胃腺癌细胞三磷酸肌醇受体3的表达

1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)在功能上是许多激素、生长因子和神经递质的第二信使,IP3受体(IP34-R)通常局限于内质网,但也被证实存在于核和质膜上.我们采用免疫组织化学染色SP方法检测IP3的Ⅲ型受体(IP3-R3)在胃腺癌细胞的表达.操作按说明书进行,用PBS代替一抗作阴性对照.阳性反应细胞呈黄色到棕黄色颗粒.用多功能真彩色病理图像分析系统(北京麦克奥迪图像技术有限公司产品)分析图像,计算阳性细胞百分率,进行IP3-R3定量分析.所有数据均以均值±标准差(x±s)表示,方差分析,胃腺癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞间的比较用t检验处理.

1，2，3-三磷酸肌醇抗氧化活性研究

研究小麦麸皮植酸酶催化植酸水解法所得三磷酸肌醇(1,2,3-IP3)在小鼠体内外抗氧化作用及机理。用K_3[Fe(CN)_6]体系测还原性表明1,2,3-IP3还原能力很弱。在铁离子催化的Fenton反应中,采用活性氧(ROS)试剂盒测定活性氧ROS含量,当浓度为0.4 mg/mL时,1,2,3-IP3对化学模拟体系中及小鼠血清中活性氧的抑制率分别为91.54%、91.78%。在高浓度(20 mg/mL)时,1,2,3-IP3对大鼠红细胞氧化自溶血具有促进作用;低浓度(2 mg/mL)时具有明显的抑制作用。1,2,3-IP3对小鼠肝匀浆体外温育MDA的生成抑制作用较弱。小鼠腹腔连续注射1,2,3-IP3(100 mg/kg·d)12 d后,与对照组比较,小鼠血清抗活性氧显著提高,同时肝匀浆中MDA含量降低但未达到显著水平。

蛇床子素对人血小板内游离钙离子浓度及三磷酸肌醇受体-3表达的影响

目的:研究蛇床子素对凝血酶引起的人血小板内Ca2+浓度的影响,以及对三磷酸肌醇受体-3(IP3R-3)表达的影响。方法:取健康志愿者静脉血,抗凝,取血小板,经不同药物处理后,用流式细胞仪测定细胞内Ca2+的浓度,激光扫描共聚焦显微镜观察三磷酸肌醇受体-3的表达。结果:当细胞外液存在和不存在Ca2+时,不同浓度的蛇床子素均可降低0、2.5、5min时凝血酶引起的血小板内Ca2+浓度的升高,且在较高浓度时具有显著性差异。经不同浓度的蛇床子素处理后,血小板IP3R-3表达的荧光强度和面积均降低,尤其高浓度的蛇床子素作用更为明显,具有显著性差异,低、高浓度的蛇床子素对IP3R-3表达的抑制率分别为36.5%和65.6%。结论:蛇床子素能抑制凝血酶引起的血小板内Ca2+浓度的升高,其中抑制IP3R-3的表达可能是其作用机制之一。

高压氧对脑缺血大鼠海马组织三磷酸肌醇的作用

目的:研究高压氧(HBO)对脑缺血大鼠海马组织三磷酸肌醇(IP_3)的作用。方法:实验用 SD 大鼠,制作四动脉闭塞脑缺血模型,应用 Amersham 公司的 IP_3测定系统,观察脑缺血时及高压氧作用后 IP_3的改变。结果:脑缺血后,海马组织 IP_3明显升高,其中缺血10 min 较30 min 改变更明显;缺血10 min 后经不同处理,IP_3水平均明显下降,其中经0.1 MPa 纯氧和0.25 MPa 高压氧处理动物,IP_3水平不及单纯再灌注和0.25 MPa高压空气作用更为明显。结论:IP_3在脑缺血早期改变明显,参与胞内游离 Ca^(2+)浓度调释,但 IP_3在高压氧降低胞浆内游离 Ca^(2+)浓度过程中,未显示重要作用,而且高压氧可能有促进 IP_3产生的作用。

三磷酸肌醇影响钙释放的两个作用

此模型主要说明激动剂诱发的 Ca2 +振荡实验中影响 Ca2 +释放的两个因素 :(a)三磷酸肌醇 (IP3)抑制Ca2 + 从内质网 ER中释放。 (b) IP3通过 Gq作用磷酸酶 C促使 Ca2 + 从 ER释放。模型假设 ER上 IP3受体是相互独立的亚基组成的四聚物 ,每个亚基可以结合 Ca2 + 和 IP3。IP3受体 / Ca2 + 通道的缓慢恢复到稳定状态是钙对自身释放抑制的原因。钙振荡的关键是最大 Ca2 +依赖性 IP3的进入速率 (v6 )和 IP3的衰减时间常数 (v7)的比值 : 当 v6 / v7<0 .2 8,不振荡 ;II当 0 .2 8<v6 / v7<0 .5 72振荡 ;III当 v6 / v7>0 .5

不同频率摩腹法对脾虚型功能性消化不良家兔胃肠平滑肌IP3浓度及Ca^(2+)强度的影响

【目的】探讨不同频率摩腹法对脾虚型功能性消化不良(FD)家兔的治疗作用及机制。【方法】将76只家兔随机分为正常组、模型组、摩法低频组(机械臂摩腹101~150次/min)、摩法高频组(机械臂摩腹201~250次/min)、摩法低频+抑制剂组[机械臂摩腹101~150次/min+腹腔注射肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-92.0 mg·kg^(-1)]、摩法高频+抑制剂组(机械臂摩腹201~250次/min+腹腔注射ML-92.0 mg·kg^(-1))。除正常组外,其余各组采用苦寒泻下法联合饥饱失常法构建FD模型。干预过程中,记录家兔一般情况。干预结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定胃体、小肠平滑肌组织中三磷酸肌醇(IP3)浓度,采用流式细胞术测定家兔胃体平滑肌细胞中Ca^(2+)强度。【结果】经摩腹法干预后,高、低频组家兔一般情况有不同程度改善。摩法低频组、摩法高频组小肠平滑肌细胞IP3浓度较模型组升高(P<0.05或P<0.01),摩法低频+抑制剂组、摩法高频+抑制剂组IP3浓度较模型组降低(P<0.05)。摩法低频组、摩法高频组、摩法低频+抑制剂组胃体平滑肌细胞Ca^(2+)强度较模型组升高,其中摩法低频组、摩法高频组与模型组间的差异有统计学意义(P<0.01),摩法高频+抑制剂组Ca^(2+)强度较模型组降低(P<0.05);摩法低频组Ca^(2+)强度较摩法高频组升高,摩法低频+抑制剂组Ca^(2+)强度较摩法高频+抑制剂组升高(均P<0.01)。【结论】高、低频率摩腹法干预均可以改善脾虚型FD家兔症状,提高胃肠道平滑肌细胞中IP3浓度与Ca^(2+)强度,低频摩腹法的改善作用优于高频摩腹法。

三穗鸭IP3R3基因SNP位点鉴定及其对蛋壳品质的影响

【目的】明确IP3R3对蛋壳性状的效应机制及其在蛋壳品质改良中的应用价值,为开展蛋壳品质改良分子标记育种提供参考依据,也为深入研究IP3R3基因的生物学功能打下基础。【方法】以288羽三穗鸭为研究对象,收集45周龄母鸭生产的鸭蛋,测定蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度和蛋壳重;采用DNA直接测序法对三穗鸭IP3R3基因SNP位点进行鉴定,使用SHEsis进行单倍型及连锁不平衡分析,通过RNAfold预测不同单倍型的mRNA二级结构和自由能,并以SPSS 18.0中的一般线性模型(GLM)对三穗鸭IP3R3基因SNP位点与蛋壳品质进行关联分析。【结果】在三穗鸭IP3R3基因外显子上发现2个SNPs位点,分别位于第49外显子的g.35195T>C和g.35207G>A,均属于同义突变,且均存在3种基因型,对应的多肽信息含量(PIC)分别为0.330和0.276,属于中度多态位点(0.25<PIC<0.50)。g.35195T>C和g.35207G>A位点产生的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(χ^2-HWE<5.991),但2个SNPs位点间不存在强的连锁不平衡(Dʼ为1.000,γ^2为0.111)。2个SNPs位点联合可构建3种单倍型和6种双倍型,优势单倍型H3(TG)的频率为0.495,劣势单倍型H2(TA)的频率为0.208;单倍型H1、H2和H3的mRNA二级结构最小自由能分别为-475.50、-476.50和-476.10 kJ/mol,表明2个SNPs位点的突变能引起基因mRNA二级结构和自由能改变。g.35195T>C和g.35207G>A位点对三穗鸭蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋形指数、蛋重和蛋壳重的影响均未达显著水平(P>0.05,下同);双倍型H1H1个体的蛋壳强度显著高于其他双倍型个体(P<0.05,下同),双倍型H2H2个体的蛋形指数显著低于其他双倍型个体,其他双倍型个体间均无显著差异。【结论】三穗鸭IP3R3基因与蛋壳品质有一定关联性。在三穗鸭IP3R3基因外显子上发现的2个SNPs位点能引起基因mRNA二级结构和自由能改变,其构建的双倍型可作为主效候选基因或与主基因紧密连锁的分子标记用于鸭蛋壳品质改良。

IP_3R1在弥漫性轴索损伤后早期的表达及其意义

目的通过观察大鼠弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury,DAI）后I型1,4,5-三磷酸肌醇受体（inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type I,IP3R1）表达随时间的变化,探讨其作用,为DAI后轴索的继发性损伤及断裂提供研究基础。方法 25只健康雄性成年SD大鼠,随机分为对照组和实验组（DAI组）,采用Golgi镀银染色及SP免疫组织化学染色,观察其在不同时间（3~72h）的脑干组织病理变化及IP3R1的表达情况。结果 Golgi镀银染色证明大鼠DAI模型成功;免疫组织化学染色显示,对照组大鼠脑干中IP3R1有弱阳性表达,实验组阳性细胞较对照组明显增高,在DAI损伤后,大鼠脑干组织IP3R1表达3h时就开始升高,至24h高峰后开始下降,72h下降至低水平。结论IP3R1可能在DAI后轴索的继发性损伤及断裂中起重要作用。

1,4,5-三磷酸肌醇受体3促进常染色体显性遗传性多囊肾病囊泡生长

本文旨在阐明1,4,5-三磷酸肌醇受体3(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor 3,IP_(3)R3)在常染色体显性遗传性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)肾囊泡发生、发展过程中的作用,为ADPKD的治疗提供理论基础。使用2-氨基乙氧基二苯基硼酸盐(2-aminoethoxy-diphenyl borate,2-APB)和shRNA抑制IP_(3)R3的表达水平,通过MDCK(MadinDarby canine kidney)囊泡模型、胚胎肾囊泡模型、肾脏特异性Pkd1敲除(PKD)小鼠模型探究IP_(3)R3在囊泡生长过程中的作用,并通过Western blot、免疫荧光染色技术探究IP_(3)R3调控囊泡生长的分子机制。结果显示,在PKD小鼠肾脏中,IP_(3)R3的表达水平显著升高。在胚胎肾囊泡模型和MDCK囊泡模型中,通过2-APB或shRNA抑制IP_(3)R3的表达可显著延缓囊泡的生长。机制研究结果显示,在ADPKD肾囊泡生长过程中,异常活化的cAMP-PKA信号通路促进了IP_(3)R3的表达,并促进其从内质网向细胞间连接处转运。IP_(3)R3的上调以及亚细胞定位的异常激活MAPK和mTOR信号通路,加速细胞周期,引起囊泡上皮细胞异常增殖,最终促进囊泡的生长。上述结果提示,IP_(3)R3在促进ADPKD肾囊泡生长过程中发挥重要作用,抑制IP_(3)R3的表达及亚细胞再分布过程可以有效延缓囊泡的生长,而IP_(3)R3有望成为ADPKD的治疗靶点。

bFGF对人晶状体上皮细胞系内钙离子及IP3R、RyR的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖度,激光扫描共聚焦显微镜测细胞内静息钙浓度;RT-PCR(reverse-transcriptase,PCR)方法检测10μg/L bFGF作用后细胞内IP3R和RyRmRNA的表达。结果:与对照组相比,3个浓度的bFGF对LEC-B3都有促增殖作用(P<0.01),其中10μg/L作用最强;bFGF作用后细胞内Ca2+浓度呈bFGF浓度依赖性增高,10μg/L,100μg/LP<0.01,1μg/L<0.05;10μg/L bFGF作用后的细胞IP3RI mRNA表达无明显变化,III型表达明显减弱(P<0.01),ryan-odineRI,IIImRNA表达升高(P<0.05,0.01)。结论:bFGF诱导LEC-B3细胞增殖引起细胞内钙离子浓度增加。Ca2+升高呈bFGF浓度依赖性,并不与细胞增殖度平行。bFGF对IP3R和RyR亚型的mRNA表达有一定影响,并且细胞内Ca2+浓度升高与bFGF刺激RyRmRNA表达升高有关。

基于PI3K/Akt信号轴探究三石生新膏对大鼠压疮面愈合的影响

目的探究三石生新膏对大鼠压疮面愈合的影响及其作用机制。方法实验分为假手术组(Sham)、模型组(Model)、贝复新组(bFGF)、三石生新膏组(TM)、三石生新膏+PI3K阻断剂组(TM+LY294002)。利用局部组织缺血/再灌注损伤法制备压疮大鼠模型。分别于d 3、7和14观察各组大鼠创面愈合率。于换药处理d 3进行创面病理学改变、血浆VEGF含量,创面皮肤组织VEGF以及PI3K/Akt信号相关蛋白表达检测。结果与Sham组相比,Model组创面愈合率降低(P<0.01),创面损伤严重。VEGF含量降低(P<0.01),VEGF、p-PI3K、p-Akt表达降低(P<0.01)。与Model组相比,TM组创面愈合率、VEGF含量增加(P<0.05或P<0.01),创面损伤明显改善,VEGF、p-PI3K、p-Akt表达升高(P<0.05或P<0.01)。与TM组相比,TM+LY294002组创面愈合率以及VEGF含量降低(P<0.01)、创面损伤加重,VEGF、p-PI3K、p-Akt表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论三石生新膏可通过PI3K/Akt信号上调VEGF表达,促进大鼠压疮面愈合。

妊娠期高血压患者GATA结合蛋白3 可溶性白细胞抗原Ⅰ类分子 三磷酸肌醇受体及微小核糖核酸-15b水平变化和意义分析

目的 探讨妊娠期高血压患者GATA结合蛋白3(GATA-3)、可溶性白细胞抗原Ⅰ类分子(sHLA-Ⅰ)、三磷酸肌醇受体(IP3R)、微小核糖核酸-15b(miR-15b)水平变化及意义。方法 选取2021年5月—2022年8月金华市中心医院收治的妊娠期高血压患者70例,同期在该院建档并分娩的50例健康产妇为健康对照组。纳入本研究后采集空腹外周静脉血4 ml,分娩后取胎盘组织约200 mg。酶联免疫吸附法检测血清GATA-3、sHLA-Ⅰ浓度;Western blot检测胎盘组织中IP3R表达;RT-PCR检测血清miR-15b表达。结果 妊娠期高血压组血清GATA-3(35.16±2.18)ng/L、sHLA-Ⅰ(21.31±2.85)U/ml明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01);妊娠期高血压组胎盘组织中IP3R相对表达量(1.63±0.18)、miR-15b相对表达量(1.71±0.35)明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。有妊娠期高血压史、高血压家族史的妊娠期高血压患者血清GATA-3、sHLA-Ⅰ浓度明显低于无妊娠期高血压史、无高血压家族史的患者,胎盘组织中IP3R、miR-15b表达水平明显高于无妊娠期高血压史、无高血压家族史的患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。GATA-3、sHLA-Ⅰ、IP3R及miR-15b水平在不同年龄、体质量指数、孕产情况的妊娠期高血压患者间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。妊娠期高血压组不良母婴结局的发生率明显高于健康对照组,其中早产、胎儿生长受限、胎儿窘迫及产后出血发生率明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。母婴结局不良的妊娠期高血压患者血清GATA-3(38.14±2.53)ng/L、sHLA-Ⅰ(23.45±2.68)U/ml明显高于母婴结局良好患者,胎盘组织中IP3R相对表达量(1.51±0.18)、miR-15b相对表达量(1.48±0.29)明显低于母婴结局良好患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,GATA-3、sHLA-Ⅰ、IP3R及miR-15b对妊娠期高血压患者母婴结局均具有较高的预测价值(P<0.01);其中各指标联合检测对妊娠期高血压患者母婴结局的预测价值最高。结论 妊娠期高血压患者血清GATA-3、sHLA-Ⅰ浓度明显降低,胎盘组织中IP3R、miR-15b表达水平明显升高,联合检测可用于母婴结局的预测。

幼鼠颌下腺IP_3受体免疫电镜观察

目的 :观察 IP3受体在幼年大鼠颌下腺的分布 ,探讨其增龄变化及其意义。方法 :采用胶体金标免疫电镜观察 IP3受体在幼年大鼠颌下腺的分布。结果 :金标颗粒定位于大鼠颌下腺腺泡细胞内质网上 ,以及肌上皮细胞和内皮细胞。 1d龄幼鼠颌下腺 IP3受体免疫金标数量最多 ,随增龄而减少。结论 :IP3受体可能在幼鼠颌下腺细胞的分化。

P物质对培养的大鼠垂体前叶细胞IP_3含量影响的研究

目的 探讨SP对大鼠AP培养细胞中IP3 的水平是否有影响 ,进一步阐述SP产生生物学效应的机制。方法 原代培养成年雌性S -D大鼠AP细胞 48h ,[3 H]-肌醇标记 36h ,加入不同浓度的SP孵育 30min ,超声震碎细胞 ,用AG1-X8阴离子交换层析树脂提取分离 [3 H]-IP ,应用液闪测定样本计数率 (cpm)。 结果 孵育时间为 30min时 ,SP以浓度依赖的方式使AP细胞内IP3 的水平增加。结论 兴奋AP细胞SPR后的生物学效应至少有一部分是通过第二信使IP3 来完成的 ,在信息转导途径上为SP对生殖轴调控的理论进行进一步证明和补充。

鸭产蛋循环中肌醇1,4,5-三磷酸(IP3R)受体基因的组织表达谱分析

肌醇1,4,5-三磷酸(inositol 1,4,5-triphosphate receptor,IP3R)受体基因是Ca^(2+)跨膜转运活性的关键调控因子,会影响蛋壳品质。为了探究IP3R受体基因在鸭产蛋循环不同时期各组织的表达情况,笔者采用RT-PCR方法检测鸭产蛋后0 h、2 h、5 h和16 h IP3R受体基因在不同组织中的表达情况,并分析其表达调控效应。结果显示,IP3R受体基因在鸭不同产蛋时期各个组织中均存在表达;基因表达变化规律分析发现,子宫中IP3R受体基因的表达量在16 h内均最高(P<0.01),0~16 h肾脏和大肠中IP3R受体基因的表达量极显著升高(P<0.01);小肠和十二指肠中的表达量在0~16 h内极显著下降(P<0.01)。以上结果表明,鸭蛋壳形成过程中,IP3R受体基因的表达对子宫Ca^(2+)释放具有调控作用。本次研究结果为进一步研究IP3R受体基因在鸭蛋壳形成过程中对Ca^(2+)的调控机理提供了参考和理论依据。

3G中IPv6SIP电话与公网中IPv4SIP电话通讯的方法

3GPP组织在对第三代移动网络制订标准时,选择IPv6作为唯一的网络层协议,同时选择SIP作为其呼叫控制协议。本文对3G中基于IPv6的SIP电话,如何与目前正广泛使用的基于IPv4的SIP电话进行正确的通讯进行了描述。

移动IP在3GPP2移动通信系统中的设计与实现

通过蜂窝无线网络接入Internet是第三代移动通信系统运营商必须提供的关键业务,本文着重从移动IP分组数据网络的结构及相关协议栈、移动性管理和用户的认证授权计费等方面阐述了移动IP在3GPP2移动通信系统中的设计和实现。

“后数据时代”:下一代IP网络承载3G业务的方案研究

近年来随着互联网和移动通信的高速发展,移动话音、IP话音、即时通信等现代通信方式对固定话音通信产生了巨大冲击。而激烈的市场竞争使得数据业务发展能力也逐渐走缓。提出“后数据时代”的概念,指出固网运营商应使用下一代IP网络承载语音、数据和宽带视频通信等综合业务以拉动整体收入。同时,为充分利用原有固定宽带网络资源,3G业务无需再新建专网来单独承载,而和固定宽带业务共用下一代IP网络进行承载。比较了IP网络承载3G业务的几种承载方案,论述了下一代IP网络的承载能力。

IP电话协议介绍及其在3G中的应用

SIP是由IETF提出的一套多媒体IP的体系结构,是IP电话的一个重要协议。本文首先介绍了SIP的系统组成,网络结构和特点;然后介绍了SIP在3G中的应用。