载雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸PEG-PLGA纳米粒子的制备与应用

【目的】以生物可降解材料聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)制备载雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸的纳米粒子(TFO-NPs),并初步探讨其对前列腺癌LNCaP细胞的生长抑制作用。【方法】采用改良自乳化溶剂挥发法(modified-SESD)制备TFO-NPs,对其形态、包封率、载药量及体外释放特点进行鉴定。倒置荧光显微镜观察LNCaP细胞对TFO-NPs的摄取情况,四唑盐(MTT)法测定体外细胞毒作用。【结果】制备的TFO-NPs呈球形、大小均匀,平均粒径128nm,平均包封率和载药量分别为72.28%和1.02%,在体外具有缓释作用。LNCaP细胞对TFO-NPs的摄取率显著高于裸TFO。TFO-NPs对LNCaP细胞的抑制作用明显强于裸TFO(P<0.05),抑制率分别为61.2%±6.5%和20.7%±3.1%。【结论】本法制备的TFO-NPs理化性质优良,在体外能够有效抑制LNCaP细胞的增殖。

雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的 探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法 针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果 2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论 该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)在提高基因打靶效率中的应用

基因打靶技术是研究基因功能的重要手段,而基因打靶效率特别是体细胞的打靶效率非常低下。人工诱导双链断裂(DSB)与三螺旋形成寡核苷酸(TFO)是目前正在研究的提高打靶效率的方法。文中综述了这2种方法的基本原理、设计思路及在提高基因打靶效率中的应用,并对2种方法的特点进行了分析比较,最后对其未来发展进行了展望。

载^(125)I标记三螺旋形成寡核苷酸纳米粒的制备及初步应用

目的构建载^(125)I标记反雄激素受体(AR)基因三螺旋形成寡核苷酸(^(125)I-TFO)纳米粒,并初步探讨其在体外对前列腺癌细胞的抑制作用。方法应用Bolton-Hunter法对三螺旋形成寡核苷酸进行^(125)I标记,通过复乳化溶剂挥发法制备包载^(125)I-TFO的纳米粒(^(125)I-TFO-NP),测定其粒径、形态、包封率、载药量及体外释放特点。用γ计数器测定前列腺癌细胞LNCa P对^(125)I-TFO-NP的摄取情况,CCK-8法检测纳米粒对前列腺癌细胞增殖的抑制作用、荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测纳米粒中AR mRNA表达水平。结果所获^(125)I-TFO的标记率和放射化学纯度分别为(86.87±0.45)%、(96.21%±0.97)%。^(125)I-TFO-NP的平均粒径为(298.2±0.5)nm,包封率与载药量分别为(70.6±6.6)%和(1.89±0.13)μg/mg,缓释作用明显。前列腺癌细胞对^(125)I-TFO-NP的摄取率高于未包裹^(125)I-TFO(P<0.01)。与空白对照组及TFO-NP组比较,^(125)I-TFO-NP组中前列腺癌细胞的增殖抑制率升高(P<0.01),AR mRNA及蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论制备的载^(125)I-TFO-NP性状良好,可通过下调AR的表达水平,抑制前列腺癌细胞的增殖。纳米粒可为反基因放射治疗提供理想的载体。

PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸对C_6胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察PDGF B链基因三链形成寡核苷酸 (triplex formingoligonucleotide ,TFO)对C6胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响。方法 应用免疫荧光流式细胞技术观察PDGF B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF B、PCNA表达的影响。应用流式细胞技术观察PDGF B链基因TFO对C6胶质瘤细胞细胞周期的影响。结果 PDGF B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF B链基因、PCNA的表达有明显抑制作用 ,而且抑制作用存在浓度依赖性。PDGF B链基因TFO能使C6胶质瘤细胞S期的百分率明显降低 ,阻止细胞由静止期 (G0 G1期 )进入 (S期 )。结论 PDGF B链基因TFO能够抑制C6胶质瘤细胞PDGF B链基因的表达 ,阻碍细胞进入S期 。

SHNH法和NHS-MAG_3法标记的^(99m)Tc-寡聚核苷酸的比较

比较研究采用联肼尼克酰胺(Hydrazino Nicotinamide Derivative,SHNH)法和N-羟基琥珀酰胺基S-乙酰巯基乙酰三氨基乙酸(N-hydroxysuccinimidyl S-acetylmercaptoacetyltriglycline,NHS-MAG3)法以99mTc标记反义寡聚核苷酸(Antisense Oligonucleotide,ASON)的标记物的放射化学和生物学特性。合成SHNH和NHS-MAG3后,分别以SHNH和NHS-MAG3为双功能络(螯)合剂,用99mTc标记ASON;比较标记物99mTc-SHNH ASON和99mTc-MAG3-ASON的体内外稳定性、兔血浆蛋白结合、正常BALB/C小鼠体内分布及结肠腺癌HT29细胞摄取的情况。结果显示,采用NHS-MAG3法标记的标记物99mTc-MAG3-ASON的标记率和稳定性明显高于SHNH法标记的标记物99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)、血浆蛋白结合率显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON在血液、心脏、胃、肠的分布显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05),而在肝、脾的分布略低于99mTc-SHNH-ASON(P>0.05),但在肾的分布显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON的HT29细胞摄取率显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)。因此,采用NHS-MAG3法的标记物99mTc-MAG3-ASON的放射化学和生物学特性明显优于SHNH法的标记物99mTc-SHNH-ASON。

基于ROS/TXNIP/NLRP3通路的柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的观察柴胡三参胶囊对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡的影响,从ROS/TXNIP/NLRP3通路探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和柴胡三参胶囊低、中、高剂量组,每组10只。柴胡三参胶囊低、中、高剂量组分别按0.15、0.3、0.6 g/kg灌胃,曲美他嗪组按5.4 mg/kg灌胃,假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,28 d后造模。除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型。HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构,ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β含量,DCFH-DA荧光探针检测心肌组织活性氧(ROS)含量,免疫荧光染色检测心肌细胞焦亡,Western blot和RT-PCR分别检测心肌组织硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白和mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维结构不完整,细胞出现脂肪样变、间质水肿及出血,伴有少量炎性细胞浸润,胞质疏松,胞膜破裂严重、有大量孔隙形成;血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著增加;心肌组织ROS含量显著增加,细胞焦亡率显著升高,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌纤维结构均有不同程度改善,心肌细胞脂肪样变减少,间质水肿及出血程度减轻,无明显炎性细胞浸润,胞质较致密,胞膜相对完整、孔隙减少;柴胡三参胶囊中、高剂量组和曲美他嗪组大鼠血清CK-MB、LDH、IL-18、IL-1β含量显著减少,心肌组织ROS含量显著减少,细胞焦亡率显著降低,TXNIP、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可有效减轻MIRI大鼠心肌细胞损伤,其机制可能与下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制心肌细胞焦亡有关。

血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死患者脑血栓形成及临床应用价值

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死(ACI)患者脑血栓形成及临床应用价值。方法选取2022年1—12月收治的ACI 120例作为观察组,另选取同期健康体检者120例作为对照组。观察组予以机械取栓术治疗,依据是否获取血栓组织分为血栓组和非血栓组2个亚组。比较观察组和对照组血清NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平及血栓组和非血栓组临床资料,分析ACI患者脑血栓形成相关因素,探讨血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估ACI脑血栓形成和临床应用价值,分析ACI脑血栓形成者临床转归情况。结果血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平,观察组高于对照组,血栓组高于非血栓组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18均为ACI患者脑血栓形成的独立危险因素(P<0.01)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18联合评估ACI患者脑血栓形成的曲线下面积高于单独评估,且联合评估时净获益阈值范围大于单独检测(P<0.05)。血栓组出院时mRS评分4~6分所占比例(22/92,23.91%)高于非血栓组(1/28,3.57%)(P<0.05)。结论ACI患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平升高,其联合检测对脑血栓形成具有一定评估价值,且具有更高临床净获益。

三链DNA

三链ＤＮＡ吴永文，黄熙泰（南开大学，生命科学学院）一．双螺旋ＤＮＡ与三链ＤＮＡ１９５３年华森（Ｗａｔｓｏｎ）和克里克（Ｃｒｉｃｋ）发现了ＤＮＡ的双螺旋结构，被公认为生物界最广泛的遗传信息载体的普遍存在形式。为此，二人获得了诺贝尔奖金。事隔４年之后，福...

三磷酸腺苷-嘌呤受体P2X配体门控离子通道7介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症小体在痛风性关节炎中的机制研究进展

痛风是嘌呤代谢障碍和/或尿酸排泄减少使血尿酸持续升高而导致尿酸盐结晶（monoso-dium urate，MSU）析出并沉积在关节或关节周围组织中引起关节肿痛的炎症性疾病，其主要的临床表现为反复发作的急性痛风性关节炎。一般认为，MSU刺激IL-1β分泌引起关节肿痛是痛风的主要发病机制，但该机制不能解释为何多数高尿酸血症患者不出现痛风发作。

寡聚核苷酸多种不同结构的圆二色谱研究

寡聚核苷酸在一定条件下可形成双链、三链、四链等多种不同结构 ,这些结构的CD谱存在明显的不同 .其共同的谱图特征是在 2 40nm处有一负峰 ,而在 2 6 0～ 30 0nm处则表现出各自的特异性 ,许多因素诸如 :各条链的极性 ,糖环的折叠 ,核苷键的取向以及碱基的堆积和序列等均不同程度地影响其结构而使其谱图展示出多样性和复杂性 .通过对这些谱图的比较和研究 ,将有助于我们对其结构的了解和新结构的预测 ,从而为进一步探索其潜在的生物学功能提供了依据 .

茱萸丸抑制氧化三甲胺介导的ROS/TXNIP/NLRP3信号通路诱导血管内皮细胞焦亡

目的研究茱萸丸对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响及其相关机制。方法采用高脂饲料喂养雄性低密度脂蛋白受体敲除(low density lipoprotein receptor knockout,LDLR−/−)小鼠诱导AS模型,造模周期为12周。造模成功的50只LDLR−/−小鼠随机分成模型组及茱萸丸低、中、高剂量(130.54、261.08、552.16 mg/kg)组和阿托伐他汀(10.40 mg/kg)组,每组10只,C57BL/6J小鼠10只作为对照组。给药12周后,采用生化法检测小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)、Masson、油红O染色观察小鼠主动脉的病理学改变;ELISA检测血清中白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;超高液相色谱串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中三甲胺(trimethylamine,TMA)、氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)含量;16S rRNA技术检测小鼠粪便中肠道菌群物种组成差异;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;免疫荧光及Western blotting检测小鼠主动脉硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NOD like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)蛋白表达;qRT-PCR检测主动脉硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)、TXNIP、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)mRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平升高(P<0.01),HDL-C水平显著下降(P<0.01),主动脉内膜大面积增厚,形成明显的泡沫细胞,脉壁胶原蛋白沉积增多,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数降低(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度显著下降(P<0.01),主动脉中ROS含量增加(P<0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平升高(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,茱萸丸组血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),主动脉斑块、血管壁泡沫细胞及胶原蛋白沉积均呈现不同程度的改善,血清中IL-18、IL-1β、ROS、TMA、TMAO水平显著降低(P<0.05、0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),Chao1、Ace以及observed species指数均明显升高(P<0.01),拟杆菌门、粪杆菌属、布劳特氏属、乳杆菌属菌群丰度升高(P<0.05、0.01),厚壁菌门菌群丰度降低(P<0.05),主动脉中ROS含量减少(P<0.05、0.01),TXNIP、NLRP3蛋白与mRNA表达水平显著降低(P<0.01),TRX、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论茱萸丸能够显著抑制LDLR−/−AS小鼠主动脉病理改变、调节肠道菌群中有益菌和有害菌的相对丰度,减少TMAO生成,抑制ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,改善炎症反应,减轻内皮细胞损伤,从而发挥抗AS的作用。

PEG-PLGA纳米粒子介导反基因寡核苷酸体外抗前列腺癌作用研究

目的验证包载反雄激素受体基因三螺旋形成寡核苷酸(TFO)的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PEG-PLGA)纳米粒子(TFO-NPs)对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法采用改良自乳化溶剂挥发法制备TFO-NPs并进行体外物化表征。将TFO-NPs、脂质体包载的TFO(TFO-Lip)和裸TFO分别转染体外培养的LNCaP细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Westernblot方法检测AR基因表达。结果TFO-NPs平均粒径128nm,载药量为1.02%,包封率为72.28%,在体外具有缓释作用。LNCaP细胞对TFO-NPs和TFO-Lip的摄取率显著高于裸TFO。TFO-NPs和TFO-Lip对LNCaP细胞的抑制率分别为(54.5%±6.2%)和(50.6%±6.1%)显著高于裸TFO,(7.8%±0.8%)(均P<0.05)。TFO-NPs和TFO-Lip处理组LNCaP细胞的雄激素受体表达水平显著低于裸TFO处理组。TFO-NPs和TFO-Lip处理组的转染效率、细胞抑制率和雄激素受体表达水平差异均无显著性。结论成功制备了TFO-NPs,为反基因治疗前列腺癌的研究提供了有效基因载体。

反基因及反义寡核苷酸体外抗前列腺癌作用的研究

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对前列腺癌细胞雄激素受体(AR)表达和细胞增殖的影响。方法设计并合成针对AR基因的TFO和ASO,经脂质体介导转染前列腺癌细胞株LNCaP。MTT法检测细胞增殖活性,RTPCR检测AR基因表达,免疫组化法检测AR蛋白表达,放射免疫分析检测PSA表达。结果转染后24、48、72h,TFO组LNCaP细胞ARmRNA平均表达水平分别为0.25、0.33、0.46,显著低于ASO组的0.44、0.54、0.60,P<0.05;TFO对LNCaP细胞的生长抑制率(51.8%、65.8%、36.2%)显著高于ASO(28.8%、42.6%、17.5%),P<0.05。TFO对AR蛋白表达的抑制作用强于ASO。转染后24hPSA表达水平[(0.5±0.1)ng/ml]显著低于ASO组[(0.8±0.2)ng/ml],P<0.05。结论在LNCaP细胞TFO对AR表达和癌细胞增殖的抑制作用明显强于ASO,反基因策略对于前列腺癌的治疗具有重要研究价值。

P2X7R拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究

目的探讨嘌呤能P2X7受体(P2X7R)拮抗剂——氧化三磷酸腺苷(OxATP)和亮蓝G(BBG)在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体活化和慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。方法 40只C57BL/6小鼠随机均分为正常对照组、CP模型组、Ox ATP组和BBG组。除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外,其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作CP小鼠模型(6周)。造模结束后,CP模型组、Ox ATP组和BBG组分别予以腹腔注射生理盐水、Ox ATP(20μL,300μmol/L)和BBG(20μL,10μmol/L)处理,连续注射2周。然后处死各组小鼠并取胰腺组织,行病理学检查,以HE染色对胰腺病理组织学(炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度)进行评分,天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估;免疫组化法检测胰腺P2X7R、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)中的累积光密度(IOD)值。结果与正常对照组比,CP模型组炎症损伤组织学评分增加,胰腺纤维化程度显著增加,P2X7R、NLRP3和Caspase-1免疫组化IOD值显著升高(P<0.05);与CP模型组相比,Ox ATP和BBG组炎症损伤组织学评分降低,HE染色纤维化评分、天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色均显著减轻(P<0.05),胰腺P2X7R、NLRP3和Caspase-1 IOD值均明显降低(P<0.05)。结论 P2X7R拮抗剂Ox ATP和BBG能够显著减轻CP小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度,阻断P2X7R-NLRP3炎性体信号通路,这有望成为治疗CP及其纤维化进程的一种潜在新策略。

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展 ,抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究 ,利用基因重组、转基因及反义核酸等技术 ,在细胞水平或通过动物实验阶段的研究 ,基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本文对转基因干扰素、DNA疫苗 (DNA免疫 )、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸 (反基因寡核苷酸 )。

卟啉锰-TFO-吖啶的合成

目的 合成卟啉锰 TFO 吖啶化合物。方法 合成含 7 去氮 2 脱氧黄嘌呤的TFO ;以吖啶修饰TFO的 3′末端 ,以 6碳氨基连接臂修饰TFO的 5′末端 ;四苯基卟啉四羧酸经金属化、酯化后 ,与TFO的 5′末端偶联 ;薄层层析纯化 ,质谱、紫外光光谱分析鉴定。结果 薄层层析结果显示在对照寡核苷酸带前方有一条淡黄色的吖啶 TFO带 ;紫外光光谱分析显示卟啉锰 TFO 吖啶化合物同时具有 2 60nm处寡核苷酸的特征吸收峰和 468nm处卟啉锰的特征吸收峰。质谱分析结果证实 ,卟啉锰 TFO 吖啶化合物分子量实测值与理论值一致。结论 合成了卟啉锰 TFO

残粒胆固醇的代谢过程、致动脉粥样硬化机制及其相关靶向生物制剂应用研究进展

残粒胆固醇指富含甘油三酯脂蛋白经脂蛋白酯酶分解代谢后形成的残粒中包含的胆固醇,具有致动脉粥样硬化作用,与心血管疾病风险增加相关,被认为是低密度脂蛋白胆固醇达标患者的残余心血管风险之一。载脂蛋白CⅢ(ApoC-Ⅲ)和血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)是脂质代谢过程中关键的调节因子,通过抑制脂蛋白酯酶的活性及肝脏对残粒胆固醇的摄取,引起残粒胆固醇水平升高。临床应用靶向抑制ApoC-Ⅲ和ANGPTL3功能的抗体、反义寡核苷酸、小干扰RNA生物制剂具有良好的降脂疗效,在降低残粒胆固醇水平及动脉粥样硬化性心血管疾病残余风险防控中具有良好应用前景。

乙型肝炎病毒(HBV)反基因与HBV的结合及对HBV复制的影响

目的 研究三螺旋形成寡核苷酸与ＨＢＶ基因的结合情况及其对ＨＢＶ复制的影响。方法 合成一段能与ＨＢＶ核心启动子位点（１７３４～１７５３ｎｔ）形成三螺旋的寡核苷酸（ＴＦＯ２０）并标记上生物素，分别用脂质体－ＴＦＯ２０及裸ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞，用链酶亲和素－生物素法（ＳＡＢＣ）检测其转染效率及其与ＨｅｐＧ２．２．１５细胞中ＨＢＶ ＤＮＡ的结合情况；并采用ＥＬＩＳＡ、半定量逆转录（ＲＴ）－ＰＣＲ及荧光定量ＰＣＲ法分别检测经寡核苷酸处理的ＨｅｐＧ２．２． １５细胞及空白对照细胞上清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ及细胞中ＨＢＶ ＲＮＡ的水平。结果 脂质体－ＴＦＯ２０转染ＨｅｐＧ２．２．１５细胞的效率可达８０％，而裸ＴＦＯ２０转染率最高为４０％；ＴＦＯ２０主要定位于细胞核及胞浆中。ＴＦＯ２０处理组细胞上清中ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ含量分别较空白对照组降低３７．０％及７８．２％，ＨＢＶ ＤＮＡ水平较空白对照组明显降低；而细胞中２．４ｋｂ／２．１ｋｂ ＲＮＡ、３．５ ｋｈ／３．４ ｋｂ ＲＮＡ亦分别降低３１．６％及７０．２％。结论 ＴＦＯ２０通过脂质体包裹后可以很好地进入细胞并与ＨＢＶ ＤＮＡ结合；ＴＦＯ２０能?

Caspase-1对小胶质细胞中NOD2介导的免疫耐受的调节

目的观察小胶质细胞中是否存在核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)介导的免疫耐受现象,并探讨其与Caspase-1的关系。方法分别采用不同浓度的胞壁酸二肽(MDP)或肺炎链球菌刺激小胶质细胞24 h,Western blotting检测各组NOD2和核因子κB(NF-κB)的表达情况,ELISA检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况;用MDP(100μg/m L)分别预刺激细胞0、3、24 h后再用同浓度MDP刺激24 h,用ELISA检测IL-6和TNF-α的表达量;Caspase-1活性被ATP激活或被其抑制剂抑制后检测IL-6和TNF-α的变化情况。结果与无刺激处理相比,MDP或肺炎链球菌刺激小胶质细胞24 h后,NOD2、NF-κB、IL-6和TNF-α的表达量均明显增加(P<0.05);MDP分别预刺激细胞0、3、24 h后再刺激24 h,发现预刺激3 h和24 h的细胞IL-6和TNF-α的表达量均低于预刺激0 h;通过ATP激活Caspase-1活性可抑制细胞IL-6和TNF-α的表达,抑制Caspase-1活性可促进IL-6和TNF-α的表达。结论长时间MDP刺激可以诱导小胶质细胞的免疫耐受现象,此现象与Caspase-1的活性具有一定关系。