金属有机框架Cu@Sc-MOF纳米酶对5'-三磷酸腺苷的比色/荧光检测

通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪(DAP),并在570 nm产生特征荧光发射峰(激发波长为390 nm)。由于5’-三磷酸腺苷(ATP)与Cu2+络合,抑制了Cu@Sc-MOF的催化活性,使得652 nm处的吸光度和570 nm处的荧光强度减弱,基于Cu@Sc-MOF的类过氧化物酶活性,构建了一种用于检测ATP的比色/荧光双模式光谱法。比色和荧光分析法的线性范围分别为2.50~40.00μmol/L和1.00~22.50μmol/L,检出限(LOD)分别为0.60和0.27μmol/L。将上述比色/荧光双模式分析法用于肝癌细胞HepG2细胞裂解液中ATP的检测,加标回收率分别为92.0%~101%和93.2%~97.9%,具有良好的应用前景。

三磷酸腺苷生物荧光检测技术在清洗消毒效果评价中的应用及研究进展

三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测技术是一种快速微生物检测方法,具有简便、灵敏度高和实时检测等优点,被广泛应用于多种行业微生物检测。该研究对ATP生物荧光检测技术在各类复用器械清洗及医疗环境消毒效果评价中的应用进行综述,为ATP生物荧光检测技术的使用及推广提供参考。

建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法

目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的ABCG2核苷酸序列号NM_001032919.1及内参GAPDH核苷酸序列号NM_001195426.1,借助Primer premier 5.0软件设计PCR引物。提取猕猴新鲜肾组织的总RNA,并反转录合成cDNA。接着,利用PCR引物进行实时荧光定量PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析ABCG2的mRNA相对表达水平。结果PCR产物测序结果显示,扩增的ABCG2和GAPDH核苷酸序列与NCBI上猕猴的序列同源性分别为90.91%和91.14%。ABCG2和GAPDH的扩增效率均达到80%~120%,实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2接近1。结论本研究建立的检测猕猴ABCG2 mRNA实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。

氧化石墨烯-DNA纳米探针用于三磷酸腺苷的检测与药物递送

癌细胞内三磷酸腺苷(ATP)浓度异常与肿瘤发生发展过程密切相关,因此,快速、准确地检测细胞内外ATP水平具有重要意义。盐酸阿霉素(DOX)是一种广泛使用的抗癌药物,能嵌入DNA碱基对,并通过抑制DNA复制和转录诱导细胞凋亡。氧化石墨烯(Graphene oxide, GO)由于具有毒性低、比表面积大和易功能化,可以有效、稳定地负载DNA纳米探针进入细胞等优点而被广泛应用。然而,复杂环境中的生物分子容易通过物理吸附竞争性结合到GO表面,导致假阳性信号。基于此,提出了一种新型的GO-DNA纳米探针,并将其应用于ATP的检测与抗癌药物DOX靶向递送。以ATP的核酸适配体与其互补链杂交形成双链DNA(dsDNA),并通过G-C碱基对负载DOX,利用互补链延伸的poly A序列吸附到GO表面构建了GO-dsDNA-DOX纳米探针,能极大程度地降低复杂环境中物理吸附引起的干扰,减少假阳性信号产生。ATP与适配体特异性结合会导致DOX释放,根据其荧光“off-on”实现ATP的定量分析,DOX荧光强度与ATP含量在0.08~8.0 mmol/L范围内呈现良好的线性关系,线性方程为IF=3.0897c+129.08,检测限(3σ/k)为0.059 mmol/L,且方法具有良好的选择性和抗干扰能力。细胞毒性及荧光成像结果表明,负载DOX的纳米探针在人乳腺癌细胞(MCF-7)内有明显的药物释放,显著诱导细胞凋亡。该研究建立了一种免修饰、简单和快速的ATP含量检测分析方法,并利用癌细胞内高浓度ATP实现靶向药物递送,降低了对正常细胞的毒副作用,为癌症的治疗提供了新思路。

三磷酸腺苷生物荧光法联合环节质量管理在低温器械手工清洗效果监测及改进中的作用

目的采用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生物荧光法联合环节质量管理方法,探讨手工清洗的低温灭菌器械的清洗效果,发现问题并进行改进。方法便利抽样选取2015年7-9月在手术室低温器械清洗间需人工清洗的手术器械共32件,于清洗前和清洗干燥后进行物表取样,结构复杂部位同时进行细缝取样,读取相对光单位(relative light unit,RLU)值,判断手工清洗效果;根据环节质量管理中发现的问题对清洗不合格的情况进行分析,改进后再次测定清洗效果。结果绝大部分低温器械经人工清洗后生物残留明显降低,但结构复杂的器械生物残留仍比较严重。改进清洗流程并加强医辅人员的培训,对清洗不合格的器械进行再次清洗,结果显示,改进清洗方法后所有器械的生物残留明显小于改进前,且均已合格。结论 ATP生物荧光法能提供手术器械清洗效果的实时监测及持续改进的作用,并提高手工清洗器械的环节质量控制。

水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷

利用荧光光谱研究了三磷酸腺苷(ATP)与水溶性阳离子荧光共轭聚合物的相互作用,发现加入ATP后,聚合物的荧光强度被显著猝灭,且猝灭程度与ATP的加入量成正比,据此建立了测定ATP的方法。荧光光谱的激发波长选择395nm,发射波长为521nm,激发狭缝宽度为10.0nm,发射狭缝宽度为10.0nm。在0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液(pH=7.4)中,测定ATP的线性范围为8.0×10-8～1.0×10-5mol/L;检出限为2.0×10-8mol/L;回收率在93.6%～105.6%之间;相对标准偏差在2.2%～6.9%之间。本方法用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定,获得满意结果。

三磷酸腺苷生物荧光液闪测定法检测活细胞计数

为建立一种检测活细胞数的方法，作者采用三磷酸腺苷（ATP）生物荧光液闪测定法检测小鼠纤维瘤细胞株L929。ATP标准曲线工作范围为10－9～10－5mol／ml，相关系数r＝0．9963（P＜0．001）；当活细胞数在3×102～106个／ml时与发光计数值有良好的线性关系，r＝0．9922（P＜0．001），变异系数CV＝1％～3％。用ATP生物荧光液闪测定法检测活细胞数灵敏、简便、准确、重复性好，用液闪计数仪即可完成测定，有较大的实用价值。

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备(英文)

背景:合并肝硬化肝病变患者接受大体积肝脏切除或其后进行肝移植手术可能造成较高的并发症发生率和死亡率。目前公认的肝功能评估方法是Child分级方法,包括了3个临床指标和2个生化指标,但它不能直接评估肝细胞的功能状态。目的:应用生物荧光法定量分析三磷酸腺苷作为肝功能监测手段的可行性。设计、时间及地点:病例对比观察,于2005-01/2006-03在中山大学附属第二医院完成。对象:选择肝部分切除患者32例,术中根据肝脏形态学改变分为3组:正常组7例,组织病理学没有明显硬化发现;大结节肝硬化组9例;微小结节型肝硬化组16例。方法:所有患者均于术前进行常规及肝生化检查,包括谷草转氨酶、总胆红素等。无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数,提取三磷酸腺苷并检测其含量。主要观察指标:换算出每个肝细胞的三磷酸腺苷含量,进一步将三磷酸腺苷含量与术前肝功能指标进行相关性分析。结果:①大结节肝硬化组单位肝细胞三磷酸腺苷含量明显高于正常组及小结节肝硬化组(P=0.0001,0.004)。小结节肝硬化组三磷酸腺苷含量也明显高于正常组(P=0.04)。②单位肝细胞三磷酸腺苷含量与术前血浆谷草转氨酶活性、总胆红素含量呈显著正相关(r=0.6093,P=0.0002;r=0.6145,P=0.0002)。结论:肝细胞三磷酸腺苷水平检测可以评估肝实质储备功能,也可用于预测肝切除手术风险及选择肝移植手术时机。

一种测定三磷酸腺苷二钠的新荧光光度法

该文利用荧光光谱和吸收光谱研究了三磷酸腺苷二钠（ATP）与依诺沙星（ENX）和Tb^3＋的相互作用。依诺沙星与Tb^3＋形成二元络合物发射出位于545nm处的特征荧光，加入三磷酸腺苷二钠（ATP）后，体系的荧光强度显著增强，且增强的荧光强度与ATP的加入量成正比，据此建立了荧光分光光度法测量ATP的方法。实验测得，ATP的线性范围是2．00～20．0μmol·L^-1检出限为6．83×10^-8mol·L^-1。研究了共存物质的影响和Tb^3＋ -依诺沙星与三磷酸腺苷二钠的相互作用机理。该法成功地用于样品中ATP的测定。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2与痛风病关联的病理机制研究进展

痛风病是指与高尿酸血症、尿酸盐沉积(关节、肾脏)等尿酸代谢紊乱密切相关的进展性代谢疾病,根据其病理进展特点和临床表现,其病程可分为高尿酸血症阶段、尿酸盐沉积阶段、痛风性炎症阶段。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)是高通量的尿酸转运体,既参与了机体尿酸外排的肠-肾途径,又与痛风性炎症密切相关。通过切入ABCG2,对痛风病病理机制研究进展进行综述,以期为临床痛风病的深入研究及防治提供新的见解。

三磷酸腺苷对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探讨三磷酸腺苷(ATP)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞焦亡的影响。方法将大鼠肺泡巨噬细胞随机分为Control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;应用双抗体夹心法测定标本白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平,应用Western blotting检测GSDMD、GSDMD-N、Caspase-1、NLRP3蛋白表达;用TUNEL染色法检测各组细胞焦亡情况。结果Control组、LPS组、ATP组、LPS+ATP组的大鼠肺泡巨噬细胞IL-1β水平比较,经析因设计的方差分析,结果:①LPS的效应差异有统计学意义(P<0.05);②ATP的效应差异有统计学意义(P<0.05);③LPS和ATP交互效应差异有统计学意义(P<0.05)。各组Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3蛋白相对表达量比较,经析因设计的方差分析,结果:①LPS的效应差异有统计学意义(P<0.05);②ATP的效应差异有统计学意义(P<0.05);③LPS和ATP交互效应差异有统计学意义(P<0.05)。Control组、LPS组、ATP组、LPS+ATP组的大鼠肺泡巨噬细胞焦亡率比较,经析因设计的方差分析,结果:①LPS的效应差异有统计学意义(P<0.05);②ATP的效应差异有统计学意义(P<0.05);③LPS和ATP交互效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论ATP对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞的焦亡具有一定的促进作用,为深入探讨细胞焦亡的作用及其机制提供了初步的实验依据和理论基础。

三磷酸腺苷生物荧光法评价达芬奇机器人手术器械清洗效果对照研究

目的探讨三磷酸腺苷生物荧光法在达芬奇机器人手术器械清洗中的应用,并比较不同评价方法的差异。方法采用简单随机抽样方法,于2016年4—11月份选取消毒供应中心完成清洗但并未消毒灭菌的达芬奇机器人手术器械作为研究对象。采用10倍放大镜目测法、3M蛋白残留测试棒法及三磷酸腺苷生物荧光法分别检测达芬奇机器人穿刺套管、机械臂的清洗效果。结果放大镜法、残留蛋白法和三磷酸腺苷生物荧光法分别检测清洗后机器人穿刺套管45件,合格率分别为93%、87%和82%(χ~2=2.557,P=0.278);检测清洗后机器人机械臂60件,合格率分别为97%、88%和85%(χ~2=4.815,P=0.090);差异均无统计学意义(P>0.05)。三磷酸腺苷生物荧光法对2类器械不合格检出率均最高。结论三磷酸腺苷生物荧光法可作为检测达芬奇机器人手术器械清洗效果的有效方法。

三磷酸腺苷生物荧光法检测肿瘤药敏的价值

目的 :探讨三磷酸腺苷生物荧光法 (ATP TCA)评估肿瘤药物敏感性和指导术后化疗的价值。方法 :以ATP TCA法在体外分别检测了 5 9例 5种实体瘤细胞对 6种化疗药物的耐药率和敏感率。结果 :5 FU、MMC、DDP等 6种常用化疗药物的耐药率 >75 %。胃肠肿瘤的化疗药物敏感性差异无显著意义 ,泰素、羟基喜树碱、丝裂霉素和吡柔比星对肝癌的敏感率分别为 91 7%、6 0 0 %、5 0 0 %和 4 2 8% ;诺维本、博莱霉素对食管癌敏感率为 85 7%、4 2 9%。结论 :ATP TCA法用于检测肿瘤化疗药物敏感性较为可靠 。

浅谈三磷酸腺苷生物荧光法在消毒供应中心的应用

目的:利用监测手段加强消毒供应中心(CSSD)院内感染控制管理,以降低院内感染率。方法:通过检测生物物质三磷酸腺苷(ATP)的含量,评估环境、医疗器械及手卫生的洁净度。结果:CSSD是院内感染的重点控制科室,医疗器械是由CSSD引起院内感染的直接祸首,故加强其清洁区、无菌区环境是CSSD管理的重点,也是院内感控重点部位。结论:运用新的技术方法,即ATP生物荧光法在CSSD加强环境、医疗器械及手卫生的洁净度三方面的监测,可有效降低院内感染率。

三磷酸腺苷生物发光法在提高复杂样品细菌检测能力方面的应用研究进展

微生物污染对食品、医药、卫生等领域造成严重危害,因此,开发微生物快速灵敏检测技术至关重要。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)生物发光法相比于其他微生物检测技术,具有检测速度快、可实时检测等优点。近年来,随着检测技术与设备的不断改进,该技术在复杂样品中的检测应用能力得到了进一步提升。本文系统介绍了ATP生物发光法的原理和局限,从技术和设备层面综述了近年来创新性ATP生物发光技术和新兴检测设备,总结了该技术及设备在复杂样品细菌检测方面的应用现状,以期为提高复杂样品细菌检测能力提供参考。

温度控制的泛素/三磷酸腺苷相互作用的电喷雾质谱研究

通过基于温度控制的蛋白质小分子相互作用电喷雾质谱(PSMI-ESI-MS)技术探究了模式蛋白质泛素(Ubi)与重要的生物活性小分子三磷酸腺苷(ATP)体系.在室温条件下,泛素和ATP以1μmol/L∶50μmol/L浓度比混合溶液的电喷雾质谱图和自然状态下泛素的电荷特征一致,主要形成了+5,+6,+7电荷态下的3类峰.ATP主要和+5,+6的泛素分别形成摩尔比为1∶1和1∶2的复合物,而+7的泛素-ATP复合物实验中相对较少,说明低电荷态时的泛素对ATP有更强的亲合力.通过不同浓度比泛素-ATP的质谱行为分析,发现浓度维度上的结合状态没有显著差异,而在不同温度的泛素及泛素-ATP复合物的电荷分布情况有明显差异.计算得到的结合亲和力随温度的增大而增大,说明去折叠后的泛素和ATP的相互作用增强.通过热力学进一步分析了不同浓度ATP对泛素折叠和去折叠吉布斯自由能的影响,发现ATP的存在增加了泛素去折叠所需的能量,因此增强了泛素的稳定性.根据泛素和ATP在温度维度下的电喷雾质谱分析得到了化学计量比、结合亲和力和吉布斯自由能等多维度的信息,为蛋白质分析,尤其是与小分子相互作用的研究提供了参考.

应用三磷酸腺苷荧光检测复用管腔器械清洗效果的评价

目的探讨应用三磷酸腺苷(ATP)荧光检测复用管腔器械清洗效果的检测效率。方法从回收的复用管腔器械中随机抽取50件,在流动水下充分冲洗,接着应用自动灌流器进行标准操作程序(SOP)清洗处理后,依次用放大镜目测法、ATP荧光检测法进行清洗效果评价,比较两种不同检测方法不合格检出率、检测速度情况。结果放大镜目测和ATP检测不合格分别为2件(4%)和7件(14%),两者比较有显著性差异(P<0.05);ATP检测法单件检测速度为(1.02±0.32)min,放大镜目测速度为(1.96±0.48)min,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论应用ATP荧光检测复用管腔器械清洗,不合格检出率高,检测速度快,是提高工作效率、主动控制污染事故发生的有效方法。

阿尔茨海默病患者血清三磷酸腺苷结合盒转运蛋白7、基质金属蛋白酶9、脂联素水平与认知功能相关性分析

目的:探究阿尔茨海默病(AD)患者血清三磷酸腺苷结合盒转运蛋白7(ABCA7)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、脂联素(ADPN)水平与认知功能的相关性。方法:将120例AD患者纳入AD组,另选取80例认知功能正常者纳入正常组,比较两组受试者一般资料;并根据临床痴呆评定量表(CDR)将AD组分为轻度组(47例)和中重度组(73例),比较两组患者血清指标(ABCA7、MMP-9、ADPN)水平及认知功能[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)及简易精神状态量表(MMSE)];采用Pearson相关分析法分析AD患者血清ABCA7、MMP-9、ADPN水平与MoCA、MMSE评分的相关性。结果:AD组ABCA7、MMP-9水平高于正常组,ADPN水平低于正常组(均P<0.05);轻度组ABCA7、MMP-9水平低于中重度组,ADPN水平、MoCA评分及MMSE评分均高于中重度组(均P<0.05);AD患者MoCA评分、MMSE评分分别与血清ABCA7、MMP-9水平呈负相关,与ADPN水平呈正相关(均P<0.05)。结论:AD患者血清ABCA7、MMP-9水平升高,ADPN水平下降,且血清ABCA7、MMP-9水平与AD患者认知功能呈负相关,ADPN水平与AD患者认知功能呈正相关。

三磷酸腺苷生物荧光检测系统应用管理

目的:通过介绍三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测系统的应用背景、技术原理及设备引进中需参考的重要技术参数,了解ATP生物荧光检测系统使用的必要性,帮助医院选择合适的ATP生物荧光检测系统。方法:介绍ATP生物荧光检测系统的应用背景、技术原理及检测准确性相关的因素,给出合理建议。结果:提高了设备管理部门对ATP生物荧光检测系统的认识。结论:ATP生物荧光检系统作为一种新型的检测系统,以高灵敏度、简单快捷的操作,成为医院感染控制的有效技术手段。了解其技术原理及检测准确性相关的因素,能帮助设备管理部门选择最适合临床使用的ATP生物荧光检测系统。

应用生物荧光法检测三磷酸腺苷评估肝细胞功能储备

目的:探索生物荧光定量分析三磷酸腺苷作为评估肝实质功能的可行性。方法:选择2005-2006年入住我院肝胆胰脾外科的32例肝病患者(26例为恶性肝病,6例为良性肝病)作为研究对象,男27例(84.38%),女5例(15.62%),中位年龄53.87(范围33-76)岁。所有患者均于术前进行谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)常规肝生化检查。术中根据肝脏形态学改变将患者进行分组,分别为正常组7例(21.88%);大结节硬化组9例(28.12%);小结节硬化组16例(50.00%)。无菌收集肝手术切除病变旁肝组织标本,经过酶解消化、细胞悬浮、培养、离心、肝细胞计数、ATP的提取和检测等步骤,最后换算出每个肝细胞ATP含量检测;进一步将ATP数据与术前肝功能其它指标(AST、TBIL)进行相关分析。结果:ATP含量在大结节硬化组明显较正常组增高[(1224.66±373.37)mol/cellvs(438.66±186.97)mol/cell,P<0.01],较小结节组也明显升高[(1224.66±373.37)mol/cellvs(697.39±402.24)mol/cell,P<0.01];微小结节硬化组较正常组也明显升高[(697.39±402.24)mol/cellvs(438.66±186.97)mol/cell,P<0.05]。所有患者单个肝细胞ATP(mole/cell)水平与术前生化检查AST(R=0.60933,P<0.01)及TBIL(R=0.61458,P<0.01)呈正相关。结论:肝细胞ATP检测水平有可能作为评估肝实质储备功能的指标,ATP水平可能用于预测手术风险及术后恢复过程。