三硝基苯磺酸钠诱导的实验性大鼠结肠炎模型中的凝血异常

目的探讨炎症性肠病中凝血异常与炎症的关系。方法检测三硝基苯磺酸钠(trinitro-benzene-sulfonic acid TNBS)灌肠诱导大鼠结肠炎模型中的凝血指标明确有无凝血异常。将30只SD大鼠分为三组,(1)正常对照组:仅用生理盐水灌肠。(2)结肠炎1周组,TNBS灌肠1周后处死,模拟结肠炎中的急性炎症期。(3)结肠炎2周组:TNBS灌肠2周后处死,模拟慢性炎症期。处死后取血检查凝血酶原时间(prothrombin time PT)、活化部分凝血激酶时间(activated partial thromboplastin time APTT)、血小板计数以及抗凝血酶活性(antithrombin AT)。处死同时检查组织损伤和炎症水平指标。结果TNBS诱导的结肠炎模型中凝血酶原时间、活化部分凝血激酶时间均较正常对照组为短;抗凝血酶活性较正常对照组下降,血小板数目较对照组升高。差异均有统计学意义(P<0.05)。通过相关分析,组织损伤以及炎症指标和PT、APTT以及抗凝血酶活性成负相关(P<0.01),与血小板计数成正相关。结论TNBS诱导的结肠炎模型中存在凝血异常,且与病情严重程度有相关性。提示临床上的炎症性肠病中存在凝血异常和炎症活动水平关系紧密。本模型可以作为炎症激活凝血异常的模型来研究这一现象。

健脾清肠通络方对三硝基苯磺酸钠诱导重症炎症性肠病肠纤维化小鼠作用机制研究

目的探讨健脾清肠通络方对三硝基苯磺酸钠(TNBS)灌肠诱导重症炎症性肠病小鼠肠纤维化的抑制作用。方法将40只C57BL/6雄性小鼠根据体质量编号,随机分为正常组、模型组、健脾清肠通络方组和美沙拉嗪组。除正常组小鼠外,其余3组小鼠均建立TNBS诱导炎症性肠病肠纤维化模型,正常组和模型组给予等体积(0.3 mL/d)生理盐水,健脾清肠通络方组和美沙拉嗪组分别用健脾清肠通络方、美沙拉嗪给小鼠灌胃,干预2周。观察各组小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度及质量,小鼠结肠组织大体评分比较,小鼠血清结缔组织生长因子(CTGF)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)表达及结肠组织转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组小鼠体质量明显减轻(P<0.05)、DAI评分明显增加(P<0.05),结肠长度明显缩短(P<0.05)、结肠质量明显增加(P<0.05);经健脾清肠通络方和美沙拉嗪干预后,小鼠体质量、DAI评分、结肠长度和结肠质量均有不同程度的改善(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组小鼠结肠组织大体评分、病理评分均增加(P<0.05);与模型组比较,健脾清肠通络方组和美沙拉嗪组小鼠结肠组织大体评分、病理评分均减少(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组小鼠血清CTGF和PCⅢ表达均增加(P<0.05);经健脾清肠通络方干预后小鼠血清CTGF和PCⅢ表达均减少(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组结肠组织TGF-β1、CTGF、PCⅢ蛋白表达增加(P<0.05);经健脾清肠通络方和美沙拉嗪干预后小鼠结肠组织TGF-β1、CTGF、PCⅢ蛋白表达减少(P<0.05)。结论健脾清肠通络方可能通过降低TGF-β1、CTGF、PCⅢ蛋白表达来抑制肠纤维化。

植物乳杆菌对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的治疗作用

目的:评估益生菌植物乳杆菌(LP)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导小鼠肠道炎症损伤的治疗作用,并探讨其可能的作用机制.方法:将成年♀Balb/c小鼠随机分成3组:正常对照组(Control组),TNBS灌肠诱导小鼠结肠炎组(TNBS组)和LP干预组(TNBS+LP组).TNBS诱导肠炎模型建立后,给予TNBS+LP组小鼠灌胃LP3wk,其余两组灌胃空白对照PBS液.实验结束后对大鼠一般情况、结肠大体损伤及组织学损伤进行评估,并对各组小鼠结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、LTB4含量及促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达进行测定.结果:与TNBS诱导的TNBS组相比,LP明显减轻了TNBS诱导的小鼠结肠炎症,表现为疾病活动指数下降(3.37±0.36vs0.97±0.47,P<0.05),结肠大体和组织学评分显著降低(1.11±0.61vs4.62±0.40;1.48±0.40vs5.39±1.12,均P<0.05),且LP显著降低了TNBS诱导的小鼠结肠黏膜内中性粒细胞浸润,这与MPO活性降低相一致(25.14U/g±5.22U/gvs90.3U/g±7.70U/g,P<0.05).此外,LP明显降低了TNBS诱导的小鼠结肠内具有化学趋化活性的LTB4含量(3.13ng/g±0.10ng/gvs8.43ng/g±0.49ng/g,P<0.05)和增加了促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达(205ng/g±68ng/gvs375ng/g±79ng/g;446ng/g±116ng/gvs603ng/g±109ng/g,均P<0.05).结论:口服植物乳杆菌能有效缓解TNBS诱导的小鼠结肠炎症状,其作用机制可能与其降低白细胞聚集及促炎细胞因子的表达有关.

黄芩汤抗TNBS诱导的小鼠溃疡性结肠炎活性研究

目的研究黄芩汤水煎液中主要成分及对2,4,6-三硝基苯磺酸钠(TNBS)造模balb/c小鼠的溃疡性结肠炎的作用。方法 HPLC-MS法分析水煎液成分。雄性balb/c小鼠随机分为空白对照组,TNBS模型组,柳氮磺嘧啶阳性对照组(500 mg·kg-1),黄芩汤水煎液1,2,4 g·kg-1治疗组。TNBS造模7 d后,研究各组小鼠的结肠病理评分、微观评分、体质量、小鼠结肠长度和血清髓过氧化物酶(MPO)。结果与标准品对照,黄芩汤水煎液中含有复方中主要成分,黄芩汤水煎液可使TNBS造模balb/c小鼠的体质量明显增加,改善身体的一般状况和小鼠结肠黏膜的损伤,下调MPO。结论黄芩汤水煎液中含有各药物的主要成分,对TNBS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有较好的治疗作用。

培菲康对实验性溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、IL-10水平的影响

目的阐明培菲康对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)TNF-α、IL-10水平的影响,寻求UC治疗的有效新途径。方法成年雌性SD大鼠50只,随机分成5组(n=10):正常对照组(G1)、模型对照组(G2)、培菲康治疗组(G3)、奥沙拉嗪治疗组(G4)、培菲康和奥沙拉嗪联合治疗组(G5),经不同处理和治疗后,通过免疫组化染色观测各组大鼠结肠组织中TNF-α(两步法)、IL-10(S-P法)表达情况,通过实时荧光定量PCR分析结肠组织中TNF-α、IL-10mRNA的表达水平。结果G1组各指标显著低于G2组(P<0.001),肠组织结构正常;与G2组相比,G3、G4、G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平显著降低(P<0.001);与G3或G4组相比,G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平也显著降低(P<0.001);G3或G4组之间,TNF-α、IL-10细胞阳性率及TNF-αmRNA水平无差别(P>0.05),而G4组IL-10mRNA水平明显低于G3组(P<0.001)。结论TNF-α、IL-10在溃疡性结肠炎(UC)的发生、发展过程中起重要作用,培菲康能明显降低该过程中肠组织TNF-α、IL-10的表达水平,可能通过调控这两个细胞因子的表达而发挥疗效。

地塞米松对TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎的治疗作用

目的 观察地塞米松对大鼠实验性结肠炎的治疗作用及副作用。方法 用TNBS/乙醇复制大鼠结肠炎模型 ,6h后给予地塞米松 (Dexamethasone,DX) 0 1mg/kg进行治疗 ,于处死动物前一天采血行白细胞计数并分类 ,5、7、1 0、1 4d处死动物 ,分离结肠 ,计算溃疡面积 ;取结肠粘膜测定SOD、MPO活性。结果 地塞米松能明显缩小溃疡面积 ,抑制炎症反应 ,减轻结肠重量 ,降低结肠粘膜MPO水平 ;并能升高结肠粘膜SOD的活性 ,促进溃疡愈合。在地塞米松发挥治疗作用的同时 ,可见明显的免疫抑制作用 ,表现为胸腺萎缩 ,白细胞数减少。结论 DX对TNBS/乙醇诱导的实验性结肠炎具有显著的治疗作用 ,但长期使用副作用明显 。

乌司他丁对大鼠实验性溃疡性结肠炎的作用

目的探讨乌司他丁对大鼠实验性溃疡性结肠炎（UC）的作用及机制。方法120只SD大鼠随机分为4组，每组各30只。使用三硝基苯磺酸钠（TNBS）建立UC模型，I组不使用乌司他丁，为造膜对照组；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别于造模0、6、12h使用乌司他丁，剂量为2万单位／kg，为研究组。检测分析各组肠静脉内毒素、肿瘤坏死因子仪（TNF-α）和UC模型症状积分（实验开始24、72、168h各观察10只大鼠）。结果①在实验各时段，使用乌司他丁组UC大鼠病变积分均低于I组（均P〈0．05），且24、72h时Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组差异均有统计学意义[24h：（1．8±0．4），（2．7±0．3），（3．0±0．1）；72h：（3．7±2．3），（4．2±1．2），（5．0±0．9），均P〈0．05]，但168h时Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组未见明显差异。②使用乌司他丁组肠静脉内毒素含量在实验各时期内均低于I组，24h时Ⅱ组与Ⅲ组、Ⅳ组之间差异均有统计学意义[（97．7±11．7）ng／L比（117．1±9．7）ng／L，（124．3±4．9）ng／L，均P〈0．05]，72、168h时Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肠静脉血内毒素含量差异无统计学意义。③24h时Ⅱ组TNF-α低于I组及Ⅲ、Ⅳ组[（6．7±2．6）pg／100μg比（13．5±1．7），（11．8±2．8），（12．4±2．7）pg／100μg，均P〈0．05）]，但72、168h使用乌司他丁各组低于I组。结论乌司他丁对TNBS导致的大鼠UC有明显防护作用，其机制可能通过抑制内毒素水平而降低免疫异常水平。

微生态制剂对TNBS诱导的大鼠结肠炎的疗效

目的:评价双歧三联活菌对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠结肠炎的疗效,并探讨其作用机制.方法:成年♀SD大鼠(n=50),随机分为健康对照组A、未治疗组B、双歧三联活菌治疗组C、奥沙拉秦治疗组D、双歧三联活菌和奥沙拉秦联合治疗组E(n=10).观察大鼠的一般情况,检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、结肠组织TNF-α细胞阳性率,比较结肠组织炎症程度.结果:A组大鼠DAI(P<0.001)、血清TNF-α(P<0.001)水平、肠组织TNF-α细胞阳性率(P<0.05)、肠组织学评分(P<0.05)显著低于未治疗组B;B组大鼠DAI、血清TNF-α水平、肠组织学评分、肠组织TNF-α细胞阳性率最高(P<0.05);3个治疗组C、D、E的大鼠DAI、血清TNF-α、肠组织TNF-α细胞阳性率明显下降,肠组织炎症明显消散,以E组最显著(P<0.05),肠组织TNF-α的表达与结肠炎病情轻重呈正相关.结论:双歧三联活菌能有效治疗TNBS诱导的大鼠结肠炎,其作用机制可能与抑制肠黏膜免疫系统效应细胞TNF-α的表达有关.

清香散治疗炎症性肠病信号转导机制探讨

目的:探讨清香散抗炎症性肠病作用机理。方法:三硝基苯磺酸钠法制备大鼠实验性结肠炎模型,观察清香散对模型大鼠组织学损害改善程度及髓过氧化物酶含量变化;凝胶电泳迁移率改变实验检测结肠组织NF-κB,RT-PCR法检测TNFαmRNA、IL-1βmRNA,从细胞信号转导角度探讨其作用机理。结果:清香散能明显改善结肠炎症组织学损害,降低MPO值,降低结肠组织NF-κB及TNFαmRNA、IL-1βmRNA的表达。结论:清香散对炎症性肠病模型有明确疗效,其作用机理可能与其抑制结肠组织NF-κB,下调TNFαmRNA、IL-1βmRNA表达有关。

微生态制剂对实验性大鼠结肠炎的治疗

目的 评价微生态制剂双歧三联活菌对三硝基苯磺酸钠（TNBS）诱导的大鼠结肠炎的疗效,探索炎症性肠病（IBD）治疗的新方法.方法 成年雌性SD大鼠50只,随机分为对照组（G1）、模型组（G2）、双歧三联活菌治疗组（G3）、奥沙拉秦治疗组（G4）、双歧三联活菌和奥沙拉秦联合治疗组（G5）,每组10只.ELISA法检测各组的血清C反应蛋白（CRP）、TNFα、IL-10水平,分光光度法检测肠组织髓过氧化物酶（MPO）活力,并对肠组织进行病理组织学分析.结果 治疗后,G1组肠组织结构正常,血清CRP、TNFα、IL-10水平、结肠黏膜损伤指数（CMDI）及肠组织MPO活力显著低于G2组（P〈0.001）;G2组肠组织炎症程度最莺,血清CRP、TNFα、IL-10水平、CMDI及肠组织MPO活力最高,P〈0.05;3个治疗组G3、G4、G5组的肠组织炎症呈不同程度消散,血清CRP、TNFα、IL-10水平及肠组织MPO活力呈不同程度下降,以G5组最显著,P〈0.05;G2组血清CRP、TNFα、IL-10及肠组织MPO活力均分别与CMDI呈正相关,P〈0.001.结论 双歧三联活菌能有效改善TNBS诱导的大鼠结肠炎,其机制可能与调节细胞因子水平有关.