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弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用
被引量:
1
1
作者
谭峰
沙丹
+5 位作者
李丽宁
潘长旺
黄慧聪
梁韶晖
诸葛青云
秦茜
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期312-315,共4页
目的探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形...
目的探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-II抗体的间接ELISA方法。结果PCR扩增得到特异的弓形虫NT-Pase-II基因序列,经测序鉴定无基因突变。重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符。经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体。具有良好的抗原性和免疫原性。用表达的重组NTPase-II蛋白初步建立了用于NTPase-II抗体检测的间接ELISA方法。结论重组NTPase-II蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发。
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关键词
弓形虫RH株
速殖子
三磷酸核苷水解酶-ⅱ原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用
被引量:
1
1
作者
谭峰
沙丹
李丽宁
潘长旺
黄慧聪
梁韶晖
诸葛青云
秦茜
机构
漫州医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期312-315,共4页
基金
浙江省科技计划项目基金项目(No.2006C33025)
温州市科技计划基金项目(No.Y2006A003)联合资助
文摘
目的探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-II抗体的间接ELISA方法。结果PCR扩增得到特异的弓形虫NT-Pase-II基因序列,经测序鉴定无基因突变。重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符。经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体。具有良好的抗原性和免疫原性。用表达的重组NTPase-II蛋白初步建立了用于NTPase-II抗体检测的间接ELISA方法。结论重组NTPase-II蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发。
关键词
弓形虫RH株
速殖子
三磷酸核苷水解酶-ⅱ原核表达
间接ELISA
Keywords
Toxoplasma gondii RH strain
tachyzoite
NTPase
-
ⅱ
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
R382 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用
谭峰
沙丹
李丽宁
潘长旺
黄慧聪
梁韶晖
诸葛青云
秦茜
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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