人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ基因的克隆与表达

目的 研究人三磷酸鸟苷酸环化水解酶Ⅰ (GCHⅠ )基因在多巴胺代谢过程中的作用。 方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA ,以RT PCR法扩增GCHⅠcDNA ,克隆于PGEM T easy载体中 ,测序正确后再构建真核表达载体 ,转染猴肾成纤维细胞系COS7,原位杂交检测其表达。 结果 RT PCR扩增出 90 4bp的cDNA ,并成功构建真核表达载体pCI neo GCHⅠ ,原位杂交证实其在COS7表达阳性率为 70 %～ 80 %。 结论 GCHⅠ有望用于帕金森病的基因治疗。

三磷酸鸟苷酶活化蛋白对ras原癌基因恶性转化的抑制作用

三磷酸鸟苷酶活化蛋白(GTPase-activating protein,GAP)在各种细胞内几乎都存在,分子量约为110 K,其羧基端相当于分子量40 K的部分具有催化活性,可促使ras原癌基因(野型)的产物ras蛋白水解其所结合的三磷酸鸟苷(GTP)。ras原癌基因的产物为p 21,位于细胞膜内面,在肿瘤生成与生长调控中,

法舒地尔对心力衰竭大鼠心室重塑干预与Rho GTPases活性的作用

目的:以升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠为研究对象,观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对心室重塑和心肌组织Rho家族的小分子鸟苷酸三磷酸酶(Rho GTPases)活性的影响,并探讨两者之间的关系。方法:将雌性心力衰竭Wistar大鼠随机分2组(n=10),法舒地尔(5 mg·kg^(-1))组和模型组,同时制备假手术组;模型组、假手术组用等量生理盐水每日2次腹腔注射。测定治疗4 wk后组织Rho GTPases活性。结果:法舒地尔组左室重量-体重比明显下降(P<0.01),心室重构减轻,心肌组织Rho GTPases活性降低(P<0.01)。结论:Rho激酶抑制剂法舒地尔抑制左室重塑与心肌组织Rho GTPases活性有关。

第119位天门冬氨酸单一取代转变Ha-Rasp21的核苷酸特异性研究

测定了在第１１９位的天门冬氨酸被天门冬酰胺取代了的Ｃ－Ｈａ－Ｒａｓ的特异性。调节性的ＧＴＰ酶（三磷酸鸟苷酸酶）家族中的许多成员均有保守的ＮＫＸＤ顺序模式。第１１９位天门冬氨酸即是这一保守顺序模式中的一个残基。本研究发现Ｄ１１９Ｎ突变使Ｈａ－Ｒａｓ的核苷酸特异性从鸟嘌呤更改为黄嘌呤。此观察结果直接支持了下列结论：在天门冬氨酸残基的侧链和鸟嘌呤环之间的氢键形成对于核苷酸的结合的特异性起了最重要的。

补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血患者67例

目的:观察补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的临床疗效及骨髓单个核细胞(BMNC)中Ras同源基因家族成员(Rho)-鸟苷酸三磷酸酶(GTP)相关酶类如细胞分裂周期蛋白(CDC42),Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物(Rac)以及Rho家族成员A(Rho A)的蛋白表达。方法:将134例CAA患者按随机数字表法分为试验组67例和对照组67例,另设20名健康志愿者作为正常对照组。试验组采用补髓生血颗粒治疗,对照组采用再造生血片治疗,两组疗程均为6个月。观察治疗前后临床疗效、中医症状积分、中医证候疗效、外周血、骨髓增生程度变化,采用Western-blot方法检测CAA患者治疗前后BMNC中Rho-GTP相关酶类(CDC42,Rho A,Rac)的蛋白表达。结果:试验组临床疗效及中医证候疗效均优于对照组(均P<0.05);经治疗后,两组中医症状平均积分及外周血均明显改善(P<0.05),试验组中医症状平均积分及外周血白细胞计数(WBC)及血红蛋白含量(HGB)的改善优于对照组(均P<0.05),两组血小板计数(PLT)改善程度无显著性差异;两组骨髓象改善比较无显著性差异;两组治疗前CDC42,Rho A,Rac的相对蛋白含量表达均低于正常对照组(均P<0.05),治疗后两组CDC42,Rho A和试验组中Rac的相对蛋白含量表达明显升高(均P<0.05),而对照组中Rac的表达较治疗前无明显变化,两组治疗后CDC42,Rho A,Rac仍低于正常对照组(均P<0.05),且试验组CDC42及Rac的表达改善优于对照组。结论:补髓生血颗粒治疗CAA疗效显著,且一定程度上能改善CAA患者的骨髓造血功能。CAA患者BMNC中Rho A,CDC42及Rac的蛋白均表达异常,提示Rho GTP酶异常表达可能与CAA发病相关,补髓生血颗粒可能通过调节Rho-GTP相关酶类CDC42,Rho A,Rac的表达来改善造血干细胞与造血微环境调节进而改善其骨髓造血功能。