比较三种方法的稳定性和平行性。结果:改良后的三氯醋酸沉淀2法[用三氯醋酸代替《中国药典》三部(2010年版)钨酸钠沉淀法中钨酸钠和硫酸溶液]的稳定性和平行性明显比《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和改良后的三氯醋酸沉淀3法更好,相对标准偏差(RSD)更低。结论:改良后的三氯醋酸沉淀2法更适合人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量的测定。

样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响

目的比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础。方法提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀,饱和（NH4）2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据。结果每种方法均重复试验20次,在质荷比（m/z）2000~100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和（NH4）2SO4沉淀14个;选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对分子量（Mr）〈11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr〉11 kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果。