P450酶在植物三萜化合物生物合成中的催化与调控

植物三萜化合物是一类具有6个C5异戊二烯单元的高附加值天然化合物,具有抗炎、护肝、抗肿瘤、抗氧化和降血压等重要药理活性。在三萜化合物生物合成过程中,细胞色素P450酶通过引入羟基、羧基、羰基以及环氧基等官能团,为丰富三萜结构的多样性起到了重要的作用。然而,目前P450酶底物催化特异性机制仍不清晰,异源底盘细胞中表达率低、与细胞色素氧化还原酶(CPR)的适配性差限制了其在植物三萜化合物微生物异源合成中的应用。本文系统地介绍了植物三萜化合物的合成途径、P450酶的催化系统组成和催化机制。通过P450酶的理性与非理性的分子改造,P450酶及其CPR的适应性匹配以及关键代谢途径的区室化研究,以期为P450酶在高效合成三萜化合物的应用提供研究思路。

大孔树脂吸附纯化青钱柳叶三萜化合物

为得到纯度较高的青钱柳叶三萜化合物,采用大孔树脂吸附法对青钱柳叶三萜粗提物进行纯化研究。静态吸附实验结果表明,AB-8树脂对青钱柳叶三萜化合物吸附、解吸性能较好,比饱和吸附量为77.49mg/g,解吸率为85.44%,总回收率可达72.01%。AB-8树脂动态吸附-解吸实验表明:上柱流速增大,吸附率呈降低趋势;随着上柱液质量浓度增大,吸附率先升后降;95%乙醇洗脱效果较好,10BV为合理用量;随着洗脱流速增大,洗脱液峰浓度降低,洗脱率减小,综合考虑以1.5mL/min较为适宜。经AB-8树脂纯化后,三萜类物质纯度可达44.30%。

女贞子中三萜化合物的提取与含量测定

以超声浓方法提取女贞子中三萜化合物,以紫外光谱法检测其含量。通过单因素试验和正交试验考察了超声处理时间、液固比、乙醇浓度三因素对超声波提取三萜化合物的影响。结果表明,最佳提取工艺条件为超声时间30min、液固比(V/W)8:1、无水乙醇。在此条件下测得三萜化合物的含量为5.61%(W/W)。

光皮木瓜总三萜化合物提取和含量测定

通过分光光度法定量,研究了光皮木瓜中总三萜化合物的乙醇浸提工艺。在单因素实验基础上采用L9(34)正交试验设计,考察了浸提时间、浸提温度、料液比等因素对光皮木瓜总三萜化合物提取率的影响。结果表明,在无水乙醇体系中浸提温度为80℃,浸提时间为3 h,料液比为1∶16时提取效果最好,总三萜化合物提取率为2.83%。

苦瓜茎叶中葫芦烷三萜化合物对小菜蛾幼虫的拒食作用

采用叶碟法测定了苦瓜茎叶乙醇提取物对小菜蛾Plutella xylostella幼虫的拒食活性.从苦瓜叶乙醇提取物中分离得到3种葫芦烷三萜化合物,(19S,23E)-5β,19-epoxy-19-methoxy-cucurbita-6,23-diene-3β,25-diol(化合物1)、(19R,23E)-5β,19-epoxy-19-methoxycucurbita-6,23-diene-3β,25-diol(化合物2)和3β,7β,25-trihydroxycucurbita-5,23-dien-19-al-3-O-β-D-glucopyranoside(化合物3).生测结果表明,它们对小菜蛾幼虫的取食有明显的抑制作用.3种化合物(ρ=1 000μg/mL)分别处理甘蓝叶碟后饲喂小菜蛾2龄幼虫,12 h后,化合物1、化合物2和化合物3在选择性试验中的拒食率分别为80.63%、63.26%和77.57%,在非选择性试验中的拒食率分别为77.88%、55.40%和73.01%.

桦褐孔菌子实体与菌丝体三萜化合物提取及活性比较研究

为探索桦褐孔菌菌丝体与子实体在药用价值上是否存在差别,采用有机溶剂冷浸、超声回流法提取桦褐孔菌菌丝体及子实体的三萜化合物,通过薄层层析和红外光谱分析,确定两种来源的三萜化合物是相同或近似的同系物。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和杯碟法测定两种来源三萜化合物对癌细胞和细菌的抑制作用,菌丝体三萜化合物对人胃癌细胞株MGC-803的最高抑制率可达到38.27%。结果证实人工培养的桦褐孔菌菌丝体同样具有子实体的药用价值,为人工培养桦褐孔菌菌丝体提供了依据。

青钱柳细胞悬浮培养及三萜化合物积累

研究青钱柳细胞悬浮培养体系的建立及三萜化合物的积累.结果表明,以青钱柳无菌幼叶为外植体,可诱导出愈伤组织.选择绿色、较为疏松的愈伤组织继续筛选和继代培养,可获得疏松易碎、生长旺盛、适于悬浮培养的优良愈伤组织.青钱柳细胞优化培养条件为:MS培养基、2,4-D 0.8 mg/L、NAA1.8 mg/L、6-BA 0.8 mg/L、KT 0.8 mg/L、蔗糖40 g/L,pH值6.0,100 mL三角瓶中装液量为40 mL,接种量为3 g(鲜质量),暗培养.该条件下悬浮细胞生长迅速,最大生长量(干质量)为15.56 g/L,总三萜产量达1 179.85 mg/L,熊果酸和齐墩果酸是其中主要的三萜化合物,产量分别达443.64 mg/L和159.00mg/L.青钱柳细胞悬浮培养可用于熊果酸和齐墩果酸生产.

超声辅助提取青钱柳叶总三萜化合物的工艺优化

为研究青钱柳叶总三萜化合物超声辅助提取的最佳工艺条件,在考察了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度、提取级数、超声功率、提取溶剂等单因素的基础上,采用L9(34)正交设计确定在多因素条件下青钱柳总三萜提取的最佳工艺。结果表明,最佳提取工艺条件为:70%的乙醇、料液比1∶40,在400 W条件下超声45 min。采用该提取方法所得青钱柳叶总三萜平均得率为2.22%。该优化工艺稳定,适合于青钱柳叶三萜类化合物的提取。

优选超临界CO_2萃取灵芝孢子粉中总三萜化合物的最佳工艺

目的:建立超临界CO2萃取法提取和纯化灵芝孢子粉中总三萜化合物的最佳工艺条件。方法:采用超临界CO2萃取技术,以正交试验考察提取压力、温度和时间对提取效果的影响。结果:最佳工艺条件为萃取压力22 MPa,萃取温度50℃,萃取时间2 h。总三萜化合物的回收率为17.6%,在灵芝孢子粉中含量为160 mg/g。结论:优选出的工艺稳定可靠,简便易行。

海南假韶子叶子中脂溶性木栓烷型三萜化合物

目的研究海南假韶子叶子中脂溶性浸膏的木栓烷型三萜类化合物。方法采用反复常压硅胶柱色谱技术与重结晶技术,对海南假韶叶子中石油醚提取浸膏进行分离纯化,得到4种化合物。并采用现代波谱法结合理化分析对提纯的单体化合物进行结构鉴定。结果分离得到的单体化合物分别为:①粉蕊黄杨酮醇,②海棠果醇,③海棠果醛和④表木栓醇。结论该脂溶性提取浸膏主要为木栓烷型三萜化合物。

超临界流体萃取红芝三萜化合物

采用超临界流体设备，以ＣＯ２为萃取剂，从野生红芝子实体中萃取灵芝三萜化合物分析了ＣＯ２密度、温度。

赤芝子实体新三萜化合物的结构鉴定

目的 对赤芝子实体的化学成分进行研究。方法 利用各种色谱技术进行分离 ,采用1 HNMR ,1 3 CNMR ,1 H 1 HCOSY ,HMQC和HMBC谱进行结构鉴定。结果 从赤芝子实体中分离得到 3个化合物 ,分别鉴定为 :lucidenicacidA (1) ,3β ,7β dihydroxy 4,4,14α trimethyl 11,15 dioxo 5α chol 8 en 2 4 oicacid (2 )和lucidenicacidC (3)。 结论 化合物 2为新化合物 ,命名为赤芝酸LM1 (lucidenicacidLM1 )。

鱼藤的三个新三萜化合物

从民间杀虫植物鱼藤 (DerriseriocarpaHow)的根中分离得到 5个三萜化合物 ,经波谱和化学分析确定了这些化合物的化学结构。其中化合物 1(3β ,15α dihydroxy olean 12 (13) en 16 one) ,2 (3β ,15α ,2 3 trihydroxy olean 12 (13)en 16 one) ,3 (15α hydroxyl 16 oxo olean 12(13) en 3 O β glucuronopyranoside)为新化合物 ,命名为鱼藤三萜素A ,B ,C。两个已知三萜为 2 β ,3β ,2 8 三羟基 12 (13) 烯 -齐墩果烷和 β 香树脂素 (β amyrin)。另外还得到了二十七碳脂肪酸单甘油酯和 β 谷甾醇。

气相色谱法测定竹茹中三萜化合物木栓酮的含量

目的:建立竹茹中主要的五环三萜类化合物木栓酮的提取和气相色谱测定方法。方法:竹茹粉末用正己烷热回流提取8 h,得正己烷萃取物;气相色谱条件:FID检测器,HP-5色谱柱(5%phenyl methyl siloxane,30 m×0.25 mm×0.25μm)、柱温从140℃以20℃·min-1升温到280℃,保持22 min。结果:提取方法有效,淡竹茹中木栓酮含量为0.688%;木栓酮检出限为1.01μg·mL-1,定量限为4.06μg·mL-1,回收率为101.1%,RSD为2.3%。结论:提取方法简单,检测方法灵敏、重现性好,为竹茹的质量评价和品质控制提供了可量化的参数。

刺梨三萜化合物CL1体外抗人子宫内膜腺癌作用

目的研究刺梨单体CL1体外抗人子宫内膜腺癌(human adenocarcinoma endometrium cell.line JEC)作用。方法通过细胞形态学改变、MTT法和细胞生长曲线绘制法检测CL1的抗JEC作用。运用全自动分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)含量;通过检测NBT还原法分析CL1对JEC细胞分化的影响;采用AO/EB荧光染色法和FCM检测CL1对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响。结果生长曲线、细胞形态学观察和MTT检测显示,CL1对JEC细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性;与阴性对照组比,随CL1剂量的增加,NBT阳性细胞比率增加,LDH含量逐渐降低;与阴性对照组比,CL1能诱导JEC细胞凋亡,并阻滞JEC细胞于G0-G1和G2-M期。结论 CL1具有体外抗JEC作用,其机制可能与其细胞毒性、诱导细胞分化、诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖有关。

桦褐孔菌发酵液中三萜化合物和多糖的微波辅助双水相萃取

采用微波辅助乙醇/K2CO3双水相提取技术实现一步操作提取分离桦褐孔菌发酵液中的三萜化合物和多糖。通过考察分配系数和回收率,探讨三萜化合物和多糖在体系中的分配行为。获得三萜化合物和多糖的最佳微波提取条件为:最佳相组成中,K2CO3的质量分数为25%,乙醇的质量分数为24%;固液比为1∶50;微波功率为540 W;微波时间为120 s。此条件下,三萜化合物的提取率为(99.22±0.68)%,多糖的提取率为(98.34±0.83)%,蛋白去除率为(94.67±0.74)%,菌丝体去除率为100%。该方法操作简单,三萜化合物和多糖提取率高、分离效果好,同时去除了菌丝体和蛋白,更加有利于产品的后续纯化。

山芝麻中的新三萜化合物

From the roots of Helicteres angustifolia, collected from Anhui province, two triterpenoids of oleanolic acid type were obtained and were identified as new compounds, methyl 3β-hydroxyolean-12-en-27-benzoyloxy-28-oate(1) and 3β-O-(p-hydroxy-(E)-cinnamoyl)-12 oleanen-28-oic acid(2). The variety of spectroscopic methods such as IR, HRMS, EIMS, H-H COSY, H-C COSY NMR have been applied in the structural elucidation of these two compounds.

香茶菜属植物中的三萜化合物对脂质过氧化和DNA损伤的保护作用

通过检测对H2O2处理的人外周血单个核细胞的DNA损伤、鼠肝微粒体脂质过氧化和pBR322 DNA氧化断裂的保护作用,测定了从香茶菜中提取到的4种三萜化合物的抗氧化活性.结果表明,4种化合物在这3种体系中发挥着不同的作用.熊果酸在所有体系中保护作用最强;2α,3β-二羟基-乌苏-12-烯-28-酸在抑制脂质过氧化时活性强,而在抑制单链DNA断裂中作用较弱;其异构体2α,3α-二羟基-乌苏-12-烯-28-酸作用正好相反;齐墩果酸仅在在H2O2处理的单个核细胞层DNA损伤中具有微弱保护作用.

毛花猕猴桃根中的一个新三萜化合物

从毛花猕猴桃(Actindia eriantha Benth)的根中分离到三个结晶成分,根据光谱数据(MS,IR,^(12)CNMR,~1HNMR)和化学证明,R_6的结构为2α,3β,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸是一新化合物,其余两个成分分别为二十四碳酸和葡萄糖。

一种新的三萜化合物的2DNMR研究

本文采用FAB-MS,FTIR和NMR等技术对从沙打旺牧草分离出的一种新的三萜化合物进行结构鉴定,结果表明该化合物为(20R,24S)-3,16-二羰基-6α,25-二羟基-20,24-环氧-9,10环羊毛甾酮.用2D NMR技术,包括~1H-^(13)CHETCOR,COLOC,~1H-~1H COSY对,~1H和^(13)C NMR进行归属。