三邻甲苯基磷酸酯的神经毒性研究进展

三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)是众多有机磷酸酯类化合物代表之一,有多器官毒性作用主要表现在对动物生殖毒性、免疫毒性和神经毒性。本文主要综述了TOCP分子理化特性、TOCP神经毒性作用的研究,并从骨架蛋白含量改变、氧化应激、细胞凋亡与细胞自噬等方面对TOCP神经毒性作用机制进行了综述。

三磷甲苯磷酸酯暴露对鸡脊髓神经中髓鞘碱性蛋白表达的影响

[目的]探讨有机磷化合物（organophosphorvs compounds,OPs）引起迟发型神经毒性（organophosphorus ester-induced delayed neuropathy,OPIDN）后鸡的神经组织中髓鞘碱性蛋白（myelin basic prote in,MBP）表达的变化。[方法]罗曼鹤母鸡48只,随机分成染毒组：给予1000 mg/kg三磷甲苯磷酸酯（tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP）、苯甲基磺酰氟（phenylm ethanesu l fonyl fluoride,PMSF）前干预组：在染毒组之前给予40 mg/kg PMSF和对照组（生理盐水）,每组16只。染毒第5天和第20天,每组分别处死8只动物,低温环境下分离腰髓,提取总蛋白。用双向电泳和质谱分析技术,筛选可能与脱髓鞘相关的差异表达蛋白。[结果]经双向电泳和质谱分析表明,在染毒第5天TOCP组及PMSF前干预组MBP变化与对照组比较,差异无显著性意义;第20天与对照组比较,TOCP组与PMSF前干预组的MBP表达分别为0.3667与0.7601（比值在0.5~2之间无意义）,前者表达下调达2.7倍,差异有显著性意义,后者差异无显著性意义。[结论]TOCP暴露诱导鸡脊髓神经组织MBP表达显著下调,其变化可能与OPIDN模型动物神经组织的脱髓鞘现象有关。

三邻甲苯磷酸酯暴露对鸡脊髓组织基因谱的影响

目的从三邻甲苯磷酸酯(tri-orhto-cresyl phosphate,TOCP)暴露鸡的脊髓组织中筛选有机磷致迟发性神经病(organophosphorus ester induced delayed neuropathy,OPIDN)的相关基因,为进一步探讨OPIDN的发病机制提供目的基因谱。方法罗曼鹤母鸡(Roman hens)随机分为TOCP组、先给苯甲基磺酰氟(phenylmethanesul fonyl fluoride,PMSF)再给TOCP的PMSF前干预组、生理盐水对照组,每组4只。染毒5 d处死实验鸡,低温取脊髓,依次提取总RNA、纯化、转录合成cRNA探针、标记生物素、基因芯片杂交、扫描杂交信号、最后进行基因芯片处理和分析。结果 TOCP组与对照组相比有显著差异,并与PMSF前干预组无显著差异的基因有520个,其中表达差异在3倍以上基因有36个。结论从TOCP暴露鸡脊髓组织中筛选出520个OPIDN相关基因,其中36个基因可能为OPIDN密切相关基因。

三邻甲苯磷酸酯暴露鸡脊髓组织中Cofilin-1b的差异表达

目的从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)暴露鸡的脊髓组织中筛选可能与调控微丝解聚作用相关的差异表达蛋白,为探讨有机磷化合物诱发的迟发性神经毒性(OPIDN)作用机制提供靶蛋白依据。方法 42只罗曼鹤母鸡随机分成1000 mg/kg TOCP组、预先给予40 mg/kg苯甲基磺酰氟(PMSF)后再投1000 mg/kg TOCP的干预组和生理盐水对照组,每组14只。染毒第5和20天,每组分别处死4只鸡,低温环境下分离脊髓,提取总蛋白。利用双向电泳结合质谱分析技术,筛选和鉴定可能与调控微丝解聚作用相关的差异表达蛋白。结果 TOCP组鸡于染毒第7日前后出现进行性共济失调和肌无力等OPIDN典型症状,起病从下肢远端部分开始且病变程度随时间逐渐加重直至全瘫,而其他组鸡在实验观察期间未见OPIDN症状。TOCP组鸡于暴露第5天,分别与对照组和PMSF前干预组比较,其脊髓组织肌动蛋白解聚因子Cofilin-1b分别下调3.4倍和2.8倍,且有统计学意义(差异表达<0.5或差异表达>2),而PMSF前干预组与对照组比较,鸡脊髓组织Cofilin-1b的表达差异无统计学意义。在TOCP暴露第20天,TOCP组鸡脊髓组织Cofilin-1b表达与其他两组比较尽管有下降趋势,但无显著性变化。结论 TOCP暴露能导致鸡脊髓神经组织Cofilin-1b表达在早期显著下调,且该蛋白表达下调可能与微丝骨架结构紊乱及其OPIDN诱发机制有关。

气质联用法测定纺织品中限用溴系和磷系阻燃剂

建立了纺织品中限用溴系阻燃剂（多溴联苯类）2-溴联苯（PBB-1）、2，5-二溴联苯（PBB-9）、4，4＇-二溴联苯（PBB-15）、2，4，6-三溴联苯（PBB-30）和磷系阻燃剂三磷甲苯基磷酸酯（TOCP）的气相色谱-质谱（GC／MS）联用检测方法．确定了前处理过程中超声波萃取的优化条件：萃取溶剂丙酮和正己烷的体积比为2：8，萃取时间40min，溶剂体积40mL．实验结果表明：5种阻燃剂的线性范围为5—1000ng（绝对进样量），信噪比为3时，检测限为0．46～0．80ng（绝对进样量），加标回收率为96．0％～114．7％；方法的精密度为4．63％～6．78％．本实验确定的气质联用检测方法灵敏度高，总时间为10．83min．

TOCP诱发OPIDN后鸡神经组织MAP-2的变化

目的 探讨微管相关蛋白 2 (MAP -2 )在三邻甲苯磷酸酯 (TOCP)诱发的迟发性神经毒性 (OPIDN)中的含量变化及OPIDN的发病机制。方法 成年罗曼母鸡 18只 ,经口 1次给予TOCP 3 75和 75 0mg kg ,第 2 2天处死动物 ,冷环境下取出大脑、脊髓和坐骨神经 ,匀浆后WesternBlot方法测定MAP 2的含量。结果 TOCP使鸡大脑沉淀中MAP -2在 3 75和 75 0mg/kg组分别升高 2 82 %和 3 60 % ,上清中分别升高 160 %和 2 0 4% ,与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0. 0 1) ;MAP -2在脊髓沉淀中分别降低 5 0 %和 43 % ,脊髓上清中分别降低 2 8%和 5 5 % (P <0 .0 1) ;坐骨神经上清中分别升高 85 %和 3 2 9% (P <0 .0 1) ,坐骨神经沉淀中未检出。结论 TOCP中毒性可引起鸡神经组织中的MAP 2含量发生不同程度改变 ,这种改变可能与TOCP引起的迟发性神经毒性有关。

OPIDN致鸡大脑脑型肌酸激酶差异表达

目的探讨有机磷化合物致迟发性神经毒性(OPIDN)鸡脑组织中脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)表达变化。方法罗曼鹤母鸡24只,随机分成三磷甲苯磷酸酯(TOCP)染毒组(1 000 mg/kg)、苯甲基磺酰氟(PMSF)干预组(在染毒之前给予40 mg/kg PMSF)和对照组(生理盐水),每组8只。染毒第5和第21天,每组分别处死8只动物,分离大脑,提取总蛋白;用双向电泳和质谱分析技术,筛选相关差异表达蛋白。结果蛋白双向电泳结果显示,在染毒第5天,TOCP组与对照组、PMSF干预组与对照组的CK-BB蛋白点灰度比值分别为0.858 3和0.913 3,各组间差异无统计学意义(P>0.05);染毒第21天,TOCP组和PMSF干预组与对照组差异蛋白点CK-BB灰度比值分别为0.327 5与0.675 7,前者表达下调达3.0倍;对该蛋白点的质谱分析结果在Swiss-por数据库中进行比对,其与鸡种属、蛋白序列号为gi|45384340的creatine kinase B-type(CK-BB)蛋白的肽段匹配数为26,序列覆盖率为75%,评分值为1 603(可信度高),显示该蛋白点即为CK-BB蛋白。结论 OPIDN可致鸡大脑组织CK-BB蛋白表达显著下调,其变化可能与OPIDN模型动物神经组织损伤有关。