一种新的靶向CD19抗原的三特异性T细胞衔接器的制备及其抗白血病作用研究

目的制备一种新的靶向CD19的三特异性T细胞衔接器融合蛋白(19TriTE),研究其对CD19阳性血液肿瘤的免疫治疗作用。方法通过分子克隆技术构建19TriTE表达质粒,并通过真核蛋白表达系统成功表达该融合蛋白。体外实验验证19TriTE对T细胞的活化与增殖作用及介导T细胞发挥对CD19阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建19TriTE融合蛋白表达质粒,并通过真核蛋白表达系统成功表达。②19TriTE可以特异性结合T细胞和Nalm6细胞,与T细胞的平衡解离常数为19.21 nmol/L,与Nalm6细胞的平衡解离常数为11.67 nmol/L。③2 nmol/L浓度的19TriTE与T细胞及Nalm6细胞共培养时,T细胞中CD69阳性表达率为35.4%,CD25阳性表达率为49.8%,较对照组显著升高。④19TriTE在浓度为1 nmol/L时即可显著促进T细胞增殖,第12天时,T细胞绝对计数由初始1×10^(6)扩增至7.4×10^(7),增殖74倍。⑤19TriTE融合蛋白能明显介导T细胞杀伤CD19阳性靶细胞且与剂量呈正相关,浓度为10 nmol/L时,靶细胞裂解率达50%。⑥脱颗粒实验验证,CD19阳性靶细胞存在时,19TriTE可以显著激活T细胞且与剂量呈正相关。⑦将19TriTE融合蛋白分别与过表达RFP及Luciferase基因的靶细胞及T细胞共培养,19TriTE能够介导T细胞杀伤CD19阳性的靶细胞。结论本研究成功构建及表达19TriTE融合蛋白,体外实验验证其可以有效活化T细胞,并促进T细胞增殖。同时,能够结合CD19阳性靶细胞和T细胞,促进T细胞发挥体外抗白血病作用,为进一步临床研究奠定基础。

靶向CD33抗原三特异性T细胞衔接器的制备及对白血病细胞的作用研究

目的研究靶向CD33抗原双特异性及三特异性T细胞衔接器对T细胞增殖及其抗白血病作用。方法构建抗CD33scFv-抗CD3scFv的双特异性T细胞衔接器(CD33-BiTE)及在BiTE基础上加入CD80胞外段的三特异性T细胞衔接器(CD33-TriTE)表达载体, 使用真核细胞表达系统表达蛋白并进行亲和层析纯化。检测CD33-BiTE及CD33-TriTE对T细胞活化增殖功能及对白血病细胞杀伤功能活性的影响。结果①成功构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 在真核细胞中表达, 纯化得到的融合蛋白能与相同靶抗原流式抗体竞争结合于靶细胞表面。②CD33-BiTE及CD33-TriTE分别与人T细胞共培养12 d后, T细胞数扩增至基线值的(33.89±19.46)倍和(81.54±23.62)倍, CD33-TriTE促T细胞增殖能力明显优于CD33-BiTE(P<0.05)。③体外实验证实CD33-BiTE和CD33-TriTE均可增强T细胞对表达CD33白血病细胞的特异性杀伤作用, 且在一定浓度范围内, 浓度越高, 抗体的杀伤作用越强。④与CD33-TriTE相比, CD33-BiTE杀伤白血病细胞的同时增加其PD-L1表达, 而TriTE对过表达PD-L1的Molm13细胞具有更强的杀伤作用。结论该研究构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 并在真核细胞表达了融合蛋白, 体外实验证实其促T细胞增殖活化的特性, 并具有促T细胞抗白血病作用。其中CD33-TriTE较CD33-BiTE促增殖效果更强, 且对PD-L1高表达的白血病细胞杀伤效果更强。

《双特异性T细胞衔接器治疗急性淋巴细胞白血病中国专家共识(2024年版)》解读

文章主要对《中华血液学杂志》发表的《双特异性T细胞衔接器治疗急性淋巴细胞白血病中国专家共识(2024年版)》进行解读。作为B细胞急性淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)领域目前唯一上市的双特异性T细胞衔接器分子,贝林妥欧单抗在多个临床研究中被证明能为B-ALL患者带来良好的生存获益和可管理的安全性。本解读深入分析贝林妥欧单抗的关键临床研究数据,立足当下,展望未来,探讨了B-ALL领域治疗格局改变的方向。

双特异性T细胞衔接器治疗急性淋巴细胞白血病中国专家共识(2024年版)

急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是最常见的急性白血病之一,发病急、进展快,化疗和移植的规范化应用已极大改善患者预后,但仍存在未满足的治疗需求。近年以双特异性T细胞衔接器(Bispecific T cell Engager,BiTE)为代表的免疫治疗发展迅速,为ALL治疗提供了更多选择,同时也对临床诊疗管理提出了更高的要求。专家组基于国内外最新循证医学证据、相关指南和临床实践,对2022年版《双特异性T细胞衔接器治疗急性淋巴细胞白血病指导原则》进行更新,制定了该版中国专家共识。

联用骨化三醇和阿维A使皮肤T细胞淋巴瘤得以缓解

联用骨化三醇和阿维Ａ使皮肤Ｔ细胞淋巴瘤得以缓解［英］／Ｆｒｅｎｃｈ，ＬＥ…／／Ｌａｎｃｅｔ．－１９９４；３４４（８９２３）．－６８６～６８７视黄醛是天然的或合成的维生素Ａ衍生物，它与维生素Ｄ３都能经特异性细胞核受体调节多种细胞（包括造血细胞和癌细胞）...

EGFR/CerbB-2/MAPK介导乳腺癌三苯氧胺耐药细胞的生长

目的探讨乳腺癌三苯氧胺(TAM)获得性抵抗细胞的生长调节途径及三苯氧胺(TAM)获得性抵抗的发生机制。方法构建TAM抵抗的人乳腺癌细胞系(MCF-7/TAMR),RT-PCR、Westernblot及免疫细胞化学方法比较MCF-7/TAMR与MCF-7/WT细胞系中EGFR(CerbB-1)、CerbB-2、CerbB-3、CerbB-4mRNA及蛋白表达的不同。结果与MCF-7/WT细胞相比,MCF-7/TAMR细胞中表皮生长因子受体EGFR的mRNA增加6倍(P<0.05),蛋白增加3倍(P<0.05);CerbB-2的mRNA增加3倍(P<0.05),蛋白增加1.5倍(P<0.05);CerbB-3在两种细胞中的表达相似;CerbB-4未能检测到;MCF-7/TAMR细胞中MAPK活化水平增高;基础条件下,MCF-7/TAMR细胞中磷酸化的EGFR/CerbB-2,EGFR/CerbB-3异二聚体与细胞外信号调节激酶磷酸化水平增高有关;Herceptin处理MCF-7/TAMR细胞,阻滞了CerbB-2受体异二聚体的形成及磷酸化,降低了细胞外信号调节激酶的活性,明显抑制了细胞的生长。结论表皮生长因子受体特异性配体的自分泌释放作用诱导EGFR/CerbB-2二聚体形成及下游细胞外信号调节激酶(MAPK)的活化引起MCF-7/TAMR细胞的生长。

三穴五针对哮喘大鼠肺组织中Eotaxin、RANTES表达的影响

目的:探讨三穴五针(大椎穴、双侧风门穴、双侧肺俞穴)对哮喘大鼠肺组织中Eotaxin、RANTES表达的影响。方法:将30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组和针刺干预组,每组各10只。各组分别给予相应干预后,采用生理记录仪连续记录气道阻力和肺顺应性,HE染色法观察大鼠肺组织的病理变化,免疫组化检测肺组织中Eotaxin、RANTES的表达。结果:哮喘模型组气道阻力较正常对照组明显升高(P <0. 05),针刺干预组气道阻力较哮喘模型组明显降低(P <0. 05);哮喘模型组肺顺应性较正常对照组明显降低(P <0. 05),针刺干预组肺顺应性较哮喘模型组明显升高(P <0. 05); HE染色后,与模型组大鼠比较,"三穴五针法"针刺干预能明显减轻哮喘大鼠肺组织病理改变及炎症反应;哮喘模型组Eotaxin、RANTES表达水平显著高于正常对照组(均P <0. 05),针刺干预组Eotaxin、RANTES表达水平较哮喘模型组显著降低(均P <0. 05)。结论:三穴五针可以减轻气道炎症反应,有效降低哮喘大鼠肺组织中Eotaxin、RANTES的含量。

三特异性抗体在肿瘤免疫治疗中的研究进展

三特异性抗体(trispecific antibodies, TsAbs)是一种可以同时靶向肿瘤细胞或免疫效应细胞三种不同抗原结合位点的创新疗法。与单克隆抗体和双特异性抗体相比,三特异性抗体可增加结合特异性,降低脱靶毒性,在肿瘤免疫治疗领域具有广阔的应用前景。本文主要介绍了三特异性抗体的发展进程、主要构建形式及其作用机制,总结了不同靶点组合的代表性药物的最新研究进展,并讨论了其存在的挑战和未来发展方向,旨在为三特异性抗体药物的发展提供新思路。

靶向肝细胞癌的T细胞免疫治疗研究现状

恶性肿瘤严重威胁人类的健康，肿瘤免疫治疗是继手术治疗和放化疗之后第四大治疗方法。目前对于肝细胞癌的免疫治疗尚无十分有效的方法。基因修饰T细胞免疫治疗在血液肿瘤中取得突破性进展，研究者尝试通过T细胞免疫治疗方法突破实体肿瘤的治疗效果。当前针对肝细胞癌免疫治疗的研究十分有限，现就靶向原发性肝癌T细胞免疫治疗的前沿研究现状做一综述。

淋巴瘤的免疫治疗进展

淋巴瘤的治疗经历了从传统的细胞毒药物化疗向免疫药物靶向治疗的转变,传统药物的研究和应用不断发展,新药的研究和开发更是人们关注的热点。许多免疫治疗药物如单克隆抗体、抗体-药物偶联物、双特异性抗体T细胞衔接器、嵌合抗原受体T细胞、免疫检查点抑制剂及小分子抑制剂等,无论是单药还是联合用药,在初治和复发/难治性霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤的治疗中均展现出较好的疗效和安全性,为患者提供了更多的治疗选择。然而,免疫药物治疗淋巴瘤仍面临诸多挑战,需要进一步研究和优化。

双靶点嵌合抗原受体T细胞治疗CD19抗原表位缺失急性B淋巴细胞白血病一例报告并文献复习

目的:了解CD19异构体对双特异性T细胞衔接器(BiTE)治疗的反应,进一步探讨BiTE治疗无效的相关机制及相应的解决方案。方法:通过半定量RT-PCR的方法检测1例CD19+急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者BiTE治疗前后CD19异构体mRNA表达量的情况,Sanger测序对相应的异构体序列进行分析,流式细胞术及转录组测序分析治疗前后谱系特异性分子的表达情况。结果:患者初诊时即存在2号外显子缺失型CD19异构体的表达,BiTE治疗后患者未缓解,流式细胞术检测发现CD19抗原表达转阴,但2号外显子缺失型CD19异构体的表达量并无增加,且细胞表型及转录组测序均未见谱系转化的发生。外显子可变剪接引起的缺失型CD19异构体的表达及谱系转化并非该患者CD19抗原表位缺失的机制。该例患者在疾病进展退出BiTE治疗组之后,采用中国医学科学院血液病医院自主研发的CD22及CD19 CAR-T序贯治疗后完全缓解。结论:该例患者CD19抗原-缺失导致BiTE治疗无效,其缺失并非由可变剪接或谱系转换所致,更换为CD22、CD19双靶点CAR-T细胞治疗有效。