一锅法全细胞催化合成胞苷三磷酸的研究

分别在大肠杆菌BL21(DE3)中构建胞苷激酶(CDK)与乙酸激酶(ACK)的共表达及融合表达体系和胞苷酸激酶(CMK)与乙酸激酶(ACK)的融合表达体系,其中融合菌株SUMO-CDK-L2-ACK与CMK-L2-ACK构成的双融合催化体系具有较好的催化活性。搭建了双融合菌全细胞一锅法催化合成胞苷三磷酸(CTP)反应体系,并对其温度、pH、金属离子、乙酰磷酸投加量及菌粉投加量等进行优化。结果表明,在优化反应体系中,反应75 min时CTP产量达到最高为108 mmol/L,总收率达86.4%,实现了CTP的一锅法高效合成。

注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查法的研究

目的建立注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素检查方法。方法按《中国药典》2020年版四部通则1143细菌内毒素检查法,从严确定注射用三磷酸胞苷二钠的限值,用凝胶法进行方法学验证和细菌内毒素检查。结果两个厂家的4批供试品在0.2 mg/ml浓度下对两个厂家的鲎试剂不存在干扰,细菌内毒素的限值设定为2.5 EU/mg,4批注射用三磷酸胞苷二钠细菌内毒素的检查结果均符合规定。结论本研究建立的细菌内毒素检查方法可用于替代家兔热原检查法,满足对注射用三磷酸胞苷二钠的质量控制要求。

消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠治疗脑出血恢复期的临床研究

探讨脑出血恢复期患者的临床治疗中选用消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠的具体效果和临床应用价值。方法 选取2021年10月~2023年3月就诊于我院的脑出血恢复期患者为观察对象,入组并符合标准的患者共62例,以等量随机法完成分组,分为常规与联合两组,每组各31例。治疗方案选择上,常规组选择三磷酸胞苷二钠注射液静脉滴注,联合组选择三磷酸胞苷二钠联合消瘀康胶囊,比较临床疗效指标。结果 与常规组治疗总有效率比较,联合组更高(P<0.05);与常规组疾病症状缓解时间比较,联合组各症状缓解时间更短(P<0.05);两组别NIHSS评分与Barthel评分比较,联合组两项评分均优于常规组(P<0.05);两组别IL-6、S100B、Hcy、BDNF水平比较,联合组四项指标水平均优于常规组(P<0.05)。结论 脑出血恢复期治疗方案选择消瘀康胶囊联合三磷酸胞苷二钠,能够强化临床治疗效果,在短时间内改善疾病相关症状,同时在促进脑神经功能恢复、降低炎性水平方面具有显著的优势,具有较强的临床应用价值。

高氧对早产新生大鼠肺组织细胞色素b、三磷酸腺苷合成酶6表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织细胞色素b(Cyt b)、ATP合成酶6(ATPase 6)动态表达的影响。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧质量浓度>85%;空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高氧或空气暴露后1、4、7、101、4 d提取肺组织RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Cyt b、ATPase 6 mRNA表达;应用免疫组化方法检测肺组织切片Cyt b。结果1.与空气组比较,高氧暴露14、d Cyt b mRNA含量及其表达显著增强(P<0.05);7 d后Cyt b呈下降趋势,其表达较空气组减弱,但两者比较无显著性差异(P>0.05)。2.高氧组与空气组比较,ATPase 6 mRNA表达于1 d时显著增强(P<0.05),4 d虽无显著改变(P>0.05)但仍增强;7、10 d时减弱;14 d又极显著增强(P<0.01)。3.随日龄变化高氧暴露后,肺组织Cyt b免疫组化结果与Cyt b mRNA表达相似。与空气组比较,高氧暴露14、d肺组织Cyt b表达显著增强(P<0.05);7 d后Cyt b呈渐下降趋势,其表达较空气组减弱,但7、10 d两者比较无显著性差异,14 d极显著减弱。结论线粒体呼吸链中Cyt b、ATPase 6在肺发育中起重要作用。高氧诱导线粒体呼吸链中Cyt b、AT-Pase 6结构和功能改变,导致氧化磷酸化解耦联,参与高氧肺损伤的发病机制。

利用啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的研究

研究了利用游离的啤酒酵母将胞苷一磷酸(CMP)合成为胞苷三磷酸(CTP),采用HPLC法分析反应过程中各工艺参数对转化率的影响并对其主要因素进行了正交优化。结果表明,在25g酵母量中加入20mL底物溶液,其中包括CMP60mmol/L、葡萄糖150mmol/L、磷酸盐缓冲液(钠盐)250mmol/L、氯化镁8mmol/L、pH为6.0,温度35℃、反应时间2.0h,在此反应体系下,通过添加适量ATP、吐温,CTP的转化率可维持在80%以上。

胞嘧啶核苷三磷酸的光合合成

研究了用菠菜叶绿体通过光合磷酸化反应将ＣＭＰ合成为ＣＴＰ，本方法具有叶绿体来源方便、生产设备简单、反应时间短、转化率高等优点。约２８０ｇ菠菜叶可将ｌｇＣＭＰ合成１．３ｇＣＴＰ，转化率８５％左右。合成的粗品经离子交换提纯后，成品的纯度为９３．４％，对ＣＭＰ的收率５０．２％。

固定化酵母细胞生物合成胞苷三磷酸工艺的优化

以胞苷一磷酸(CMP)为底物,采用响应面分析法对固定化酵母细胞发酵制备胞苷三磷酸(CTP)的影响因素进行优化,采用HPLC法对CTP定量。结果表明:在CTP生物合成中磷酸根离子和Mg2+浓度存在一个临界浓度低于临界浓度二者将限制CTP产率;在本实验范围内固定化酵母发酵制备CTP的最佳工艺为:20mL底物样液添加20g固定化酵母,CMP浓度100mmol/L、葡萄糖浓度100mmol/L、磷酸盐浓度250mmol/L、Mg2+浓度15mmol/L、pH6.1、反应时间2h,在此条件下CTP的产率可达67.89%。

SA/NaCS-PDMDAAC微胶囊固定化酵母细胞合成胞苷三磷酸

通过海藻酸钠/纤维素硫酸钠-聚二甲基二烯丙基氯化铵(SA/NaCS-PDMDAAC)微胶囊固定化酵母细胞将胞苷一磷酸(CMP)转化为胞苷三磷酸(CTP),考察了各种因素条件对CTP转化率的影响,以提高CTP的转化率。通过考察分批补料添加葡萄糖,固定化酵母量,CMP浓度等以达到提高CTP转化率的要求。结果在250 mL锥形瓶中加入20 mL反应液(CMP60 mmol.L-1,葡萄糖150 mmol.L-1,磷酸缓冲液250 mmol.L-1,氯化镁20 mmol.L-1,pH6.5),加入固定化酵母25g,在35℃下每反应2 h添加葡萄糖0.27 g一次,当添加2次后,即反应总时间为6 h,CTP转化率可达80%以上。该固定化酵母细胞可以反复利用5次,且转化率稳定在70%左右。

啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究

以胞苷一磷酸(CMP)为底物,利用啤酒酵母细胞内的酶系催化合成了胞苷三磷酸(CTP),实验采用高效液相色谱分析了底物浓度、葡萄糖浓度、磷酸盐浓度、酵母量、反应时间等因素对转化反应的影响。结果表明,最佳转化条件为:CMP 20 mmol/L、葡萄糖150 mmol/L、磷酸盐250 mmol/L、酵母量0.3 g/mL、反应时间75 min。在此条件下,CTP的平均产率可高达59.01%。

三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性

目的探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8(ATPase6、8)与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧体积分数>850 mL/L;空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14 d提取其肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ATPase6、8 mRNA表达。结果1.与空气组比较,高氧暴露1 d ATPase6 mRNA表达显著增强(P<0.05);4、7、10 d时无显著性差异(Pa>0.05);14 d又显著增强(P<0.01)。2.高氧组与空气组比较,ATPase8 mRNA表达于1、4、10 d时无显著改变(Pa>0.05);7、14 d时明显增强(Pa<0.05)。结论高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达,这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。

利用抗CTP合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株

目的:通过解除对CTP合成酶的反馈抑制,得到胞苷高产突变株。方法:以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行亚硝基胍(NTG)诱变,用6-氮杂尿嘧啶(6-AU)、5-氟胞苷(5-FCR)和3-脱杂氮尿嘧啶(3-DU)3种嘧啶结构类似物进行抗性筛选。结果:筛选得到突变株K-215,研究表明其抗6-AU、5-FCR和3-DU的浓度分别是0.9mg/mL,3.5mg/mL和4.5mg/mL;突变株CTP合成酶的活性为出发菌株的6.2倍,37℃培养80h积累胞苷可达6.2mg/mL。结论:突变株K-215能够累积胞苷且CTP合成酶的反馈抑制得到部分解除。

三磷酸胞苷二钠(CTP)联合地塞米松综合治疗贝尔面瘫的疗效及安全性分析

目的探讨三磷酸胞苷二钠(CTP)联合地塞米松综合治疗贝尔面瘫的疗效及安全性。方法 100例入住我院的贝尔面瘫患者按照抽签方法随机地均分为对照组与观察组,各为50例。对照组给予地塞米松治疗,观察组在此基础上给予CTP治疗。比较两组临床疗效、面神经功能指数评分(FNFI)及不良反应。结果①观察组治疗1、2个疗程后总有效率为86.00%、98.00%,均显著高于对照组[分别为72.00%、82.00%](P<0.05);②两组治疗前后FNFI评分均有显著性差异(P<0.05),且观察组治疗后FNFI评分显著高于对照组(P<0.05);③两组治疗过程中均无任何不良反应出现。结论三磷酸胞苷二钠(CTP)联合地塞米松综合治疗贝尔面瘫的疗效显著,安全性高,值得在临床上加以推广并应用。

三磷酸胞苷加地塞米松等综合治疗突发性聋的临床观察

目的 对三磷酸胞苷 (cyntridinitriphosphatis ,CTP)加地塞米松等综合治疗突发性聋的疗效进行临床观察。方法 将 2 0 7例 (312耳 )突发性聋患者按照就诊顺序分成CTP组 10 6例 (15 9耳 )和对照组 10 1例 (15 3耳 )。CTP组使用CTP治疗 ,对照组采用传统的ATP、辅酶A、肌苷 0 4g和维生素C治疗 ;两组还同时加用地塞米松、维生素B、吸氧、丹参等完全相同的治疗。如有明确的感冒受凉史(CTP组 2 5例 ,对照组 2 7例 ) ,则加用抗病毒药及干扰素。两组在治疗前和治疗后 2d开始每 4d用纯音电测听测试患者的听力。结果 CTP组和对照组在治疗前平均听阈分别为 (76 5 6± 19 0 4 )dBHL和 (74 0 1± 17 0 7)dBHL(P >0 0 5 ) ;治疗后 ,CTP组 10 6例中痊愈 6 7例 (94耳 )、显效 2 1例 (35耳 )、有效 16例 (2 7耳 )及无效 2例 (3耳 ) ,治愈率 5 9 12 % ,平均听阈为 (43 0 8± 2 1 4 7)dBHL ,听力平均提高(2 7 39± 18 4 4 )dB ,未见任何副作用 ;对照组 10 1例 (15 3耳 )中痊愈 16例 (2 5耳 )、显效 19例 (32耳 )、有效 5 1例 (73耳 )及无效 15例 (2 3耳 ) ,治愈率 16 34% ,平均听阈分别为 (5 7 13± 32 4 1)dBHL ,平均听力提高 (19 4 5± 19 12 )dB。两组经统计学处理差异有显著性 (P <0 0 5 )。

三磷酸胞苷二钠防治草酸铂外周神经毒性的临床观察

目的 寻找预防和治疗奥沙利铂 (草酸铂 )外周神经毒性的有效药物。方法 对 70例使用草酸铂治疗的胃癌和大肠癌患者 ,于给草酸铂前一天使用三磷酸胞苷二钠作预防组 (30例 ) ,另收集以草酸铂治疗的胃肠癌症患者 4 0例 ,于草酸铂开始治疗的第 4周起使用三磷酸胞苷二钠作为对照组 ,观察并对比两组外周神经毒性发生情况。结果 预防组较对照组毒性反应明显减少 ,对照组中出现外周神经毒性的 15例患者 ,在使用三磷酸胞苷二钠后 ,外周神经毒性的发生率显著降低 ,程度明显减轻。

前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗军事噪声性耳聋的临床疗效观察

目的评价前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗军事噪声性耳聋的疗效及安全性。方法将由军事噪声引发的78例耳聋患者随机分为两组,对照组给予糖皮质激素、B族维生素、高压氧等常规治疗;治疗组在常规治疗的基础上加用前列地尔联合三磷酸胞苷二钠治疗,疗程均为2周。结果对照组有效率为69.23%,治疗组有效率为89.74%,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。全部病例治疗期间没有发生药品不良反应。结论在常规治疗的基础上加用前列地尔联合三磷酸胞苷二钠,对治疗军事噪声性耳聋科有明显疗效,值得临床推广应用。

三磷酸胞苷二钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的探讨三磷酸胞苷二钠(CTP)诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用。方法取成年SD大鼠,用贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞(BMSCs),传代扩增,连续观察细胞形态及生长特性。用不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.40和0.80mg/mL)CTP对BMSCs进行诱导;诱导后用免疫组织化学检测细胞神经微丝蛋白(NF)、胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元烯醇化酶(NSE)的表达。计算阳性细胞比例,进行统计学分析,选出合适的诱导剂量。结果随CTP浓度增高,经免疫组织化学检测NF、GFAP和NSE阳性细胞比例也呈现逐步增高趋势,到一定浓度后又有所下降,统计学分析,CTP浓度为0.2mg/mL时,能够诱导NF、GFAP和NSE阳性细胞比例为(32.73±0.63)%、(62.77±2.45)%和(30.41±0.65)%,显著高于对照组(P<0.01)。结论 CTP是一种很好的体外诱导剂,可以诱导MSCs向神经细胞分化,以0.2mg/mLCTP作诱导剂,能够获得较明显的诱导MSCs向神经细胞和神经胶质细胞分化的结果。

三磷酸胞苷二钠对脑缺血大鼠海马CA_3区突触体素表达的影响

目的 研究局灶性脑缺血后海马 CA3 区突触体素的动态表达及其三磷酸胞苷二钠对其干预的影响。方法 选取 SD大鼠 60只 ,随机分为脑缺血后自然恢复组、药物干预组和假手术对照组。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型 ,应用免疫组化技术观察海马 CA3 区突触体素的表达。结果 脑缺血后自然恢复组大鼠突触体素的表达较对照组明显降低 (P<0 .0 1) ;但 7～ 2 1d突触体素的表达逐渐上调 (P<0 .0 1)。应用三磷酸胞苷二钠干预后 ,突触体素表达与自然恢复组相比明显升高。结论 脑缺血损伤后海马 CA3 区突触体素表达减少 ,但机体自身存在着神经元的修复和再生 ;三磷酸胞苷二钠可上调突触体素的表达 ,具有促进缺血神经元的修复、再生及突触重塑作用。

内嵌纳米粒阴离子交换聚甲基丙烯酸羟乙酯复合晶胶分离三磷酸胞苷

用结晶致孔法制备了内嵌SiO2颗粒的聚甲基丙烯酸羟乙酯基复合晶胶,经甲基丙烯酸二甲氨乙酯接枝修饰后,得到了阴离子交换复合晶胶介质,用于从啤酒酵母转化液中色谱分离三磷酸胞苷。色谱分离过程以0.01 mol·L-1HCl为平衡液,以0.02 mol·L-1和0.1 mol·L-1的NaCl溶液(用平衡液配制)分步洗脱。通过高效液相色谱定量分析,所得三磷酸胞苷的纯度达97.2%,回收率82.5%。与其他分离方法相比,本法过程简单、分离迅速高效,在核苷酸药物的分离领域具有很好的应用前景。

三磷酸胞苷二钠治疗头孢菌素致双硫仑样反应疗效观察

双硫仑样反应是指双硫仑作为戒酒药在服药后一定时间内饮酒，引起面部潮红、发热、头痛、恶心、呕吐、口中有大蒜样气味等症状，甚至发生休克，严重者导致呼吸抑制、心肌梗死、急性心力衰竭、惊厥和死亡，其机制为双硫仑能抑制乙醛脱氢酶活性，使乙醛蓄积，乙醛经过乙醛脱氢酶催化生成乙酸，

磷酸肌酸联合三磷酸胞苷二钠治疗新生儿缺氧缺血性脑病合并心肌损害的临床研究

目的观察磷酸肌酸(Pcr)联合三磷酸胞苷二钠(CTP)治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)合并心肌损害的疗效。方法62例HIE合并心肌损害的患儿随机分为治疗组32例,对照组30例。两组常规治疗相同,对照组加用复方丹参注射液,治疗组加用Pcr和CTP。对两组患儿的心电图和心肌酶谱恢复正常率、神经行为评分(NB-NA)、主要症状与体征恢复时间及住院时间等进行比较分析。结果治疗组患者的心电图恢复正常率、心肌酶谱恢复正常率、NBNA评分、症状体征恢复时间及住院时间与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Pcr联合CTP治疗HIE合并心肌损害疗效显著,安全有效。