抗家蚕核多角体病毒(BmNPV)即刻早期蛋白基因的三联核酶的设计和性质

以ＢｍＮＰＶＩＥ基因为靶序列，通过计算机设计了３个切割靶序列不同位点的锤头状核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）（Ｒ４７、Ｒ２０８和Ｒ６８７）。为了提高核酶的切割效率，把３个核酶串联在一起形成三联的核酶（Ｒ４２６）。为使单个核酶之间不相互干扰，改变了茎区Ⅱ的碱基序列。核酸二级结构计算机模拟显示，这种改变非常成功。为了减少长的侧翼序列对Ｒ４２６的影响，将Ｒ４２６基因光隆到ｐＲＧ５２３质粒的ｃｉｓ－核酶之间，限制性内切酶线性化后，用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录，得到具有短的侧翼序列的Ｒ４２６分子。转录和切割实验表明，Ｒ４２６两侧的ｃｉｓ－核酶的切割效率非常高，释放出的Ｒ４２６能够特异地切割转录和合成的靶序列。说明我们设计的三种核酶的“催化中心”能使３个单价核酶不相互干扰，各自独立发挥切割作用，也不影响其两端的ｃｉｓ－核酶的切割活性。这与实验设计的预期结果完全一致。