三磷酸腺苷生物发光法在提高复杂样品细菌检测能力方面的应用研究进展

微生物污染对食品、医药、卫生等领域造成严重危害,因此,开发微生物快速灵敏检测技术至关重要。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生物发光法相比于其他微生物检测技术,具有检测速度快、可实时检测等优点。近年来,随着检测技术与设备的不断改进,该技术在复杂样品中的检测应用能力得到了进一步提升。本文系统介绍了ATP生物发光法的原理和局限,从技术和设备层面综述了近年来创新性ATP生物发光技术和新兴检测设备,总结了该技术及设备在复杂样品细菌检测方面的应用现状,以期为提高复杂样品细菌检测能力提供参考。

生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷

目的建立检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量的生物发光方法,并利用该方法检测红细胞和不同再灌注处理心肌细胞内ATP的含量. 方法制备所需测定的细胞ATP提取液,采用荧光素-荧光素酶检测系统检测ATP含量,ATP的含量与系统中所发射的光子数成正比,发光强度越大,ATP含量越高,通过检测发光强度计算ATP的含量.结果通过对红细胞内ATP含量的测定,确定了测定细胞内ATP的最佳反应条件:pH=7.8,温度20～25 ℃,荧光素酶浓度3.0 mg/ml .利用确定的最佳条件对各种不同处理的心肌细胞内ATP浓度进行了检测,ATP检测结果与心肌功能的实验观察结果符合. 结论生物发光方法测定ATP含量方法简单、结果可靠,可以在短时间内得到检测结果,是一种检测细胞内ATP的有效方法.

基于生物发光的高灵敏度三磷酸腺苷检测研究

在微生物检测和食品安全控制中需要对低浓度的三磷酸腺苷(ATP)做出快速准确的测定,基于ATP光学反应原理,设计了一种微量光学反应池,结合萤火虫素-萤火虫素酶发光技术,构建了一种用于现场检测的高灵敏度ATP光学传感器系统。传感器响应波长为550nm,ATP生物发光反应适宜pH为7.8,在优化实验条件下,发光强度和ATP浓度在对数坐标下呈线性相关,检出限可达1×10-16mol/LATP,检测样品仅需30μL,测量时间60s。这种检测方法具有响应范围宽,测试简便,快速可靠等特点,适用于ATP现场快速检测,具有很好的应用前景。

三磷酸腺苷生物发光法分析莪术油等中药抑制肝、胃癌细胞增殖活性的研究

目的研究抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌细胞株SMMC7721、胃癌细胞株NKM45作用后的ATP水平,探讨药物对瘤细胞增殖活性的抑制作用。方法应用三磷酸腺苷生物发光法(ATP-BLA法)测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与肝、胃癌细胞作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶(5-FU)的作用进行比较。结果莪术油、华蟾素、龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明显下降(P<0.05～P<0.01);与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异(P>0.05)。结论应用ATP-BLA研究抗癌中药对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,对于筛选抗肿瘤药物具有广阔的应用前景。

三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌体外化疗药物敏感试验中的应用

为探讨新鲜卵巢癌标本化疗药物敏感试验结果与临床疗效的相关性 ,采用三磷酸腺苷生物发光法(ATP- CVA) ,用液闪计数仪对 2 5份新鲜卵巢癌组织标本进行药敏检测。结果显示 :在 ATP浓度为 10 - 9～ 10 - 5mol/ m l时 ,ATP标准品与发光计数值呈一线性关系 ,Y=1.48X+ 15 .0 3,相关系数为 0 .996 3;所检测的 2 5份标本中成功 2 2份 ,试验的可评价率为 88% ,其敏感性为 85 .7% (12 / 14) ,特异性为 83.3% (5 / 6 ) ,阳性预测值为 92 .3%(12 / 13) ,阴性预测值为 71.4% (5 / 7) ,总的预测准确率为 85 % (17/ 2 0 )。上述结果表明 ,本药敏试验结果的预测准确性较高 ,与临床疗效之间具有很好的相关性 ,值得进行更深入的研究。

三磷酸腺苷生物荧光检测技术在清洗消毒效果评价中的应用及研究进展

三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测技术是一种快速微生物检测方法,具有简便、灵敏度高和实时检测等优点,被广泛应用于多种行业微生物检测。该研究对ATP生物荧光检测技术在各类复用器械清洗及医疗环境消毒效果评价中的应用进行综述,为ATP生物荧光检测技术的使用及推广提供参考。

三磷酸腺苷生物发光法快速测定食品中细菌的含量

建立了测定食品中细菌三磷酸腺苷（—帅）的生物发光分析方法。生物发光原理基于萤光素酶、虫萤光素、氧气、ATP和Mg^2＋的催化氧化反应。产生的光信号强度与ATP含量成一定关系。考察了各种物理化学参数对反应的影响。反应体系最优化条件：pH7．4、牛血清白蛋白（BSA）浓度为1．0g／L和室温反应。方法检出限为1．0×10^12mol／L。线性范围1．0×10^-7-1．0×10^-11mol／L，分析时间30min，批内变异和批间变异分别小于4％和5％。研究了部分食品中细菌检测的样品前处理方法，应用于糕点和饮料样品中细菌的测定，加标回收率范围为82．1％～115％。检测结果与传统培养方法检测结果相关性良好。

三磷酸腺苷生物发光法在白血病细胞株K_(562)化疗药物敏感实验中应用探讨

目的:探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP鄄BLA法)在白血病细胞药敏实验中的可行性。方法:采用ATP鄄BLA法,用液体闪烁记数仪检测ATP标准品以及白血病细胞株K562在不同细胞浓度、药物浓度、培养时间下的荧光发光值。结果:ATP标准品浓度、K562细胞浓度的对数与荧光发光值的对数具极好的线性关系(P<0.001);药敏实验时,结束细胞培养的时间以第4d为宜,药物浓度的选择以1×PPC为最佳。结论:ATP鄄BLA法在白血病药敏试验中是可行的,有一定的临床应用价值,值得进一步研究。

三磷酸腺苷生物荧光法联合环节质量管理在低温器械手工清洗效果监测及改进中的作用

目的采用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生物荧光法联合环节质量管理方法,探讨手工清洗的低温灭菌器械的清洗效果,发现问题并进行改进。方法便利抽样选取2015年7-9月在手术室低温器械清洗间需人工清洗的手术器械共32件,于清洗前和清洗干燥后进行物表取样,结构复杂部位同时进行细缝取样,读取相对光单位(relative light unit,RLU)值,判断手工清洗效果;根据环节质量管理中发现的问题对清洗不合格的情况进行分析,改进后再次测定清洗效果。结果绝大部分低温器械经人工清洗后生物残留明显降低,但结构复杂的器械生物残留仍比较严重。改进清洗流程并加强医辅人员的培训,对清洗不合格的器械进行再次清洗,结果显示,改进清洗方法后所有器械的生物残留明显小于改进前,且均已合格。结论 ATP生物荧光法能提供手术器械清洗效果的实时监测及持续改进的作用,并提高手工清洗器械的环节质量控制。

三磷酸腺苷(ATP)荧光微生物检验技术在医务人员手表面微生物检验中的应用效果

目的 探究在医务人员手表面微生物检验中将三磷酸腺苷荧光微生物检验方法进行应用的临床效果。方法 该次研究选取2019年12月—2020年12月50名该院医务人员为主要研究对象,对其手表面的微生物进行检测,应用三磷酸腺苷荧光微生物检验技术,将诊断结果与采用微生物培养法的检验结果进行对比。结果 金黄色葡萄球菌群数增加时,ATP含量增加。微生物培养法中,其菌数为(21.22±2.65)cfu/cm^(2),在采用A TP生物法检验后,得出ATP含量为(1.82±0.32)amol/cm^(2),ATP生物检验法洗手前后合格率则分别为26.00%和60.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=11.791,P=0.001),检验方法均有效。结论 在对医务人员的手卫生污染情况进行检测过程中,将三磷酸腺苷荧光微生物检验技术进行应用,其临床应用价值显著,检验准确率较高,可进行推广使用。

三磷酸腺苷生物荧光液闪测定法检测活细胞计数

为建立一种检测活细胞数的方法，作者采用三磷酸腺苷（ATP）生物荧光液闪测定法检测小鼠纤维瘤细胞株L929。ATP标准曲线工作范围为10－9～10－5mol／ml，相关系数r＝0．9963（P＜0．001）；当活细胞数在3×102～106个／ml时与发光计数值有良好的线性关系，r＝0．9922（P＜0．001），变异系数CV＝1％～3％。用ATP生物荧光液闪测定法检测活细胞数灵敏、简便、准确、重复性好，用液闪计数仪即可完成测定，有较大的实用价值。

基于信号增强的电化学发光适配体传感器检测三磷酸腺苷

基于三磷酸腺苷(ATP)适配体与ATP分子作用后可以显著增强电化学发光信号的性能,研究了一种用于ATP含量检测的电化学发光适配体(ECL-aptamer)传感器。通过电沉积方法获得纳米金电极。3′端标记联吡啶钌发光分子的探针DNA通过5′端修饰的巯基自组装到纳米金电极表面,然后与5′端标记二茂铁分子的ATP核酸适配体互补杂交,形成刚性线形的双链DNA,由此构建的传感器产生较弱的电化学发光(ECL)信号。该传感器在ATP溶液中孵化后,由于ATP分子与ATP适配体强的特异性结合,使得适配体分子与探针DNA分子解离,从电极表面脱落进入溶液,此时电极表面的探针DNA在强电解质溶液中可以形成发卡型的茎环结构,产生显著增强的ECL信号。ECL信号强度与ATP浓度的对数值呈线性关系,线性范围为10.0~1.0×105 pmol/L,相关系数r=0.9959,检测限为5.0 pmol/L。该传感器的灵敏度与检测范围高于目前已报道的结果,显示出了ATP检测的应用潜力。

三磷酸腺苷后处理通过RISK信号通路和mKATP减轻兔心肌缺血再灌注损伤

目的探讨再灌注损伤挽救激酶(RISK)信号通路和线粒体ATP敏感性钾通道(mKATP)在三磷酸腺苷(ATP)后处理减轻兔心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法选择60只雄性大耳白兔随机为缺血再灌注损伤组(IRI组)、ATP后处理组、PI3K抑制剂Wortmannin+ATP后处理组(Wortmannin+ATP组)、ERK1/2抑制剂PD98059+ATP后处理组(PD98059+ATP组)、选择性mKATP抑制剂5-HD+ATP后处理组(5-HD+ATP组),每组12只,建立心肌缺血再灌注模型。采用依文思蓝和四氮唑蓝双重染色测定心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达。结果 ATP后处理组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数明显低于IRI组(P<0.01)。Wortmannin+ATP组、PD98059+ATP组和5-HD+ATP后处理组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数与IRI组比较差异无统计学意义。Western blot检测显示,ATP后处理组p-Akt、p-ERK1/2表达水平明显高于IRI组(P<0.05)。结论 ATP后处理可通过缩小心肌梗死面积和减少心肌细胞凋亡发挥对缺血再灌注心肌的保护作用,其机制可能与RISK信号通路及mKATP有关。

三磷酸腺苷发光法在耐多药结核分枝杆菌诊断中的运用

目的通过与罗氏固体培养法比较,评估三磷酸腺苷发光法检测耐多药结核分枝杆菌的可行性。方法采用三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法同时检测和分析149例临床分离的结核分枝杆菌。结果三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法的一致率为92.6%(138/149),差异无统计学意义(χ2=0.57,P=0.45)。三磷酸腺苷发光法检测时间为(6.6±2.1)d,明显快于传统罗氏固体培养法的28 d(t=422.7,P<0.001)。结论与常规检测方法比较,三磷酸腺苷发光法具有快速、简便、准确性高等优点,对耐多药结核患者的早期诊断和耐药结核分枝杆菌流行的控制有很大帮助,适合实验室开展。

食品企业清洗效果评价及三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测应用介绍

一、食品企业清洗概况 清洗：借助物理、化学或生物的作用去除物体表面的污染物或覆盖层，从而使其恢复原表面状况的过程称为清洗。表面未经清洗的情况下，消毒剂是不能正常发挥作用的。

三磷酸腺苷生物荧光法评价达芬奇机器人手术器械清洗效果对照研究

目的探讨三磷酸腺苷生物荧光法在达芬奇机器人手术器械清洗中的应用,并比较不同评价方法的差异。方法采用简单随机抽样方法,于2016年4—11月份选取消毒供应中心完成清洗但并未消毒灭菌的达芬奇机器人手术器械作为研究对象。采用10倍放大镜目测法、3M蛋白残留测试棒法及三磷酸腺苷生物荧光法分别检测达芬奇机器人穿刺套管、机械臂的清洗效果。结果放大镜法、残留蛋白法和三磷酸腺苷生物荧光法分别检测清洗后机器人穿刺套管45件,合格率分别为93%、87%和82%(χ~2=2.557,P=0.278);检测清洗后机器人机械臂60件,合格率分别为97%、88%和85%(χ~2=4.815,P=0.090);差异均无统计学意义(P>0.05)。三磷酸腺苷生物荧光法对2类器械不合格检出率均最高。结论三磷酸腺苷生物荧光法可作为检测达芬奇机器人手术器械清洗效果的有效方法。

浅谈三磷酸腺苷生物荧光法在消毒供应中心的应用

目的:利用监测手段加强消毒供应中心(CSSD)院内感染控制管理,以降低院内感染率。方法:通过检测生物物质三磷酸腺苷(ATP)的含量,评估环境、医疗器械及手卫生的洁净度。结果:CSSD是院内感染的重点控制科室,医疗器械是由CSSD引起院内感染的直接祸首,故加强其清洁区、无菌区环境是CSSD管理的重点,也是院内感控重点部位。结论:运用新的技术方法,即ATP生物荧光法在CSSD加强环境、医疗器械及手卫生的洁净度三方面的监测,可有效降低院内感染率。