三聚氰胺与三聚氰酸混合物对小鼠睾酮生成和调控的影响

[目的]本文旨在研究三聚氰胺与三聚氰酸混合物对小鼠睾酮生成和合成调控的影响。[方法]选40只4周龄雄性ICR小鼠随机分成4组,每组10只,分为三聚氰胺(MA)与三聚氰酸(CA)混合物(MC)低剂量组(MA、CA各1 mg·kg^(-1),MC2)、中剂量组(MA、CA各5 mg·kg^(-1),MC10)、高剂量组(MA、CA各25 mg·kg^(-1),MC50)和对照组(玉米油灌胃),连续灌服28 d;放射免疫法测定血清中睾酮含量,荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测与睾酮合成相关的蛋白(St AR、P450scc、P450 17α和17β-HSD)及其基因的表达变化,免疫组织化学方法检测睾丸间质细胞数量。[结果]MC10和MC50组小鼠血清中睾酮含量显著低于对照组(P<0.05);与对照组相比,混合物处理各组的St AR mRNA和17β-HSD mRNA表达量明显下调(P<0.05),MC10和MC50组的P450 17αmRNA表达量以及MC50组的P450scc mRNA表达量也明显降低(P<0.05);睾酮合成相关的蛋白表达与mRNA水平变化一致,混合物处理各组的17β-HSD蛋白表达明显低于对照组,MC50组的P45017α蛋白表达以及MC10和MC50组的St AR及P450scc蛋白表达也明显低于对照组(P<0.05);MC50和MC10组的小鼠睾丸间质细胞数量极显著低于对照组(P<0.01)。[结论]三聚氰胺与三聚氰酸混合物减少了间质细胞的数量并下调了睾酮合成相关蛋白的表达,导致血清中睾酮水平降低。

三聚氰胺与三聚氰酸混合物对小鼠肾脏的影响

40只21日龄SPF雄性昆明小鼠随机分为4组,三聚氰胺(MA)和三聚氰酸(CA)按1∶1比例混合染毒,分别给予低剂量(0.6 mg.kg-1)、中剂量(3 mg.kg-1)和高剂量(15 mg.kg-1),连续30 d灌胃,玉米油作溶剂,对照组灌胃等量的溶剂玉米油。最后一次染毒后24 h,眼静脉采集小鼠血液,无痛处死小鼠。分离小鼠血清,测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)含量,对肾脏组织进行光镜和电镜观察。肾脏功能指标测定结果表明:与对照组相比,中、高剂量组小鼠血清肌酐、尿素氮含量显著升高(P<0.05或P<0.01);HE及PAS法观察结果显示:低、中剂量组小鼠肾脏肾小管管腔轻微扩张,中剂量组小鼠肾脏局部出现溶解的结晶,高剂量组小鼠肾脏肾小管中出现晶体,肾小管管腔极度扩张,小管上皮细胞扁平化,刷状缘破损,间质不同程度炎性细胞浸润,纤维结缔组织增生等病理改变。

三聚氰胺和三聚氰酸混合物所致肾结石的实验研究

目的评价枸橼酸和金钱草治疗三聚氰胺-三聚氰酸所致大鼠肾脏结石和急性肾功能损害的实验效果。方法40只sD幼龄鼠被随机分成4组。正常对照组（NC组）10只，常规喂养。三聚氰胺-三聚氰酸加自来水组（Mc组）、三聚氰胺-三聚氰酸加枸橼酸治疗组（CA组）、三聚氰胺-三聚氰酸加金钱草治疗组（HL组）各10只，三聚氰胺三聚氰酸悬浮液每日400／400mg／kg连续灌胃3d后，分别用自来水2mL／d、枸橼酸溶液每日1g／kg、金钱草溶液每日1g／kg连续灌胃10d。评价各组大鼠的平均体重、平均双侧肾重、肾重／体重、肾功能、肾脏组织病理学结果。结果MC组、CA组和HL组在三聚氰胺-三聚氰酸喂养期间平均体重进行性下降；停止喂养后分别用自来水、枸橼酸和金钱草溶液灌胃处理，平均体重逐渐上升。处理结束后3组平均体重显著低于NC组，平均双侧肾重、肾重／体重均明显高于NC组，肾功能明显受损，肾脏中均存在大量晶体。但MC组、CA组和HL组三组间平均体重、平均双侧肾重、肾重／体重、肾功能比较无统计学意义。结论三聚氰胺-三聚氰酸在大鼠肾脏中产生不溶性晶体并导致急性肾功能损害；短期的枸橼酸和金钱草治疗不能促进晶体排出或溶解晶体，不能改善肾功能。

狐狸三聚氰胺和三聚氰酸混合物急性中毒及蓄积毒性

通过口服不同剂量的三聚氰胺和三聚氰酸混合物人工染毒,以雄性狐狸血浆、尿液、肝脏和肾脏中的代谢动力学和组织病理变化为研究指标,考察三聚氰胺和三聚氰酸对狐狸急性中毒及蓄积毒性的影响。结果显示,染毒后的狐狸出现食欲低下、骚动等临床症状,在血浆、尿液、肝脏和肾脏中检测到毒物的残留;同时,病理切片证实,毒物对肝脏血管和肾小球造成病例损伤。

气相色谱-质谱法快速测定牛奶中的三聚氰胺和三聚氰酸

建立了气相色谱-质谱法测定牛奶中三聚氰胺和三聚氰酸含量的分析方法。样品经二乙胺-乙腈-水溶液超声提取,离心,滤液用氮气吹干后加入硅烷化衍生试剂衍生,气相色谱-质谱测定,选择离子模式监测,外标法定量。在0.025~2mg/kg范围内,目标物的峰面积与其质量浓度的线性关系良好（r〉0.98）;在0.5,1.0和2.5mg/kg的添加水平,三聚氰胺和三聚氰酸的平均回收率分别为84%~87%和75%~102%,相对标准偏差（RSD）分别为5.7%~11.7%和4.9%~7.8%;三聚氰胺和三聚氰酸的检出限（LOD）分别为0.05mg/kg和0.10mg/kg。结果表明：该方法简便、快速、灵敏、准确,适合牛奶中三聚氰胺和三聚氰酸的确证和定量测定。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定牛奶和奶粉中的二氰二胺、三聚氰胺和三聚氰酸

建立了一种超高效液相色谱一串联质谱法测定牛奶和奶粉中二氰二胺（DCD）、三聚氰胺（MEL）和_三聚氰酸（CY）的分析方法。样品用5％（质量分数）三氯乙酸水溶液提取，无需净化和浓缩，用Acquity UPLC HSST3色谱柱（50mm×2．1mm，1．8μm）分离，以乙腈和乙酸铵作为流动相进行梯度洗脱，电喷雾正、负离子（ESI°）模式同时电离，多反应监测模式进行检测。结果表明：在5．0～200．0μg／L范围内线性关系良好（r≥0．995）？牛奶中3种化合物在0．02、0．10、0．20mg／kg的添加回收率为50．0％～105．8％，相对标准偏差（RSD，n=6）为4．2％～13．6％；奶粉中3种化合物在0．05、0．10、0．20mg／kg的添加回收率为78．0％～115．0％，RSD（他=6）为2．7％～7．5％。牛奶中方法的定量限（信噪比为10）为0．02mg／kg，奶粉中方法的定量限为0．05mg／kg。该方法简单、快速、灵敏、准确，适合于牛奶、奶粉等乳及乳制品中DCD、MEL和CY的快速、高灵敏的分析检测：

三聚氰胺及其同系物三聚氰酸的生物学效应和毒理学研究进展

三聚氰胺因为最近的奶粉事件成为食品公共安全的焦点,所以针对三聚氰胺及其同系物三聚氰酸的生物学效应和毒理学研究作一综述,主要从理化性质、代谢、毒理机制,以及检测等方面进行总结。三聚氰胺和三聚氰酸本身的急性毒性作用很低,体内为惰性代谢,大部分以原型从尿液排出,大剂量应用时主要对肾脏产生毒性,产生结石,急性肾衰和结石相关的膀胱肿瘤,但同时可能对心脏等肾脏以外的器官产生毒性作用。它们的毒性具有对动物物种的选择性,相对于小鼠、猫和大鼠的肾脏毒性反应更大,而且在雄性动物更加明显。在检测上,HPLC/MS/MS正在成为主要的检测手段。尽管对这一类化合物的生物学效应和毒理学特性已有一定的理解,但仍然存在一些问题,比如,为何肾脏成为结晶产生的主要器官,对肾脏以外器官/系统的作用如何,体内同时存在的三聚氰胺及其同系物可能的累加和协同作用机制等等,亟待进一步从生理、病理、生化实验方面作出解答,为未来生物毒理研究和研制出解决措施提供科学依据。

固相萃取-亲水相互作用色谱/串联质谱法同时测定食品中三聚氰胺和三聚氰酸

建立了固相萃取-亲水相互作用色谱/串联质谱同时测定食品中三聚氰胺和三聚氰酸残留量的方法。采用乙腈和水提取试样中残留的三聚氰胺和三聚氰酸,正己烷脱脂,提取液经亲水性键合硅胶和阳离子交换树脂复合填料柱(MCT柱)净化。采用亲水相互作用色谱柱进行分离,质谱采用正、负离子切换模式电离,多反应监测模式检测,同位素内标法定量。三聚氰胺和三聚氰酸在10～2 500μg/L范围内呈线性相关,相关系数(r)均大于0.99,定量限分别为25和50μg/kg。本方法在动物源性食品、植物源性食品、乳及乳制品等不同样品中的三聚氰胺和三聚氰酸高、中、低3个添加水平的回收率分别在70.0%～129.6%和70.0%～128.6%之间,相对标准偏差分别在1.4%～23.3%和2.8%～18.7%之间。该方法可满足食品中三聚氰胺和三聚氰酸同时定量测定的需要。

应用亲水作用色谱检测鸡蛋和肉中三聚氰胺及三聚氰酸二酰胺

应用亲水作用色谱(HILIC)对从市场上购买的鸡蛋和肉中的三聚氰胺及三聚氰胺降解产物三聚氰酸二酰胺进行了检测。采用的色谱柱为ZIC-HILIC柱,流动相为3 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 6.9)-乙腈(20∶80,v/v),流速为0.8 mL/min,检测波长为220 nm。在该体系下,三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的保留时间适中,与样品中的内源性物质有良好的分离。样品经0.1%磷酸提取,偏磷酸及乙腈沉淀蛋白质和糖类物质,以及P-SCX固相萃取柱净化。三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺在0.4～40 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,样品定量限(按信噪比(S/N)不小于10计)为2 mg/kg,在2～10 mg/kg添加水平下的平均回收率为80%～105%,相对标准偏差小于10%。该方法具有良好的分离选择性,可用于鸡蛋和肉中三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的同时检测。

三聚氰胺与三聚氰酸联合灌胃致大鼠泌尿系统损害研究

目的研究三聚氰胺及三聚氰酸联合应用导致泌尿系统损害的机制。方法将24只SD大鼠随机分成A组(对照组)和B组(干预组),每组12只,A组大鼠每只每天以蒸馏水2ml灌胃一次,B组每天以30mg/kg三聚氰胺和30mg/kg三聚氰酸联合灌胃一次。用代谢笼收集前3d的24h尿液,进行24h尿量、pH值和24h尿酸排泄量检测及尿沉渣涂片检查;分别于第4、31天灌胃前采集每组6只大鼠的血液标本检测血肌酐、尿素氮、尿酸;取双侧肾脏用外科显微镜观察后,制作快速冰冻切片及石蜡切片(HE染色)观察肾脏病理改变及结石晶体形成情况。肾脏冰冻组织切成5μm薄片后,用红外显微光谱仪分析晶体成分。结果A组大鼠血、尿生化及肾脏病理检查均无明显异常。B组大鼠出现少尿、尿pH值偏低、尿酸排泄量减少(P<0.05),血肌酐、血尿素氮、血尿酸升高(P<0.05);尿沉渣涂片发现特异性晶体;肾脏体积变大、结构模糊,肾组织中有许多淡黄色颗粒沉积;病理切片发现许多淡黄色、半透明同心圆形晶体,主要集聚于肾小管中,造成肾小管明显扩张、上皮受损等病理改变,经红外显微光谱鉴定,为三聚氰胺氰尿酸盐。结论三聚氰胺和三聚氰酸联合灌胃大鼠的肾脏内会形成一种不溶于水的三聚氰胺氰尿酸盐晶体,堵塞肾小管造成肾脏损害甚至急性肾功能衰竭,并可能与尿酸等成分一起诱发泌尿系结石。

亲水作用色谱串联质谱同时检测食品接触产品中三聚氰胺和三聚氰酸单体迁移量

建立一种亲水作用色谱串联质谱技术同时检测食品接触产品中三聚氰胺与三聚氰酸单体迁移量的方法。样品采用水、体积分数4%乙酸溶液、体积分数10%乙醇溶液、异辛烷和橄榄油模拟物进行浸泡。在优化色谱及质谱条件下三聚氰胺和三聚氰酸能很好分离,且分别在1～100ng/mL和2～200ng/mL范围内,峰面积和质量浓度线性关系良好。在50ng/mL添加回收实验结果表明,三聚氰胺和三聚氰酸的平均回收率分别为86.2%～134.0%和78.9%～156.0%,相对标准偏差分别为6.44%～17.93%和5.95%～11.78%。该法简便、快速、准确,可同时测定食品接触产品中三聚氰胺与三聚氰酸单体迁移量。

三重四极杆气质联用法分析乳粉中三聚氰酸和三聚氰胺

建立三重四极杆气相色谱质谱联用分析乳粉中三聚氰酸和三聚氰胺的方法。样品以甲醇提取,利用衍生化试剂BSTFA-TMCS(99:1,V/V)进行衍生化处理、优化仪器条件、考察基质效应,利用三重四极杆气质联用的多反应监测(MRM)技术,对三聚氰酸和三聚氰胺衍生物进行定性定量分析,以三聚氰酸衍生物离子对m/z345>215、m/z345>330离子对进行定性,以m/z345>215进行定量;以三聚氰胺衍生物离子对m/z342>171、m/z342>327离子对进行定性,以m/z342>327进行定量。方法在0.010～0.500mg/L范围内呈良好的线性关系。方法分析三聚氰酸和三聚氰胺的检测限分别为0.016、0.003mg/kg,精密度为4.5%～8.6%、3.9%～6.2%和回收率分别为84.0%～102.0%、88.5%～104.0%。为乳粉中三聚氰酸和三聚氰胺的检测提供了准确可靠的方法。

三聚氰胺联合三聚氰酸经口28d染毒对雌性SD大鼠体重与肾脏的影响

[目的]为临床上三聚氰胺和三聚氰酸伤害的预防和治疗提供科学依据。[方法]使用三聚氰胺和三聚氰酸共同对雌性SD大鼠进行亚急性经口染毒试验,研究三聚氰胺和三聚氰酸联合作用下经口28 d染毒对雌性SD大鼠体重与肾脏的影响。[结果]三聚氰胺与三聚氰酸联合染毒会造成雌性SD大鼠体重增加受到抑制,肝、脾、肺、肾及膀胱脏器系数改变,肾脏发生结晶现象,部分肾小管与肾小球结构破坏。[结论]三聚氰胺与三聚氰酸联合经口28 d染毒可引起雌性SD大鼠体重增长的抑制与肾脏的结晶。

三聚氰胺与三聚氰酸对小鼠肾脏损伤及其机理的研究

旨在探讨三聚氰胺及其同系物三聚氰酸对肾脏组织的损伤及其损伤机理,为防制其对动物泌尿器官的危害提供理论依据。120只雄性SD小鼠随机分为6组,每组20只,体质量20～30g。对照组蒸馏水灌胃,染毒组采取隔天灌胃方式,A组三聚氰胺50mg·kg-1体质量,B组三聚氰酸50mg·kg-1体质量,C、D、E组三聚氰胺与三聚氰酸混合物(三聚氰胺+三聚氰酸等量混合)高、中、低剂量分别按50、10、2mg·kg-1体质量灌胃,持续30d。测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(CRE),肾脏组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,观察肾组织形态学,TUNEL法检测肾脏组织细胞凋亡,RT-PCR法检测肾脏组织Bcl-2、Bax、Cyt-c基因的相对表达以及免疫组化法检测相关蛋白的表达。三聚氰胺与三聚氰酸混合物能引起明显的肾脏组织细胞损伤,呈剂量相关性,表现为BUN和CRE升高,SOD活性降低,MDA含量升高,组织形态学可见明显的肾小管损害;混合组凋亡率明显增高,其中混合高剂量组与对照组相比,差异极显著(P<0.01),Bax、Cyt-c表达均高于对照组,而Bcl-2则低于对照组。三聚氰胺与及其与三聚氰酸混合物可以通过脂质过氧化和线粒体通路介导凋亡共同作用引起肾损伤。

用三聚氰胺生产中排放的固体废物制备三聚氰酸

对三聚氰胺生产企业产生的固体废物利用进行了研究。研究发现 ,在自生压力下可以由三聚氰胺生产过程中排放出的固体废弃物酸解制备三聚氰酸 ;添加酸式硫酸盐在低硫酸浓度下水解几乎能达到高硫酸浓度下水解的效果 ;固体废弃物酸解时 ,反应温度升高、反应时间延长和NaHSO4用量增加都会提高三聚氰酸的收率 ;酸解过程中 ,反应温度对收率有显著影响 ,而反应时间、硫酸氢钠的用量对收率影响不显著 ;在 160℃、NaHSO4用量为 10 0g时反应 4h ,三聚氰酸的收率可达 67%

液相色谱-串联质谱法测定鸡组织中的三聚氰胺和三聚氰酸

通过对提取溶剂、净化方法及色谱质谱条件的优化建立鸡组织样品中的三聚氰胺和三聚氰酸同时测定的HPLC-MS/MS法。样品经乙腈水溶液(70:30,V/V)超声提取,正己烷脱脂,7000r/min离心后取上清液与乙腈(1:1,V/V)混匀,10000r/min离心沉淀蛋白,过滤后无需净化即可上机测定,大大缩短了样品处理时间。使用MRM模式检测和同位素内标稀释法定量,进一步提高了方法的准确性和定量线性。在1～500ng/mL范围内,目标物的峰面积与其质量浓度的线性关系良好(R2>0.999);在0.1、1、5mg/kg的添加水平,鸡组织样品三聚氰胺回收率为87.76%～107.89%,三聚氰酸回收率为87.31%～106.05%,相对标准偏差(RSD)分别为0.58%～2.78%和1.26%～4.33%;三聚氰胺和三聚氰酸的检测限(LOD)分别为4ng/g和2ng/g。结果表明,该方法简便、快速、准确,适合鸡组织中三聚氰胺和三聚氰酸的确证和定量测定。

三聚氰胺及其同系物三聚氰酸毒性的研究概况

三鹿奶粉事件再一次向社会提出了公共食品安全问题,其毒性如何,作用机制是怎样的,都值得很好研究。早在上个世纪80年代美国出现了一系列猫狗食品中毒事件,是三聚氰胺做得崇,就其毒性和机制国内外已有学者做了一些研究,现综述如下。

三聚氰胺联合三聚氰酸经口28d染毒对雌性SD大鼠血液生化指标的影响

[目的]探讨三聚氰胺联合三聚氰酸经口28 d染毒对雌性SD大鼠血液生化指标的影响。[方法]用三聚氰胺和三聚氰酸共同对雌性SD大鼠进行亚急性经口染毒试验,设1个对照组和3个试验组,每组10只大鼠。每天对动物采用经口灌胃染毒1次,染毒时间28d,试验结束时收集动物血液标本进行检测。[结果]三聚氰胺与三聚氰酸联合染毒会造成雌性SD大鼠血液红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)数量下降和白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lymph)数量上升,引起总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)等肝功能指标的下降和尿素氮(URE-A)、肌酐(CRE)等肾功能指标的增高,同时对血清磷离子有显著影响。[结论]三聚氰胺与三聚氰酸联合染毒可引起雌性SD大鼠血液生化指标的显著变化。

三聚氰胺和三聚氰酸的太赫兹光谱研究

[目的]用太赫兹时域光谱技术(THz-TDS)研究三聚氰胺的波谱特征,以鉴别乳品中是否添加三聚氰胺。[方法]采用THz-TDS技术测量了室温下三聚氰胺和三聚氰酸在0.3～2.5 THz的吸收谱和折射率谱。[结果]2种样品在0.3～2.5 THz波段各有明显的特征吸收峰,三聚氰胺在1.98和2.24 THz,三聚氰酸在1.27和2.37 THz,这是用THz-TDS技术进行鉴别的基础。密度泛函理论计算和晶体数据表明,2种样品的THz吸收光谱主要来源于分子间的与氢键相关的集体振动模式。三聚氰胺在该波段的吸收谱,可用于奶粉中不同含量三聚氰胺的定量分析,也可用于研究三聚氰胺和三聚氰酸形成的1∶1网状结构。[结论]太赫兹光谱不仅是鉴别三聚氰胺与三聚氰酸的有效手段,而且为研究它们之间的复合物结构提供了新的思路。

三聚氰酸和三聚氰胺对肉鸡生长性能的影响及其组织残留的研究

本试验旨在探讨饲粮中添加不同水平的三聚氰酸（cyanuric acid,CYA）和/或三聚氰胺（melamine,MEL）对肉鸡生长性能的影响及其在血浆、组织中的残留。试验采用2×5两因子设计,1 200只1日龄科宝500肉鸡公雏随机分为10个处理,每个处理6个重复,每个重复20只鸡。CYA设5个水平：0、10、20、33.3和50 mg/kg,MEL设2个水平：0和100 mg/kg。试验期42 d。结果表明,CYA对肉鸡体重、体增重、平均日采食量及料重比无显著影响（P〉0.05）,单独添加10-50 mg/kg CYA对肉鸡21 d体重、1-21 d体增重和平均日采食量有不利影响（P〉0.05）。CYA和/或MEL未影响肉鸡对饲粮粗蛋白质、钙和磷的利用率（P〉0.05）,但50 mg/kg CYA显著降低饲粮总能利用率（P〈0.05）。饲粮添加CYA和/或MEL可在肉鸡血浆、肾脏检出CYA残留;所有处理肉鸡肌肉、肝脏、肾脏中均检出MEL残留,二者联合添加增加了肉鸡组织中MEL的残留量。由此可知,饲粮单独添加CYA10-50 mg/kg对幼龄肉鸡生长性能有不利影响,50 mg/kg CYA显著降低饲粮总能利用率;饲粮添加CYA和/或MEL可在肉鸡组织中检出CYA和MEL,联合添加增加组织中MEL残留量,二者比例影响MEL残留量。