家蝇幼虫血淋巴不同Tricine-SDS-PAGE分析方法比较

目的用3种不同的三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。方法分别用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法,分离胶中有尿素组分的三层胶方法,分离胶中有甘油组分的三层胶方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。结果家蝇幼虫血淋巴中含有丰富的小分子多肽,用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法不能有效分离分子量在<10.700 kDa的小分子蛋白或多肽;分离胶中有尿素组分的三层胶方法虽能清晰分离家蝇幼虫淋巴中<16.949kDa的小分子蛋白或多肽,但对其分子量的测定可能不够准确;而分离胶中有甘油组分的三层胶方法既能很好分离>14.4 kDa的蛋白,也能清晰分离<8.159 kDa的小分子多肽,并能较准确的反映其分子量大小,用于分析家蝇幼虫血淋巴效果较好。结论分析家蝇幼虫血淋巴应采用分离胶中有甘油组分的三层胶的电泳方法。

抗菌肽Cecropin A基因原核表达及表达产物的鉴定(英文)

背景:Cecropins是一种具有抗菌活性的小分子蛋白质。采用真核细胞表达或人工合成Cecropins,效率低、成本高。目的:克隆表达家蝇抗菌肽基因Cecropin A,并对其重组表达产物进行鉴定。方法:依据GenBank中家蝇Cecropin A基因序列设计特异性引物,用RT-PCR从家蝇幼虫组织中扩增Cecropin A成熟肽基因,将其克隆入原核表达载体pET32a中,与表达载体中的Thioredoxin基因构成融合基因,并转化E.coli BL21。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达。采用家蝇幼虫血淋巴免疫家兔获得抗血清;Western blot和三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定诱导的重组蛋白质。结果与结论:经异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导,E.coliBL21可表达Cecropin A成熟肽,兔抗家蝇幼虫血清、三羟甲基氨基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot结果证实表达产物为Cecropin A成熟肽。说明使用原核表达系统可以获得天然Cecropin A成熟肽。