雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的 探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法 针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果 2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论 该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)在提高基因打靶效率中的应用

基因打靶技术是研究基因功能的重要手段,而基因打靶效率特别是体细胞的打靶效率非常低下。人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)是目前正在研究的提高打靶效率的方法。文中综述了这2种方法的基本原理、设计思路及在提高基因打靶效率中的应用,并对2种方法的特点进行了分析比较,最后对其未来发展进行了展望。

载^(125)I标记三螺旋形成寡核苷酸纳米粒的制备及初步应用

目的构建载^(125)I标记反雄激素受体(AR)基因三螺旋形成寡核苷酸(^(125)I-TFO)纳米粒,并初步探讨其在体外对前列腺癌细胞的抑制作用。方法应用Bolton-Hunter法对三螺旋形成寡核苷酸进行^(125)I标记,通过复乳化溶剂挥发法制备包载^(125)I-TFO的纳米粒(^(125)I-TFO-NP),测定其粒径、形态、包封率、载药量及体外释放特点。用γ计数器测定前列腺癌细胞LNCa P对^(125)I-TFO-NP的摄取情况,CCK-8法检测纳米粒对前列腺癌细胞增殖的抑制作用、荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测纳米粒中AR mRNA表达水平。结果所获^(125)I-TFO的标记率和放射化学纯度分别为(86.87±0.45)%、(96.21%±0.97)%。^(125)I-TFO-NP的平均粒径为(298.2±0.5)nm,包封率与载药量分别为(70.6±6.6)%和(1.89±0.13)μg/mg,缓释作用明显。前列腺癌细胞对^(125)I-TFO-NP的摄取率高于未包裹^(125)I-TFO(P<0.01)。与空白对照组及TFO-NP组比较,^(125)I-TFO-NP组中前列腺癌细胞的增殖抑制率升高(P<0.01),AR mRNA及蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论制备的载^(125)I-TFO-NP性状良好,可通过下调AR的表达水平,抑制前列腺癌细胞的增殖。纳米粒可为反基因放射治疗提供理想的载体。

反基因及反义寡核苷酸体外抗前列腺癌作用的研究

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对前列腺癌细胞雄激素受体(AR)表达和细胞增殖的影响。方法设计并合成针对AR基因的TFO和ASO,经脂质体介导转染前列腺癌细胞株LNCaP。MTT法检测细胞增殖活性,RTPCR检测AR基因表达,免疫组化法检测AR蛋白表达,放射免疫分析检测PSA表达。结果转染后24、48、72h,TFO组LNCaP细胞ARmRNA平均表达水平分别为0.25、0.33、0.46,显著低于ASO组的0.44、0.54、0.60,P<0.05;TFO对LNCaP细胞的生长抑制率(51.8%、65.8%、36.2%)显著高于ASO(28.8%、42.6%、17.5%),P<0.05。TFO对AR蛋白表达的抑制作用强于ASO。转染后24hPSA表达水平[(0.5±0.1)ng/ml]显著低于ASO组[(0.8±0.2)ng/ml],P<0.05。结论在LNCaP细胞TFO对AR表达和癌细胞增殖的抑制作用明显强于ASO,反基因策略对于前列腺癌的治疗具有重要研究价值。

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展 ,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究 ,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术 ,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究 ,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文对转基因干扰素、DNA疫苗 (DNA免疫 )、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸 (反基因寡核苷酸 )。

卟啉锰-TFO-吖啶的合成

目的 合成卟啉锰 TFO 吖啶化合物。方法 合成含 7 去氮 2 脱氧黄嘌呤的TFO ;以吖啶修饰TFO的 3′末端 ,以 6碳氨基连接臂修饰TFO的 5′末端 ;四苯基卟啉四羧酸经金属化、酯化后 ,与TFO的 5′末端偶联 ;薄层层析纯化 ,质谱、紫外光光谱分析鉴定。结果 薄层层析结果显示在对照寡核苷酸带前方有一条淡黄色的吖啶 TFO带 ;紫外光光谱分析显示卟啉锰 TFO 吖啶化合物同时具有 2 60nm处寡核苷酸的特征吸收峰和 468nm处卟啉锰的特征吸收峰。质谱分析结果证实 ,卟啉锰 TFO 吖啶化合物分子量实测值与理论值一致。结论 合成了卟啉锰 TFO

乙型肝炎病毒(HBV)反基因与HBV的结合及对HBV复制的影响

目的 研究三螺旋形成寡核苷酸与ＨＢＶ基因的结合情况及其对ＨＢＶ复制的影响。方法 合成一段能与ＨＢＶ核心启动子位点（１７３４～１７５３ｎｔ）形成三螺旋的寡核苷酸（ＴＦＯ２０）并标记上生物素，分别用脂质体－ＴＦＯ２０及裸ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞，用链酶亲和素－生物素法（ＳＡＢＣ）检测其转染效率及其与ＨｅｐＧ２．２．１５细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ的结合情况；并采用ＥＬＩＳＡ、半定量逆转录（ＲＴ）－ＰＣＲ及荧光定量ＰＣＲ法分别检测经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２． １５细胞及空白对照细胞上清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ及细胞中ＨＢＶ ＲＮＡ的水平。结果 脂质体－ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞的效率可达８０％，而裸ＴＦＯ２０转染率最高为４０％；ＴＦＯ２０主要定位于细胞核及胞浆中。ＴＦＯ２０处理组细胞上清中ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ含量分别较空白对照组降低３７．０％及７８．２％，ＨＢＶ ＤＮＡ水平较空白对照组明显降低；而细胞中２．４ｋｂ／２．１ｋｂ ＲＮＡ、３．５ ｋｈ／３．４ ｋｂ ＲＮＡ亦分别降低３１．６％及７０．２％。结论 ＴＦＯ２０通过脂质体包裹后可以很好地进入细胞并与ＨＢＶ ＤＮＡ结合；ＴＦＯ２０能?