牛樟芝ITS序列分析及液体发酵菌丝体总三萜含量测定

为筛选富萜牛樟芝(Antrodia cinnamomea)菌株,对收集的3株牛樟芝菌株(AC620,AC1404,AC001)进行ITS序列分析,通过香草醛-冰醋酸法对牛樟芝液体发酵菌丝体总三萜含量进行分析。ITS序列分析结果表明菌株AC1404和AC001的ITS序列完全相同,长度均为593 bp,AC 620菌株的长度为581 bp。供试菌株AC001、AC1404和AC620菌丝体中的三萜含量分别为34.30、18.47和16.68 mg·g-1(DW),菌株AC001与AC1404和AC620间菌丝三萜含量差异极显著(P<0.01)。

灵芝孢子粉中总三萜含量标准测定方法的改进

对农业部部颁备案灵芝（Ganodermalucidum）孢子粉总三萜含量测定标准NY／sJ339—2001进行优化，将齐墩果酸标准溶液浓度从1mg／mL优化为0．2mg／mL，取样体积范围从0．02～0．1mL优化为0．1～0．6mL，即样品质量范围从20～100Mg变化为20--120μg；取样后添加沸水浴加热挥去溶剂这一优化步骤；显色剂5％香草醛一冰醋酸溶液和高氯酸最适用量分别从0．2mL和0．5mL优化为0．1mL和0．8mL，显色稳定范围确定为10~30min。运用优化的检测方法可以获得很好的标准曲线，提高了R2值，且重复性好、回收率高，可作为灵芝孢子粉总三萜含量检测的一个简便、快速、准确的检测技术。

施肥对圆齿野鸦椿生长及叶片三萜含量的影响

目的:研究圆齿野鸦椿生长及叶片三萜含量与N、P、K施肥量之间的关系,提高肥料效率。方法:采用"3414"施肥方案对8年生圆齿野鸦椿进行施肥试验,测定其胸径、抽高和叶片三萜含量,分析其与施肥量的关系。结果:施用N、P、K肥对圆齿野鸦椿生长量具有显著影响。单因素施肥时,N、P、K施肥量分别为50 g/株、25 g/株和50 g/株时最有利于植株生长,最大胸径和最大抽高分别为0.41 cm和15.25 cm;回归分析得N、P、K配比施肥最佳施肥量为53.93 g/株、22.02 g/株、44.81 g/株,最大抽高为15.15 cm,胸径生长量和抽高规律基本一致;N肥和K肥对圆齿野鸦椿生长的影响之间存在显著交互作用。施用N、P、K肥对圆齿野鸦椿叶片三萜含量有一定的影响,N、P、K最佳施肥量分别为75 g/株、29.7 g/株、75 g/株;三种肥料相互存在交互作用,P、K交互作用显著。单因素施肥时,最佳N、P、K施肥量及相应三萜含量分别为47.89 g/株(8.29%)、24.34 g/株(8.07%)、47.36 g/株(8.00%)。结论:综合分析得最有利于圆齿野鸦椿生长及三萜积累的N、P、K施肥量分别为50 g/株、25 g/株、50 g/株。

灵芝孢子粉苦味与三萜含量的相关性

对不同来源的灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉原料及产品的苦味进行感官评定和三萜含量测定,分析苦味与三萜含量的关系。结果表明:不同灵芝孢子粉原料及产品中三萜的含量存在差异,大部分孢子粉混悬液无法尝到苦味,当孢子粉混悬液中三萜的质量浓度超过其苦味阈值30μg·mL^-1时,就可以品尝到苦味;灵芝孢子粉的苦味与其所含的三萜含量呈正相关性,三萜含量越高孢子粉的苦味越强,提取浓缩可以提高孢子粉产品中的三萜含量,使其呈现苦味。

干燥方式对尾巨桉树皮提取物总三萜含量及其杀螺活性的影响

为探讨干燥方式对尾巨桉树皮提取物总三萜含量的影响和其杀螺作用机理,实验以尾巨桉树皮为研究对象,比较鼓风干燥和冷冻干燥两种干燥方式对其树皮乙醇提取物总三萜含量及杀螺活性的影响。结果表明,当乙醇体积分数为60%时,鼓风干燥和冷冻干燥的尾巨桉树皮乙醇提取物中总三萜含量最高,分别为10.81%和13.90%。两种干燥方式得到的尾巨桉树皮乙醇提取物对福寿螺均有较强的毒杀活性,在50mg/L的浓度下处理72h,福寿螺的死亡率分别到达93.1%和100.00%;同时尾巨桉树皮提取物还能显著抑制福寿螺离水上爬,抑制效果优于同浓度下的对照药剂茶皂素(P<0.05)。与空白对照组相比,经鼓风干燥的尾巨桉树皮提取物处理后,福寿螺头足和肝脏的蛋白质含量变化不大(P>0.05);经过冷冻干燥的尾巨桉树皮提取物处理后,福寿螺头足中蛋白质含量显著降低(P<0.05),而肝脏中蛋白质含量无明显变化(P>0.05)。鼓风干燥和冷冻干燥的尾巨桉树皮提取物均可有效抑制福寿螺头足部中LDH、AKP和AST/GOT的活性(P<0.05)以及肝脏中ALT/GPT和AST/GOT的活性(P<0.05)。冷冻干燥的尾巨桉树皮提取物中三萜含量以及杀螺活性均高于鼓风干燥的树皮提取物。

紫外分光光度法测定牛樟芝子实体的总三萜含量

目的测定人工培育牛樟子实体的总三萜含量。方法以熊果酸作对照品,5%香草醛-冰乙酸显色,比色法于510 nm处测定牛樟芝总三萜的含量。结果熊果酸在3.4~27.2μg/m L范围内线性关系良好,回归方程Y=4.16×10^(-2)X-7.85×10^(-2),平均加样回收率102.0%,RSD为1.96%;醇提物中总三萜含量为(29.40±0.97)%,即牛樟芝生药材总三萜含量为10.43%。结论该法测定总三萜重复性好,可作为评价牛樟芝子实体质量的方法之一。

高产三萜灵芝新菌株‘沪农灵芝5号’的选育

为选育高产三萜灵芝(Ganoderma lucidum)新品种,以抗杂菌能力强、生物学效率高的‘沪农灵芝1号’(H 1)和三萜含量高、抗杂菌能力弱的‘灵芝G 8’(G 8)为亲本,将原生质体单核菌株进行杂交,从130个杂交组合中筛选出菌丝长势较好的25个杂交菌株,并对其进行栽培试验,考察菌包成品率、生物学效率等农艺性状及子实体三萜含量,从中筛选出杂交菌株Z18。与亲本G8相比,Z18菌包成品率提高66.67%、生物学效率提高22.54%;与亲本H1相比,Z18子实体中三萜含量提高51.26%。ERIC-PCR分析结果显示,Z18与亲本存在遗传差异。Z18达到新品种审定标准,已通过上海市非主要农作物品种认定,定名为‘沪农灵芝5号’。

海南产不同种类灵芝活性分析及其总三萜含量分析

目的比较海南产不同种灵芝子实体中总三萜(TGT)含量,分析比较灵芝子实体乙醇粗提物的生物活性。方法以齐墩果酸为对照品,用香草醛-高氯酸显色,测定海南产17种灵芝子实体总三萜含量,并采用PNPG法、DPPH法和MTT法测定海南产17种灵芝乙醇粗提物的α-糖苷酶抑制活性、抗氧化活性和抗肿瘤活性。结果海南产17种灵芝子实体总三萜含量在0.274%~0.975%,其中黄边灵芝含量最高,橡胶灵芝含量最低。对浓度为25 mg/ml的海南产17种灵芝乙醇粗取物活性进行测定,结果显示,喜热灵芝、南方灵芝、茶病灵芝和紫光灵芝乙醇粗提物对α-糖苷酶的抑制率均达到了65.0%以上,阿卡波糖(5 mg/ml)对α-糖苷酶的抑制率为32.3%;浓度为25 mg/ml的喜热灵芝、布朗灵芝、大青山灵芝、紫光灵芝及热带灵芝乙醇粗提物对DPPH清除率均大于75.0%,坏血酸(5 mg/ml)清除率为84.6%;赭漆灵芝、橡胶灵芝、吊罗山灵芝和栽培赤芝等一半以上灵芝乙醇粗提物有一定的抗肿瘤活性。结论海南产不同灵芝TGT含量差异较大,其生物活性差别也较大,灵芝乙醇粗提物的α-糖苷酶抑制活性、抗氧化活性及抗肿瘤活性与其TGT含量无显著相关。

中药川楝子炮制前后总三萜的含量变化研究

目的采用紫外-可见分光光度法测定中药川楝子炮制前后总三萜的含量变化。方法以川楝素为对照品,5%香草醛-冰醋酸溶液和高氯酸显色后,在515nm处测定其吸光度值。结果川楝子生品中总三萜含量为9.223mg·g^-1,3批炒制品中总三萜含量平均值为8.584mg·g^-1。结论川楝子炮制品中总三萜含量较生品有所降低,此试验结果可为川楝子的炮制减毒机制提供理论参考。

空气中CO_2浓度对灵芝三萜的影响及其分子机制研究

灵芝作为1种比较名贵的菌类药材,目前已经能实现大规模的人工栽培。通过控制CO_2浓度来研究空气中CO_2浓度对灵芝生长发育过程中药用成分灵芝三萜的影响,并对空气中CO_2浓度对三萜含量影响做了初步的分子机制研究。试验结果表明,随着空气中CO_2浓度的提高,子实体三萜含量在生长各个阶段均逐渐升高。在灵芝子实体发育的早期,空气中CO_2浓度对总三萜含量的影响更加显著。但过高的CO_2浓度会使子实体形态呈现细长的鹿角状;空气中CO_2浓度对灵芝三萜含量累积的影响可能是通过影响基因ls表达量的上调实现的。

空心莲子草营养器官结构与三萜皂苷动态积累的关系

采用组织化学定位、显微制片技术和三萜皂苷定量分析方法对空心莲子草营养器官结构与三萜皂苷类物质积累关系进行了研究。结果表明:空心莲子草宿根、根状茎、茎和叶中均有三萜皂苷物质的积累,叶和根状茎内含量十分丰富。在相同采收期内含量依次为:叶>根状茎>根>茎,叶中主要积累于栅栏组织细胞内。空心莲子草的根和根状茎横切面均属于异常结构,具有成同心环状排列的三生维管束。在宿根和根状茎的次生韧皮部、栓内层、三生韧皮部和结合组织内均有三萜皂苷的分布,三生结构在宿根和根状茎中占有主要地位,是三萜皂苷积累的主要场所。在不同采收期内叶、根状茎和根中三萜皂苷的积累趋势基本一致,均随生长期的增加而递增。空心莲子草茎的横切面由表皮、皮层、维管束和髓腔组成,仅部分皮层细胞和初生韧皮部内有三萜皂苷分布。

龙牙楤木Aeβ-AS基因的表达对烟草中皂苷含量的影响

为探讨龙牙楤木(Aralia elata)三萜皂苷合成的关键酶基因β-香树素合成酶基因(Aeβ-AS)对三萜皂苷合成的影响。利用基因克隆技术对Aeβ-AS基因进行克隆,并对烟草进行遗传转化,分析转基因烟草中Aeβ-AS基因在各部位的表达差异,检测Aeβ-AS基因及上下游关键酶基因表达量和总三萜含量。结果表明:成功构建了植物过表达载体pROKⅡ-Aeβ-AS,并转入了野生型烟草,获得7个转基因株系,并在mRNA水平表达,且在叶子中的表达量要高于根和茎;在转基因烟草中,Aeβ-AS基因及其上下游的关键酶基因表达量均高于野生型,其中株系L21的NtFPS、NtSS基因的相对表达量最高,株系L30的NtSE、Aeβ-AS基因的相对表达量最高;与野生型烟草相比,转基因烟草的总三萜含量显著升高(1.1~1.6倍)。试验结果证明合成Aeβ-AS基因并在烟草中进行异源转化,可以使转基因烟草内的总三萜含量显著升高。

三七“拔鸡腿”对三七主根产量和皂苷含量的表征

目的:探明三七“拔鸡腿”表征三七主根高产和良好药用品质的内涵,为从促进“拔鸡腿”发生的角度优化三七育种和大田栽培的管理措施提供理论依据。方法:以二、三年生三七“拔鸡腿”和“非拔鸡腿”植株的主根为材料。用称重法检测主根的鲜重、干重和折干率,用分光光度法检测主根总淀粉含量(TSC)、可溶性糖含量(SSC)、可溶性蛋白含量(SPC)及总三萜皂苷含量(TTSC),用高效液相色谱法检测主根主要三萜皂苷单体(R_(1)、Rg_(1)、Re、Rb_(1)和Rd)的含量。结果:三七“拔鸡腿”表征着二和三年生三七主根单株鲜重和TTSC的显著偏高,TSC的不显著偏低和SPC的不显著偏高;二年生三七主根单株干重,R_(1)、Rg_(1)、Re、Rb_(1)和Rd含量,5种皂苷单体总含量(TCFSMs)的不显著偏高和SSC的显著偏高;三年生三七主根单株干重,SSC,Rd含量的极显著偏高以及折干率,Rg_(1)、Re、Rb_(1)含量和TCFSMs的不显著偏高及R_(1)含量的显著偏高。同时,“拔鸡腿”也表征着从二年生到三年生时,主根的单株鲜重和单株干重以及R_(1)、Re和Rd含量的大幅增加;折干率,TTSC,Rg_(1)和Rb_(1)含量及TCFSMs的小幅增加;TSC的较快下降以及SSC和SPC的较慢下降。结论:三七“拔鸡腿”表征着三七主根较高的单株鲜重、单株干重、可溶性糖和可溶性蛋白含量以及总三萜皂苷及其主要单体的含量。

培养料锌含量对灵芝子实体品质的影响

为探究醋酸锌(ZnAC)对灵芝子实体产量、活性成分及锌含量的影响,为提高灵芝单产和品质以及研发富锌产品提供栽培技术参数,在主料为棉籽壳的固体栽培基质中添加不同含量的ZnAC,以常规方法栽培灵芝品种"川圆芝1号",测定比较菌丝生长速度,检测分析子实体中的多糖、三萜和锌含量。结果显示,栽培基质中添加50 mg·kg-1~350 mg·kg-1的ZnAC,均可有效促进灵芝菌丝生长速度,且当添加量为150 mg·kg-1时生长速度最快,较CK提高了14.6%;当ZnAC添加量为50 mg·kg-1时大幅度提高子实体中的三萜含量,较CK提高了约52.1%,说明添加锌对子实体中三萜活性物质的诱导形成和含量积累产生重要影响;当ZnAC添加量为350 mg·kg-1时子实体含锌量最高(48.52 mg·kg-1),较CK的锌含量提高了91.81%,说明添加锌能够促进灵芝在子实体中锌的有效富集。本研究为灵芝的代料生产栽培基质中,ZnAC的应用提供了理论依据。

灵芝杂交菌株栽培比较试验

对13个灵芝杂交菌株进行栽培试验,综合比较菌株菌丝生长速度、生物学效率、子实体形态特征、多糖和三萜含量等指标。结果表明,菌株4947、4930、4895适用于药用菌栽培;菌株4911菌盖最大(12.47 cm),菌盖较厚,子实体色泽好,可用于制作盆景。