三羟基异黄酮对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及侵袭作用的影响

目的观察5,7,4’-三羟基异黄酮(Genistein)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及侵袭作用的影响,探讨其抗纤维化作用的机制。方法以25、50、100μmol/L浓度Genistein处理体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,3H-脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成,Transwell小室趋化运动模型检测细胞侵袭能力。结果Genistein作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成作用降低,细胞的侵袭能力显著下降。随着药物浓度增加,对细胞的这种抑制作用也增强。结论Genistein具有体外抗瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化与侵袭的作用,可成为治疗病理性瘢痕及纤维化疾病的有效药物。

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。

三羟基异黄酮诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的:探讨三羟基异黄酮(Genistein)诱导体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及相关机制。方法:体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,不同浓度Genistein作用后,MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:在Genistein作用下,增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制;细胞凋亡率增加,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);Bcl-2的表达下调、Bax、Caspase-3表达增加。结论:Genistein可通过诱导凋亡抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡调控基因的表达有关。

三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用的研究

目的观察三羟基异黄酮(Genistein)对人增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响,探讨其抑制组织纤维化的作用机制。方法体外培养人HS成纤维细胞,分别以25、50、100μmol/L浓度的Genistein进行处理,流式细胞术检测体外培养HS成纤维细胞中α-SMA阳性细胞率;Western blot检测细胞α-SMA蛋白的表达;观察HS成纤维细胞三维培养组织的收缩情况。结果在Genistein作用下,α-SMA阳性细胞率及α-SMA蛋白表达与对照组比较均降低(P<0.05);其中50、100μmol/L组与对照相比较具有非常显著性差异(P<0.01)。HS成纤维细胞三维培养组织持续收缩,加入Genistein作用后,组织块的收缩现象减弱,第48、72小时,50μmol/L与100μmol/L组收缩指数(CI)显著低于对照组(P<0.01),呈现明显的时效-剂量关系。结论Genistien能抑制HS成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化,可能是其抗组织纤维化的作用机制之一。

三羟基异黄酮对日本比目鱼(牙鲆)性腺分化的影响(英文)

[目的] 研究5,7,4’-三羟基异黄酮(genistein,GEN)对日本比目鱼(牙鲆)生殖腺性分化的作用,并在基因表达上探索其分子机制。[方法]运用日本比目鱼随饲养水温决定其性别的生物学特性,在鱼卵孵化后第30天到第100天性分化敏感期内,在27 ℃水温下饲养,会使幼鱼分化成雄性。同时,分别给予幼鱼投食GEN 10和100 μg/g饲料进行喂养染毒,直到第100天(青年期)和第300天(成年期),分别对各组比目鱼样本做病理组织切片,判断其性别和雌雄比例,并通过原位杂交和RT-PCR分析,探索它们的作用机制。[结果] GEN对27 ℃水温饲养下的比目鱼幼鱼有雌性化诱导作用,两组成年比目鱼雌性分别有不同的百分比:10 μg/g组为46.7%,100 μg/g组为96.7%,其诱导效应呈现一定剂量依赖性;比目鱼幼鱼出生后第100天时原位杂交实验显示,P450芳香化酶的mRNA在各组的雌鱼卵巢中有明显表达,但在雄鱼精巢中未见表达;而MIS(苗勒氏管抑制物质)的mRNA在各组的雌鱼卵巢中不表达,而在雄鱼精巢中能见到非常明显的表达。RT-PCR实验显示,在雌鱼卵巢中P450芳香化酶的mRNA表达被诱导,而MIS基因表达被抑制,进一步证实了原位杂交的结果。[结论] GEN对日本比目鱼的生殖腺性分化有雌性化诱导作用,其分子机制很可能是通过诱导P450芳香化酶基因表达和抑制MIS的基因表达从而发挥雌激素样干扰作用的。

三羟基异黄酮抑制乳腺癌细胞生长的质谱研究

目的初步研究低浓度的三羟异黄酮对人乳腺癌细胞系MCF-7的生长抑制作用,并通过蛋白质组学方法探讨其分子机制。方法MCF-7细胞在含25μmol/L三羟异黄酮的培养液中分别培养1～7d后,进行MTT实验,测得生长曲线;采用顺序抽提的方法将细胞总蛋白分级为水溶性和疏水性两个组分,并应用双向电泳方法对其进行分离,以获取蛋白质的表达谱;通过软件分析,找出表达量存在显著差异的蛋白质点;再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)与生物信息学相结合的方法对差异表达蛋白点进行分析鉴定。结果25μmol/L的三羟异黄酮对MCF-7细胞具有明显的抑制作用,并在4d后观察到细胞凋亡现象的出现;双向电泳图谱分析表明无论是水溶性蛋白质还是疏水性蛋白都取得了很好的分离,并成功鉴定出24种差异表达蛋白,其中5种下调,19种上调。结论这些蛋白质的功能涉及了细胞的生长调节、应激反应、形态和凋亡等多个方面。

抑制SIRT1表达促进三羟基异黄酮诱导HeLa细胞凋亡的实验观察

目的利用HeLa宫颈癌细胞株探讨去乙酰化酶SIRT1是否参与三羟基异黄酮的抗癌作用。方法以培养的HeLa细胞为研究对象,实验分对照组(A组)、三羟基异黄酮组(B组)、SIRT1抑制剂Splitomicin处理组(C组)及Splitomicin+三羟基异黄酮组(D组)。采用MTT法测定不同浓度三羟基异黄酮对HeLa细胞生长的抑制情况;Hoechst 333258荧光染色检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期分布情况;实时定量PCR及Western blot检测各组细胞内SIRT1表达水平变化。结果 B、D组细胞抑制率、细胞凋亡率、细胞周期分布比较均有统计学差异,A、B组细胞内SIRT1 mRNA及蛋白表达率比较均有统计学差异(P<0.05或<0.01)。结论抑制SIRT1可提高三羟基异黄酮对HeLa细胞的杀伤作用,SIRT1可能是三羟基异黄酮抗肿瘤作用的靶点。

4、5、7-三羟基异黄酮对人舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力的影响

目的观察4、5、7-三羟基异黄酮(Genistein)对舌癌细胞株Tca8113体外迁移侵袭能力及金属基质蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法以细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测Genistein对Tca8113细胞侵袭的影响;采用明胶酶谱法及凝胶图像分析系统检测Genistein对胞外分泌MMP-2蛋白的影响;采用WesternBlot及细胞免疫组织化学检测Genistein对胞内MMP-2蛋白表达的影响。结果Genistein可明显抑制Tca8113细胞的迁移侵袭,Genistein组与对照组之间有明显的差异(P<0.01);Genistein可使细胞外分泌的活性MMP-2及MMP-2表达下调,活性MMP-2下调18.75%,MMP-2下调28.31%;WesternBlot及细胞免疫组织化学均检测到Genistein组与对照组相比能降低胞内MMP-2蛋白的表达。结论Genistein可以明显抑制Tca8113舌癌细胞株的体外迁移侵袭能力,并减少Tca8113胞内和胞外分泌的MMP-2蛋白的表达。

4',5,7-三羟基异黄酮对蛛网膜下腔出血大鼠的神经保护和抗氧化作用研究(英文)

目的探讨4',5,7-三羟基异黄酮对蛛网膜下腔出血(SAH)后的神经保护作用。方法对大鼠单次枕大池注血模型分别以10 mg/kg、50 mg/kg浓度腹腔注射4',5,7-三羟基异黄酮,观察大鼠脑水肿、血脑屏障(BBB)的通透性、氧化应激和血红素氧合酶-1(HO-1)的变化情况。结果 4',5,7-三羟基异黄酮可以减轻SAH后脑水肿,降低BBB通透性、缓解氧化应激状态及减少HO-1的表达。结论 4',5,7-三羟基异黄酮可能是通过提高内源性抗氧化酶的表达和抑制自由基的产生,从而在SAH中产生神经功能保护作用。

三羟基异黄酮对兔缺血心肌的保护作用

目的探讨三羟基异黄酮(GST)对缺血/再灌注(I/R)心肌的保护效果及可能机制。方法结扎雄兔冠脉左前降支建立心肌I/R模型:心肌缺血40 min,然后再灌注2 h。分4组:Sham组:冠脉不结扎;I/R组;GST+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1.0 mg/kg GST;Vehicle+I/R组:心肌缺血前5 min静脉注入1 mL二甲基亚砜。检测血清乳酸脱氢酶及肌酸激酶活性,再灌注结束后通过Evans蓝-TTC染色判断心肌梗死范围,TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果与I/R组及Ve-hicle+I/R组相比,GST+I/R组心肌梗死范围、心肌酶活性及细胞凋亡指数均显著降低(P<0.01),而前两组之间无显著差异。结论心肌缺血前给予GST能有效地减轻心肌I/R损伤,抗凋亡和减少心肌细胞坏死是其发挥效应的两条途径。

4’,5,7三羟基异黄酮抑制骨髓瘤基质细胞bcl-2,bcl-xl,CyclinD1,ICAM-1和IL-6基因表达

目的:研究4’,5,7三羟基异黄酮(Genistein)对人多发骨髓瘤(MM)基质细胞增殖和bcl-2,bcl-xl,CyclinD1,ICAM-1和IL-6基因表达的影响。方法:体外培养人多发骨髓瘤基质细胞,依据浓度梯度分别给予Genistein,用噻唑蓝染色法(MTT)观察Genistein对骨髓瘤基质细胞增殖的影响;10,20,40 mg.L-1Genistein与溶剂对照组分别作用骨髓瘤基质细胞48 h后,半定量RT-PCR法检测骨髓瘤基质细胞bcl-2,bcl-xl,CyclinD1,ICAM-1和IL-6基因表达。结果:Genistein作用骨髓瘤基质细胞48 h,随浓度增加,细胞增殖逐渐下降;10,20,40 mg.L-1Genistein处理组bcl-2,bcl-xl,CyclinD1,ICAM-1,IL-6基因mRNA的表达呈浓度依赖性下降,与溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:Genistein可能通过下调骨髓瘤基质细胞bcl-2,bcl-xl,CyclinD1,ICAM-1和IL-6基因mRNA的表达,抑制骨髓瘤基质细胞的生长。

三羟基异黄酮对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨三羟基异黄酮(Genistein)对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及其机制.方法以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM3为研究对象,用细胞基质粘附实验检测Genistein对肝癌细胞基质粘附能力的影响,Transwell小室侵袭运动实验检测Genistein对肝癌细胞侵袭、运动能力的影响.免疫细胞化学法检测肝癌细胞MMP-2蛋白表达.结果 Genistein能抑制肝癌细胞对FN和Marigel胶的粘附;Genistein能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭运动;Genistein处理组肝癌细胞MMP-2蛋白表达较对照组降低.结论 Genistein能抑制肝癌细胞的侵袭转移,其机制之一可能在于Genistein能抑制肝癌细胞MMP-2蛋白表达.

三羟基异黄酮对肝纤维化大鼠血清和肝组织中TGF-β_1表达的影响

目的观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型,在实验的第10周末采血和取肝组织,检测血清中ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原,HE染色法观察肝组织改变,免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1表达。结果血清学检测显示Genistein能明显降低肝纤维化大鼠ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原水平,病理组织学观察发现Genistein能明显改善肝纤维化大鼠肝组织结构和肝纤维化,免疫组织化学检测表明肝组织TGF-β1表达量与模型组比较显著降低。结论 Genistein对CCl4诱导的肝纤维化大鼠有较好的保护作用,对TGF-β1表达的影响可能是其作用机制之一。

三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组。应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15μmol.L-1和20μmol.L-1 GST处理组与5μmol.L-1和10μmol.L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01)。结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关。

三羟基异黄酮对豚鼠右心室乳头肌的正性肌力作用

目的观察三羟基异黄酮（GST）对离体豚鼠右心室乳头肌收缩功能的影响，并探讨其作用机制。方法将离体豚鼠右心室乳头肌置于装有K-H液的灌流肌槽中，待平衡后，加入各种药物观察乳头肌收缩活动的变化。结果GST和异丙肾上腺素相似，可增强豚鼠右心室乳头肌的收缩活动，GST（1-100μmol·L^-1）的作用具有明显的剂量依赖性；普萘洛尔（1μmol·L^-1）和异搏定（0.5μmol·L^-1）可明显阻断异丙肾上腺素（1μmol·L^-1）的正性肌力作用，但对GST（50μmol·L^-1）的心肌收缩增强效应无明显改变；GST（1、10μmol·L^-1）对细胞外液Ca^2＋浓度升高而诱发的心肌收缩力增强也无明显影响；它莫西芬（1μmol·L^-1）及SQ22536（1μmol·L^-1）可明显减弱GST的正性肌力作用，bpV（1μmol·L^-1）也可明显阻断GST的这种作用。结论GST可增强心肌收缩活动，具有正性肌力作用，其作用与心肌细胞膜上的β肾上腺素能受体、钙通道激活、雌激素受体无关，可能与cAMP的胞内信号转导以及酪氨酸激酶途径有关。

三羟基异黄酮联合放疗对人肺腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的观察三羟基异黄酮(Genistein)联合放疗对人肺腺癌细胞A549增殖凋亡及其Ape1/Ref1蛋白的影响。方法 1组单用0、10、30、60、90μmol/L的Genistein处理A549细胞48 h,另1组用同样浓度的Genistein预处理24 h后予以直线加速器放疗8 Gy,继续培养24 h后用噻唑蓝比色法(MTT)检测各组活细胞数,确定最适Genistein联合放疗的浓度。用流式细胞仪检测对照组、单纯放疗组(IR 8 Gy)、单纯Genistein组(GEN 30μmol/L)、Genistein+IR组(GEN30μmol/L+IR 8 Gy)的细胞凋亡;采用Western blot法检测各组细胞中Ape1/Ref1蛋白表达。结果 30、60、90μmol/L的Genistein联合放疗比单用相应浓度的Genistein处理细胞增殖抑制率高(P<0.05),但低浓度10μmol/L联合放疗与单纯放疗比较差异不明显[(26.67±1.26)%vs(24.70±0.72)%,P=0.102]。IR组、Genistein+IR组早期凋亡率较对照组明显增高[(30.88±7.63)%、(42.98±1.46)%vs(6.80±0.98)%,P<0.05],加药组较对照组无明显统计学差异[(12.96±4.99)%vs(6.80±0.98)%,P=0.143)];与对照组、单纯放疗组、单纯加药组比,Genistein+IR组中Ape1/Ref1的表达明显下调。结论三羟基异黄酮可增加放疗对A549细胞的增殖抑制作用,可能与减少Ape1/Ref1蛋白的表达有关。

三羟基异黄酮对卵巢去势大鼠延髓神经元保护作用的研究

目的 :观察植物雌激素三羟基异黄酮 (GST)对卵巢去势大鼠延髓神经元的保护作用。 方法 :行双侧卵巢切除术的雌性大鼠造模 ,手术 1 0天后皮下注射GST 2 0 0 μg/ (kg·d)治疗。连续给药 6周后 ,取动物脑的延髓部位检测丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,并作超薄切片电镜分析。 结果 :GST组与去卵巢对照组 (OVX组 )比较 ,MDA含量减少、SOD活性增加 (P <0 .0 1 ) ,形态学观察OVX组延髓神经元超微结构有明显的病理变化 ,而GST组能明显改善神经元的损伤 ,维持神经元结构的完整性。 结论 :GST对延髓神经元有明显的保护作用 。

大豆三羟基异黄酮对大鼠急性胰腺炎的影响

目的探讨大豆提取物三羟基异黄酮(Genistein)对大鼠急性胰腺炎的影响。方法 45只SD大鼠随机分为3组:3组均采用精氨酸腹腔注射诱导建立急性胰腺炎模型,对照组造模后经口胃内灌注大豆蛋白;模型组经口胃内灌注生理盐水;实验组经口胃内灌注三羟基异黄酮。观察大鼠72 h内生存与死亡情况;检测存活大鼠24 h、48 h、72 h血清淀粉酶含量,计算胰腺组织病理指数评分。结果大豆蛋白组6 h死亡率高达53.3%;三羟基异黄酮组6 h累计死亡率仅为6.7%,至24 h达死亡高峰(33.3%),较大豆蛋白组明显延后,两组死亡率比较差异有统计学意义(P<0.01)。三羟基异黄酮组存活大鼠24 h、48 h、72 h血清淀粉酶活性显著低于大豆蛋白组,差异有统计学意义(1830 U/L±325 U/L vs 2667 U/L±262 U/L,P<0.01;1744 U/L±321 U/L vs 2935 U/L±301 U/L,P<0.01;1319 U/L±338 U/L vs 2725 U/L±235 U/L,P<0.05);3组胰腺炎症病理指数差异有统计学意义。结论经胃灌注三羟基异黄酮可以延缓急性胰腺炎大鼠死亡高峰,提高大鼠生存率,抑制血清胰腺淀粉酶活性,可能通过降低胰腺炎症反应而发挥重要作用。

4′,5,7-三羟基异黄酮抗骨髓瘤细胞增殖机制的研究

目的:为了研究4′,5,7-三羟基异黄酮(genistein,Gen)是否能抑制人多发性骨髓瘤(multipule myeloma,MM)细胞株XG1的增殖,研究Gen处理骨髓瘤细胞后B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-xl、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞间黏附因子1(ICMA-1)基因表达变化及骨髓瘤细胞中核转录因子κB(NF-κB)表达的变化。方法:利用体外培养人MM细胞株XG1,依据剂量梯度分别给予Gen,用噻唑蓝染色法(MTT)观察不同药物浓度的Gen对MM细胞的增殖影响;5、10、15μg/mLGen与溶剂对照组分别作用XG1细胞48h后,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测XG1细胞bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因表达;应用5μg/mLGen处理XG1细胞,用免疫组织化学法观察Gen处理前后细胞内NF-κB的表达情况。结果:Gen作用XG1细胞48h,随浓度增加,细胞增殖逐渐下降;5、10、15μg/mLGen处理组mRNA的表达均低于溶剂对照组(P<0.05),伴随Gen处理浓度逐渐增加,bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达逐渐下降;Gen能够使NF-κB在XG1细胞内重新分布,胞浆内出现NF-κB表达,胞核内NF-κB表达下降。结论:Gen可能通过下调骨髓瘤细胞核中NF-κB的表达来抑制bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达,进而抑制骨髓瘤细胞的增殖、黏附、转移。

4′,5,7-三羟基异黄酮抑制肿瘤细胞核因子-κB活化的作用机制

核因子κB(NF-κB)是一类能特异性地识别结合DNA的Rel类蛋白质二聚体转录因子。在静息细胞中,NF-κB与抑制性蛋白IκBs结合形成复合物,并被滞留于细胞质中而处于非活化状态;当细胞受到各种胞内外刺激时,IκBs被迅速地降解,NF-κB得以释放并进入细胞核,从而发挥其转录调节功能。NF-κB通过调控众多靶基因的转录表达而在免疫、炎症反应、细胞增殖与凋亡及肿瘤发生等许多生理学过程中发挥重要作用。4′,5,7-三羟基异黄酮(genistein)是大豆异黄酮(soybeanisoflavones)的成分之一,是大豆中一类重要非营养素成分,近年来研究显示其具有显著的防治癌症效果。