三色革裥菌胞外漆酶纯化及部分动力学性质测定

采用两种不同的介质组合对三色革裥菌(Lenzites tricolor)胞外漆酶进行分离纯化,第一种组合方式为:(NH4)2SO4盐析,透析,聚乙二醇(PEG20000)浓缩,SephadexG-150柱层析(1.6cm×60cm),DEAE-Sepha-dexA-25离子交换层析(2.6cm×40cm);第二种组合方式为:(NH4)2SO4盐析、透析、超滤浓缩、DEAE-Sepha-roseFF离子交换层析(1.6cm×60cm)、SephadexG-75凝胶层析(1.6cm×60cm)。测定结果表明,第二种组合方式较高效、合理。该漆酶反应活力最高时温度为60℃、最适pH值为4.6。所测试浓度下,Fe2+、Fe3+、硫脲、叠氮化钠和二硫苏糖醇对漆酶活性有一定抑制作用;Ca2+、乙二氨四乙酸及其二钠盐对漆酶活性具明显的促进作用。氧化丁香醛连氮的米氏常数Km值为43.4μmol/L。

漆酶纯化及部分性质研究

目的:研究三色革裥菌(Lenzites tricolor)所产漆酶的纯化及其部分酶学特性。方法:利用盐析、层析等方法纯化漆酶;测定漆酶的活力及不同金属离子对其的影响。结果:培养第6d时生长最快,漆酶活力最强。层析缓冲体系应选择:缓冲液Na2HPO4-C6H8O7;pH值5.0;反荷离子强度范围0.4～0.5mol/L较合适。漆酶的Km值约为60.4μmol/L。Na+、Ba2+对漆酶活力无明显影响,Cu2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+对漆酶有不同的抑制作用,而Ca2+对漆酶有明显的激活作用。经75%(NH4)2SO4盐析、Sephadex G-150层析后得到较好的纯化漆酶。结论:三色革裥菌所产漆酶经盐析、层析得到较好的纯化效果,不同金属离子对漆酶活力具有不同的影响。