三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响

目的:探讨三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响,探究三物白散抗胃癌的作用机制。方法:将28只SPF级雄性大鼠随机分为4组,每组7只,分别予以0.03125、0.0625、0.1250 g/(kg·d)三物白散及相同体积生理盐水灌胃,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养AGS细胞,设置空白对照组(空白组)、三物白散低剂量含药血清组(低剂量组)、三物白散中剂量含药血清组(中剂量组)、三物白散高剂量含药血清组(高剂量组)。采用CCK-8法检测不同浓度(5%、10%、15%、20%)三物白散含药血清对AGS细胞活性的影响;倒置显微镜下观察三物白散含药血清对AGS细胞形态的影响;RT-qPCR法检测Beclin1 mRNA、LC3 mRNA、p62 mRNA表达;Western blotting法检测Beclin1、LC3、p62蛋白表达。结果:与空白组比较,5%、10%、15%、20%三物白散高剂量含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制AGS细胞活性;随着含药血清浓度升高,细胞形态逐渐不规则,细胞数量逐渐减少;中、高剂量组Beclin1 mRNA、LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量均高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01);低剂量组LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01)。高剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均高于空白组,p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01);中剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高于空白组(P<0.05或P<0.01),p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01)。结论:三物白散对胃癌细胞的增殖有抑制作用,上调Beclin1、LC3表达、下调p62的表达、诱导胃癌细胞自噬可能是其抗胃癌作用机制之一。

三物白散加味方影响胃癌相关基因表达的实验研究

目的 观察三物白散加味方对胃癌相关基因表达的影响。方法 以三物白散加味方含药血清加入人胃癌SGC 790 1细胞中 ,观察P5 3、Bcl 2、rasp2 1、CD4 4基因表达的变化。结果 三物白散加味方可降低人胃癌SGC 790 1细胞的P5 3、Bcl 2、rasp2 1、CD4 4基因表达率。

三物白散加味方影响肿瘤多药耐药基因表达实验研究

观察三物白散加味方对肿瘤多药耐药(MDR)基因表达的影响。以三物白散加味方含药血清加入人胃癌SGC-7901细胞中,观察MDR基因表达的变化。结果:三物白散加味方可降低人胃癌SGC-7901细胞MDR基因表达率。提示三物白散加味方临床不易产生多药耐药,并可作为MDR逆转剂使用。

加味三物白散方治疗进展期胃癌临床研究

目的观察中西医结合治疗进展期胃癌的疗效和不良反应。方法将40例进展期胃癌患者随机分成两组。治疗组20例采用中药加味三物白散加OLF方案化疗,对照组20例单纯用OLF方案化疗。结果治疗组和对照组有效率分别为55.00%和45.00%,差异无统计学意义;临床受益率分别为90.00%和65.00%,差异有统计学意义;半年生存率分别为90.00%和对照组为85.0%,两组比较差异无统计学意义;1年生存率治疗组为80.00%,对照组为45.00%,两组结果差异有统计学意义。两组不良反应以治疗组较优。结论中西医结合治疗进展期胃癌能明显改善临床疗效,减轻不良反应,改善患者生活质量,延长患者生存期。

三物白散加味方影响肿瘤细胞周期实验研究

目的观察三物白散加味方对肿瘤细胞周期的影响。方法以三物白散加味方体外直接用药及含药血清加入人胃癌SGC-7901细胞中,观察对细胞周期影响;另制作S180荷瘤鼠肿瘤模型,观察用药后细胞周期变化。结果三物白散加味方直接用药及含药血清中、大剂量组能明显降低人胃癌SGC-7901细胞G0-G1期细胞,而使细胞阻滞于G2-M期,减少肿瘤细胞DNA合成,抑制其增殖。中、大剂量组灌注S180荷瘤鼠肿瘤模型后,影响S期向G2-M期转化,将肿瘤细胞阻滞在S期,抑制其增殖。结论本方通过影响细胞周期抑制肿瘤增殖。

三物白散加味方治疗进展期胃癌30例临床研究

目的观察三物白散加味方对进展期胃癌的影响。方法60例进展期胃癌随机分为治疗组和对照组各30例,治疗组以三物白散加味方口服,另配合使用西医一般支持疗法;对照组采用西医一般支持疗法。4周为1个疗程,治疗1个疗程后统计疗效。观察指标为实体瘤缓解率和Karnofsky评分。结果治疗组瘤体稳定率为83.33%,与对照组瘤体稳定率60%相比,P<0.05;治疗组明显提高患者Karnofsky评分,与对照组相比P<0.05。结论三物白散加味方可提高瘤体稳定率,降低恶化率,提高患者生活质量。

三物白散含药血清对胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡及survivin基因表达的影响

目的研究三物白散含药血清对人胃癌MGC-803细胞株的增殖、凋亡及survivin基因表达的影响。方法体外实验选择MGC-803细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照,采用MTT比色及吖啶橙、EB染色法检测低、中、高3组三物白散大鼠含药血清对MGC-803细胞增殖、凋亡的影响,运用RT-PCR法检测survivinmRNA的表达。结果三物白散含药血清作用MGC-803细胞后,随着三物白散含药血清药物浓度的增加及作用时间的延长,细胞增殖率逐渐降低,细胞抑制率、凋亡率逐渐升高,survivin蛋白的表达相应的降低。结论三物白散含药血清能够抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,对细胞有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及sur-vivin基因表达下降。

三物白散对胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响

目的观察三物白散药物血清对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响。方法选择人胃癌细胞株SGC-7901,分为空白对照组、阳性对照组及三物白散低、中、高剂量组。三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,采用荧光染色法检测胃癌细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,与空白对照组比较,各组细胞的凋亡率升高,且细胞凋亡率随药物血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐升高;三物白散各剂量组survivin mRNA的表达均有不同程度的下降,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且survivin mRNA表达随三物白散含药血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐下降。结论三物白散可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,抑制survivin mRNA的表达。

三物白散整体水平抗肿瘤免疫正相调节效应研究

目的在整体水平上研究三物白散抗肿瘤过程中免疫正相调节效应。方法建立小鼠腋下移植性肿瘤模型,三物白散设大、中、小3个剂量组,另设1个正常对照组(生理盐水组)和一个阳性药组(5-氟尿嘧啶组),用药8 d后,摘取皮下瘤块、胸腺、脾脏,称其质量,计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数,另摘眼球采血取血清,用放射免疫检测法检测荷瘤鼠血清中IL-2I、L-4表达。结果与正常对照组相比,用药组的体内抑瘤率均有显著差异(P<0.01);三物白散各组的胸腺、脾脏质量与正常对照组无明显差异,5-Fu组胸腺、脾脏质量与正常对照组相比差异显著(P<0.05);与正常对照组相比,三物白散各剂量组IL-2水平升高(P<0.01),IL-4水平下降(P<0.05)。结论三物白散在整体水平上具有确切的抗肿瘤免疫正相调节作用。

三物白散加味方诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察三物白散加味方诱导肿瘤细胞凋亡情况。方法:以三物白散加味方体外直接用药及含药血清加入人胃癌SGC-7901细胞中,观察细胞凋亡;制作S180荷瘤鼠肿瘤模型,观察用药后肿瘤细胞凋亡情况。结果:三物白散加味方直接用药中、大剂量组及含药血清3个剂量组能明显诱导肿瘤细胞凋亡。3个剂量组均能明显诱导S180荷瘤鼠肿瘤细胞凋亡。结论:三物白散加味方体内、体外实验均能诱导肿瘤细胞凋亡。

三物白散对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的通过体外实验观察三物白散大鼠含药血清对人胃癌SGC-7901细胞的增殖、凋亡抑制作用及其机制。方法选择雄性SPF级大鼠随机分成4组,分别予以0.035、0.07、0.14g/（kg.d）三物白散及生理盐水灌胃,按＂通法＂制备三物白散大鼠含药血清。体外实验选择SGC-7901细胞,以5-氟尿嘧啶为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝比色及吖啶橙、EB染色法检测低、中、高3组三物白散大鼠含药血清对SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。结果不同剂量组的三物白散含药血清处理细胞12~72h后,各组OD比值均有不同程度的下降。且随三物白散含药血清质量浓度的增大、作用时间的延长,OD比值及存活率逐渐下降,且抑制率以高剂量三物白散含药血清作用48h为最高,可达69.2%。三物白散含药血清处理48h后的细胞中,低、中、高剂量三物白散含药血清作用SGC-7901细胞48h后各组的凋亡率依次为25%、32%、54%,并随质量浓度的升高、时间的延长而增加。高质量浓度的三物白散作用后,细胞凋亡率随作用时间的延长而增加。结论三物白散在一定剂量、时间范围内,能够抑制SGC-7901细胞增殖,并呈一定的剂量、时间依赖性。三物白散可诱导细胞凋亡,该作用呈一定的剂量、时间依赖性。

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞凋亡、迁移的影响

目的探讨三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞凋亡、迁移的影响。方法将实验分成6组:空白对照组、LV-RNAi组、Survivin-RNAi-LV组、空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组、Survivin-RNAi-LV+中药组;采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,划痕实验检测各组细胞的迁移能力。结果细胞凋亡率:Survivin-RNAi-LV组明显高于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较明显较高(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组高于Survivin-RNAi-LV组,差异具有统计学意义(P<0.05)。胃癌细胞的24 h迁移率:Survivin-RNAi-LV组明显低于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较,其结果明显低于后两组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与Survivin-RNAi-LV组比较,细胞迁移率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Survivin基因沉默转染,增强了三物白散诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和抑制其迁移的作用。

三物白散加味方癌化学预防作用实验研究

目的:观察三物白散加味方癌化学预防作用。方法:进行三物白散加味方抗变、影响rasP21基因表达、抗氧化三项研究。结果:三物白散加味方中、大剂量组有抗变和降低rasP21基因表达作用;小剂量组有抗氧化作用。结论:从初步研究认为,三物白散加味方具有癌化学预防作用。

三物白散逆转胃癌细胞多药耐药效应机制研究

目的:研究三物白散对胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药(MDR)的逆转作用,明确其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度的三物白散作用于体外培养的SGC7901和SGC7901/DDP细胞,以MTT法检测细胞增殖抑制率,确定三物白散的非毒性剂量;以不同浓度顺铂(DDP)作用上述细胞,确定没有三物白散干预时各组细胞生长抑制50%的DDP浓度(IC50)和SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF);采用非毒性剂量三物白散,分别与不同浓度顺铂(DDP)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的DDP浓度,计算RF和耐药逆转倍数(RI);利用流式细胞术检测三物白散联合DDP作用后SGC7901/DDP细胞内DDP的荧光强度、P-gp的表达和P-gp功能活性。结果:三物白散的非细胞毒性剂量为10-7g/mL;单独顺铂作用后SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF)为3.94;三物白散协同DDP作用后,SGC7901/DDP细胞的RF为3.75,RI为6.12;与三物白散未干预组比较,三物白散可显著增加DDP在SGC7901/DDP细胞内的蓄积(P<0.05),SGC7901/DDP细胞的P-gp表达亦显著降低(P<0.01),而P-gp功能显著抑制(P<0.01)。结论:三物白散与DDP联合运用既有复合抗癌之效,又能逆转胃癌细胞SGC7901/DDP多药耐药。其主要机制可能是通过三物白散下调SGC7901/DDP细胞P-gp表达、抑制P-gp功能实现的。

三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞的影响

目的观察中药三物白散对含存活素(Survivin)基因沉默的慢病毒颗粒(Survivin-RNAi-LV)转染人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法分别采用RT-PCR(聚合酶链式反应)、Western blot方法检测人胃癌SGC-7901细胞中Survivin m RNA和蛋白的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测胃癌SGC-7901细胞的增殖情况、流式细胞仪检测凋亡率及三物白散对其增殖抑制率及凋亡率的影响。结果重组慢病毒颗粒介导的Survivin基因沉默转染人胃癌SGC-7901细胞可有效使Survivin m RNA和蛋白的表达沉默;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡;Survivin基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞组应用三物白散,其细胞增殖弱于、细胞凋亡率高于三物白散+空白对照组和三物白散+阴性对照组(P<0.05)。结论含Survivin基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌SGC-7901细胞,能够抑制SGC-7901细胞Survivin的表达,三物白散对Survivin基因沉默转染后胃癌细胞的杀伤力较未转染细胞有明显的提高。

加味三物白散诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡及对细胞周期影响的研究

目的 :观察加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长的抑制作用 ,影响细胞周期及诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡。方法 :采用MTT法 ,观察抑制率 ;应用流式细胞仪检测加味三物白散诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果 :加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长有抑制作用 ,大、中、小剂量抑制率分别是 5 5 .75 %、4 2 .6 7%和 38.6 3% ,进一步研究发现中、大剂量组诱导细胞凋亡百分率分别为 9.0 6 %、96 .32 % ,与阴性对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) ;此外与阴性对照组相比 ,中、大剂量组使G0 -G1期细胞明显减少 ,G2 -M期明显增高 ,S期明显减少 ;小剂量组使G0 -G1期细胞明显增高 ,G2 -M期明显减少 ,S期减少。结论 :加味三物白散能抑制人胃腺癌SGC - 790 1细胞生长 ;其中、大剂量组可以明显诱导人胃腺癌SGC - 790 1细胞凋亡 ;并且加味三物白散对人胃腺癌SGC - 790

三物白散对Ana-1巨噬细胞免疫功能的影响

目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SWB中小剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05);吞噬实验,SWB大剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05),并呈现剂量依赖关系;趋化实验,SWB各剂量组与空白组相比差异显著,呈现剂量依赖关系;与空白对照组相比,SWB各剂量组IL-1β水平升高,大剂量组IL-1β表达差异显著(P<0.05);IL-6、TNF-α的表达无显著差异。结论:SWB体外可显著活化巨噬细胞,促进增殖、提高吞噬能力,上调Th1型细胞因子IL-1β的表达。

三物白散对B16-BL6细胞免疫抑制的影响

目的 :验证抗肿瘤复方三物白散的免疫正相调节功能 ,为中医“祛邪即能扶正”治则学提供依据。方法 :MTT法检测脾细胞增殖、Con诱导脾细胞增殖。结果 :和三物白散 ( 2× 1 0 -6g/ml、2× 1 0 -5g/ml)、B1 6- BL6细胞共孵育的脾细胞增殖能力显著增高 ;与三物白散作用后细胞培养上清可显著拮抗B1 6- BL6细胞抑制作用。结论 :三物白散主要是通过作用于 B1 6- BL 6细胞 ,影响其释放某种液性因子而实现免疫正相调节作用的。