基于SSR标记的钱塘江中下游三角鲂4个放流苗种群体遗传多样性和遗传结构检测

为检测钱塘江中下游三角鲂放流苗种群体遗传多样性和遗传结构,采用毛细管电泳基因分型技术,基于9对荧光标记SSR引物对来自4个放流苗种群体的192尾样本进行扩增和基因分型测序。结果表明,各群体单个位点检测到的等位基因数Na均值为(20±2)~(24±2),有效等位基因数Ne均值为(10.76±1.51)~(13.66±1.33),其中余杭群体等位基因数Na和有效等位基因数Ne最大,建德和桐庐群体的这2项指标大体相当;4个群体Shannon’s信息指数I均值为(2.55±0.13)~(2.83±0.09);4个群体观测杂合度Ho均值为(0.83±0.08)~(0.94±0.03),期望杂合度He均值为(0.88±0.02)~(0.92±0.01),绝大多数位点表现出杂合子过剩;余杭、建德、桐庐、富阳各群体的私有等位基因数依次为54、9、15、17个;4个放流三角鲂苗种群体遗传多样性处于较高水平,部分群体出现了杂合子过剩和等位基因丢失现象。分子方差分析显示,98.7%的遗传变异来自群体内的个体间,1.3%遗传变异来自群体间,4个放流群体间遗传分化指数为0.013~0.017,遗传分化很小(0<FST<0.05)。主坐标分析(PCoA)与群体遗传结构分析结果具有一致性,所有个体被分成2个理论类群,但每个类群都包含4个群体的个体,各类群的个体来源没有明显的差异。本研究检测了三角鲂4个放流苗种群体种质遗传现状,以期将来更好地指导三角鲂的增殖放流。

三角鲂foxl2基因克隆和时空表达特征及EE2对其表达的影响

为探究foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在三角鲂(Megalobrama terminalis,M.terminalis)性腺发育过程中的功能,该研究克隆了三角鲂foxl2基因的开放阅读框(open reading frame, ORF),分析了其编码蛋白的结构特征,检测了其在胚胎发育不同时期和成体不同组织中的表达情况,并研究了腹腔注射性激素17α-乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol, EE2)对foxl2表达的影响。结果表明:三角鲂foxl2基因ORF为921 bp,共编码306个氨基酸,具有保守的叉头(forkhead, FH)结构域,与斑马鱼(Danio rerio)FOXL2的同源性较高达到96%。三角鲂FOXL2蛋白与鲤科鱼类亲缘关系较近,而与人类和小鼠相距较远。qRT-PCR结果显示,foxl2 mRNA在三角鲂整个胚胎发育过程中均表达,在受精后24、48、60 h表达量较高(P<0.05);在卵巢中的表达量显著高于精巢和其他组织(P<0.05),在肌肉、皮肤、脾、肾和肠组织中弱表达或不表达,表达具有组织特异性。腹腔注射EE2对三角鲂foxl2 mRNA表达调控结果显示,在脑组织中,雌鱼foxl2 mRNA在注射24 h达到峰值且显著高于对照组和雄鱼(P<0.05);在性腺组织中,foxl2 mRNA在注射24 h后的卵巢和精巢中表达量最高,且在36 h的卵巢中持续高表达(P<0.05),表明EE2能够明显促进三角鲂脑和卵巢foxl2 mRNA的表达。研究表明,foxl2基因在三角鲂性腺中呈性别二态性表达,推测其在卵巢发育和功能维持方面起重要作用,foxl2可能是与性类固醇激素相互作用来调节三角鲂性腺发育和功能维持。该研究可为三角鲂性腺发育及性别调控机制提供基础资料。

三角鲂(Megalobrama terminalis)脑垂体的超微结构

研究三角鲂(Megalobramaterminalis)脑垂体的超微结构.脑垂体由神经垂体和腺垂体构成.神经垂体组织中存在A1、A2和B型神经分泌纤维和一种脑垂体细胞.腺垂体由促肾上腺皮质激素分泌细胞(ACTH)、催乳激素分泌细胞(PRL)、生长激素分泌细胞(GH)、促甲状腺激素分泌细胞(TSH)、促性腺激素分泌细胞(GTH)、促黑色素分泌细胞(MSH)、PAS-反应细胞和一种非分泌类型的星状细胞(SC)构成.并讨论三角鲂神经垂体和腺垂体的结构特点.

三角鲂（Megalobrama terminalis）精子与青鱼（Mylopharyngodon piceus）卵子的受精细胞学研究

以青鱼(Mylopharyngodon piccus)为母本和三角鲂(Megalobrama terminalis)为父本的杂交虽是不同亚科的远缘杂交，但有正常的受精细胞学程序和常规的细胞分裂(卵裂)方式。这些实验结果，为开展鱼类远缘杂交提供了受精生物学的理论基础；同时还证实鱼类远缘杂交的异种精子不仅有激活卵子的作用，而且参与了遗传物质的组成，使父本的性状能够在杂种后代表现出来。实践证明，鱼类遗传育种可以通过远缘杂交的途径获得杂种优势。青鲂杂种一代既具有母本青鱼的性状，也兼有父本三角鲂的特征，通过养殖试验已在渔业生产中取得成效(拟另文发表)。

微塑料暴露下三角鲂体内恩诺沙星代谢和毒性研究

为了研究微塑料对恩诺沙星在三角鲂体内累积规律的影响,以及对三角鲂造成的生理毒性,本试验采用高效液相色谱串联质谱(LC-MS)技术对三角鲂体内各组织中恩诺沙星的浓度进行测定,并检测了不同试验组中三角鲂脑组织中乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化。研究结果表明,在淡水环境中,由于微塑料的存在,恩诺沙星在三角鲂不同组织内的累积浓度提升了2~4倍,但微塑料的存在也缓解了恩诺沙星对三角鲂造成的神经毒性。

壳聚糖及其复合物对三角鲂生长及鱼体成分的影响

研究了壳聚糖及其复合物对钱塘江三角鲂(Megalobrama terminalis)生长及鱼体成分的影响,试验为期60 d。结果显示:添加壳聚糖、壳聚糖复合物A和壳聚糖复合物B均有较好的促长效果;与对照组相比,三角鲂平均体增重分别提高15.91%(P(0.01)、19.19%(P(0.01)和21.65%(P(0.01),饲料系数分别下降13.85%(P(0.01)、16.41%(P(0.01)和17.95%(P(0.01)。添加壳聚糖、壳聚糖复合物A和壳聚糖复合物B使三角鲂肥满度分别较对照提高6.17%(P(0.05)、5.73%(P(0.05)和7.05%(P(0.01),可食部分增加。壳聚糖复合物B使三角鲂肌肉水分下降1.29%(P(0.01);壳聚糖、壳聚糖复合物A和壳聚糖复合物B使肌肉粗蛋白分别提高4.11%(P(0.01)、4.15%(P(0.01)和9.68(P(0.01)。壳聚糖复合物B使肌肉非必需氨基酸含量降低8.21%(P(0.05),使肌肉丝氨酸含量提高16.78%(P(0.05);壳聚糖复合物A和B使肌肉脯氨酸含量分别下降4.30%(P(0.05)和7.17%(P(0.01)。

鲂属团头鲂、三角鲂及广东鲂种间遗传关系及种内遗传差异

采用形态判别、同工酶分析和RAPD分析相结合的方法 ,从 3个层次研究分析了鲂属团头鲂、三角鲂和广东鲂的种间亲缘关系和种内遗传差异。结果表明 :(1) 3种鲂在形态可数性状上差异不显著 ,而可量性状与框架分析揭示团头鲂与三角鲂亲缘关系较近 ,它们同广东鲂差异较大 ;(2 )团头鲂和三角鲂均具有MDH同工酶的s Mdh D位点 ,而广东鲂未见 ,引物S11扩增的结果在 3种鲂间均显示种的特异性 ,这些同工酶谱带和DNA扩增带可作为 3种鲂的种间分子标记 ;(3) 3种鲂种间亲缘关系在三个研究层面上相互吻合 :即广东鲂与团头鲂、三角鲂差异较大 ,亲缘关系较远 ,而三角鲂和团头鲂之间差异小 ,亲缘关系较近 ;(4 )同工酶和RAPD分析揭示 ,三角鲂种内遗传多样性显著地高于广东鲂和团头鲂。

钱塘江三角鲂线粒体基因组测序及其结构特征分析

为了研究钱塘江流域三角鲂(Megalobrama terminalis Richardson)线粒体基因组结构特征及鲌亚科鱼类的系统进化关系,通过PCR扩增、测序、软件拼接获得了钱塘江三角鲂线粒体基因组全序列,GenBank登录号为MN725725。结果表明,钱塘江三角鲂线粒体基因组序列全长为16 621 bp,碱基组成分别为A(31.23%)、G(16.17%)、C(27.87%)和T(24.73%);共有13个蛋白编码基因,22个tRNA基因,2个rRNA基因,NAD6、tRNA-Gln、tRNA-Ala、tRNA-Asn、tRNA-Cys、tRNA-Tyr、tRNA-Ser(UCN)、tRNA-Glu和tRNA-Pro等基因编码在L链上,其余基因均在H链上编码。钱塘江三角鲂线粒体基因组全序列与蛋白编码基因的A+T含量分别为55.97%和55.86%,具有明显的AT偏好性。线粒体基因中存在2个散在重复序列,分别位于线粒体控制区中终止结合序列区的前端和控制区3′的末端。在22个tRNA基因中,除了tRNA-Ser(AGY)外,均具有典型的三叶草二级结构。基于BLAST比较,钱塘江三角鲂与黑龙江流域的三角鲂一致性为99.76%,与珠江流域三角鲂一致性为99.87%。基于15种隶属于7属的鲌亚科鱼类线粒体基因组全序列构建的系统进化树,鲂属与鳊属亲缘关系比与鲌属的亲缘关系上较近,与■属、半■属和细鳊属亲缘关系上较远。

壳聚糖及其复合物对三角鲂血清生化指标及免疫功能的影响

以钱塘江三角鲂(Megalobrama terminalis)为实验对象,研究并探讨了壳聚糖及其复合物A和B对三角鲂血清生化指标及免疫功能的影响及其作用机制.实验结果表明,与对照组相比,壳聚糖复合物B使血清总蛋白含量提高21.88%(P＜0.05),复合物A和B使血清碱性磷酸酶活性分别降低13.10%(P＜0.05)和36.21%(P＜0.01),复合物B使血清甘油三酯降低27.22%(P＜0.01),壳聚糖及其复合物A和B使尿素氮分别降低31.17%(P＜0.01)、30.09%(P＜0.01)和29.63%(P＜0.01),壳聚糖复合物B使高密度脂蛋白降低35.33%(P＜0.01),壳聚糖及其复合物A和B使低密度脂蛋白分别提高61.06%(P＜0.01)、68.14%(P＜0.01)和60.18%(P＜0.01);壳聚糖复合物A和B使免疫球蛋白IgA分别提高42.86%(P＜0.05)和71.43%(P＜0.01),使IgG分别提高14.50%(P＜0.01)和25.13%(P＜0.01);壳聚糖及其复合物A和B使血清T-SOD活性分别提高20.64%(P＜0.01)、30.56%(P＜0.01)和28.45%(P＜0.01),壳聚糖复合物B使血清MnSOD活性提高67.93%(P＜0.01),壳聚糖复合物A使肌肉中SOD活性提高22.99%(P＜0.05),壳聚糖复合物A和B使肝脏中SOD活性分别提高78.06%(P＜0.01)和76.61%(P＜0.01).结论为,壳聚糖及其复合物能加强机体的蛋白质合成代谢,提高血清免疫球蛋白含量和超氧化物歧化酶活性,从而增强三角鲂的免疫功能.

池塘内循环流水养殖下太湖鲂鲌(翘嘴鲌(♀)×三角鲂(♂))肠道微生物群落变化的研究

为研究池塘内循环流水养殖(In-pond Raceway,IPR)模式下太湖鲂鲌(翘嘴鲌(♀)×三角鲂(♂))肠道微生物群落结构的变化,以传统池塘养殖作为对照组,采用16SrRNA高通量测序方法分析了IPR养殖模式下太湖鲂鲌肠道的菌群结构及环境水体微生物多样性的变化。试验结果表明,IPR模式下太湖鲂鲌肠道微生物群落发生了明显的变化,在门分类水平,梭杆菌门(Fusobacteria)成为绝对优势菌,所占丰度为92.47%;对照组的优势菌由梭杆菌门、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)组成,三者所占的丰度分别为34.45%、33.30%和21.30%。在养殖水环境中,两种养殖模式的微生物群落数均大于肠道样本,且二者优势菌不同;IPR水环境的优势菌为蓝细菌(Cyanobacteria,36.53%),其次为放线菌门(Actinobacteria,24.67%);对照组水体中的优势菌为放线菌门和变形菌门,分别占细菌总数的38.99%和28.15%。多样性指数结果表明,水环境中的微生物群落Shannon多样性指数、Chao1指数高于肠道样本,IPR养殖对象肠道微生物群落多样性最低。本研究结果揭示,池塘内循环流水高密度养殖模式下,太湖鲂鲌的肠道微生物结构发生了一定的改变,微生物群落多样性降低,应注意该模式下养殖对象的肠道健康,加强养殖管理。

三角鲂与团头鲂正反杂交F_1的遗传性状

采用聚类分析、主成分分析和判别分析3种数理统计方法,对团头鲂、三角鲂及其正反杂交F_1的比例性状和框架参数进行分析,探讨了亲本形态性状在子代中的遗传传递情况。结果表明:(1)正反交F_1形态都表现出较多的母性遗传特征,但三角鲂母本对杂交F_1遗传特征的影响强于团头鲂母本。(2)躯干部特征、头尾轴特征及背棘等为区分团头鲂、三角鲂及其正反杂交F_1的重要因子。

不同蛋白质、脂肪水平对三角鲂生长性能及体成分的影响

试验采用4×4双因子设计，设计蛋白水平25％、30％、35％及40％，脂肪水平2％、4％、6％及8％，探讨不同蛋白质、脂肪水平对三角鲂[（19．1±0．52）g]生长性能及体成分的影响。试验鱼在1．0m×1．0m×1．5m的网箱中进行养殖，每天投喂3次，试验周期8周。结果表明，不同蛋白质和脂肪水平对三角鲂增重率、饲料系数、摄食率、特定生长率、蛋白质效率、肝体比、脏体比及全鱼的蛋白质、脂肪、灰分含量的影响存在交互作用（P〈0．05）。其中，35％蛋白水平及6％脂肪水平下，三角鲂的增重率、饲料系数、特定生长率及成活率等指标优于其它各组。40％蛋白质水平下三角鲂肝体比显著高于25％与30％水平（P〈0．05），但与35％水平之间无显著性差异（P〉0．05）；不同蛋白质水平下，三角鲂脏体比无显著性差异（P〉0．05）；不同脂肪水平下，三角鲂肝体比无显著性差异（P〉0．05），2％脂肪水平组的脏体比显著低于其它各组（P〈0．05），其它组之间无显著性差异（P〉0．05）。蛋白质和脂肪水平对三角鲂肥满度无显著性影响（P〉0．05），蛋白质水平在25％～35％之间时，三角鲂全鱼蛋白水平有升高趋势，当蛋白含量为40％时，全鱼蛋白含量却显著低于其它各组（P〈0．05）。不同脂肪水平对三角鲂鱼体蛋白质、脂肪及灰分含量的影响差异显著（P〈0．05），但却无显著的规律性。综合分析以上结果，以增重率、饲料系数、特定生长率、成活率及鱼体蛋白质含量等指标为主要参考对象，本试验条件下，三角鲂鱼种的适宜蛋白质及脂肪水平分别为35％和6％左右。

三角鲂与团头鲂鱼体营养成分比较分析

对三角鲂与团头鲂鱼体常规养分、氨基酸、脂肪酸和微量元素的组成和含量进行了比较分析。结果表明:三角鲂肥满度极显著低于团头鲂(P<0.01),去内脏比显著高于团头鲂(P<0.05),比肝与肠脂比两指标极显著低于团头鲂(P<0.01);三角鲂肌肉水分和粗蛋白含量显著高于团头鲂(P<0.05),肌肉粗脂肪含量显著低于团头鲂(P<0.05);三角鲂肌肉中必需氨基酸含量、半必需氨基酸含量和氨基酸总量均高于团头鲂肌肉中含量,但两者之间三指标差异均不显著;三角鲂肌肉含高不饱和脂肪酸量较多,其不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的比值明显高于团头鲂;三角鲂肌肉中微量营养元素含量与团头鲂肌肉无显著差异(P>0.05)。

定量蛋白质组学揭示三角鲂和团头鲂响应嗜水气单胞菌侵染机制变化

细菌性败血症对鱼类危害严重,为探究鲂属鱼类不同抗性品种响应病原菌嗜水气单胞菌的抗性机制,以三角鲂(高抗)和团头鲂(易感)肝组织为材料,采用非标记定量蛋白质组学技术分析其在嗜水气单胞菌侵染胁迫后3、10和24h与对照组0h(未感染)肝组织蛋白质组的变化,对差异表达蛋白质进行质谱鉴定、相对定量和生物信息学分析。结果显示:三角鲂和团头鲂在嗜水气单胞菌侵染下,分别有46个和29个蛋白质在侵染后各时期的表达丰度相比对照都发生了显著变化。通过基因本体(gene ontology,GO)功能注释发现,相对于团头鲂,三角鲂中氧化还原蛋白质比例从7%增加到13%,且发现一类新的β-免疫球蛋白(β-globin)在各时期分别上调表达了1.64、3.44和1.93倍。生物信息学分析进一步表明,三角鲂在响应嗜水气单胞菌侵染过程中可能特异性地启动了包括戊糖磷酸途径、脂肪酸代谢、亮氨酸代谢途径和β-globin高表达的协同抗性机制,从而抵御病原菌入侵。该研究成果为后续深入揭示鱼病互作分子机制及鲂属鱼类抗病新品种选育提供了重要的前期理论研究基础。

丝兰提取物对三角鲂幼鱼生长性能、饲料利用及消化酶活性的影响

为检验丝兰提取物对三角鲂生长性能、饲料利用、消化酶活性及肠道结构的影响,在基础饲料中分别添加0%(Y0)、0. 05%(Y1)、0. 15%(Y2)、0. 25%(Y3)、0. 35%(Y4)和0. 45%(Y5)的丝兰提取物投喂试验鱼56 d,每天饱食投喂2次。研究结果表明,随着丝兰提取物添加水平的增加,三角鲂幼鱼体末体均重、增重率和特定生长率呈先上升后下降趋势。试验组Y3具有最高的增重率和最低的饵料系数。与对照组Y0相比,0. 15%(Y2)、0. 25%(Y3)组肝脏胰蛋白酶活性和淀粉酶活性显著提高(P<0. 05)。综上所述,在饲料中添加一定水平的丝兰提取物可显著促进三角鲂的生长和饲料利用并提高消化酶活性。以饵料系数作为主要指标,三角鲂幼鱼其最适添加水平为0. 236%。

厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)神经肽Y cDNA克隆和序列分析

利用RT-PCR的方法获得了厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)NPY基因的编码序列。结果显示:厚颌鲂NPY基因长度为302 bp,包含了NPY基因291 bp的整个开放阅读框,共编码96个氨基酸,其分子量预测值为10987.4,理论等电点为5.72。通过ClustalX软件,将厚颌鲂与21个物种NPY的氨基酸序列进行比对,再结合Blastp分析的结果发现,厚颌鲂NPY氨基酸序列与鲤、中华倒刺鲃、鲫、斑马鱼、岩原鲤等鲤科鱼类的同源性最高,其同源性分别为100%、97%、95%、93%、93%。根据包括厚颌鲂在内的22个物种的NPY氨基酸序列的同源性构建进化树,其同源性与各鱼种分类地位一致。

基于微卫星标记的钱塘江中下游三角鲂亲本群体和自然捕捞群体遗传多样性及遗传结构

为掌握三角鲂Megalobrama terminalis不同群体的遗传多样性及遗传结构,以钱塘江中下游4个良种场亲本群体(湖州的景山JS和明兴MX群体,杭州的瓜沥镇GLZ和萧乡XX群体)和1个钱塘江自然捕捞群体(BL)为研究对象,利用微卫星分子标记结合毛细管电泳基因分型技术,基于8对荧光标记SSR引物对来自5个群体的768尾样本进行了扩增和基因分型测序。结果表明:各群体单个位点检测到的等位基因数(N_(a))平均值为(10±1)~(39±7),有效等位基因数(N_(e))平均值为(6.60±0.98)~(14.22±3.08),5个群体Shannon's信息指数(I)平均值为(2.02±0.14)~(2.85±0.21),其中,明兴亲本群体的N_(a)、N_(e)和I值最小,BL群体的这3项指标明显高于其他群体;5个群体的观测杂合度(H_(o))平均值为(0.96±0.02)~(0.98±0.01),在绝大多数位点上H_(o)均大于期望杂合度(H_(e));分子方差分析显示,遗传变异主要来自群体内的个体间(占94.47%),群体间的遗传变异占5.53%;4个亲本群体间遗传分化程度较小(0<F_(ST)<0.05),BL群体与部分亲本群体(如JS和XX群体)间存在中等遗传分化(0.05<F_(ST)<0.15);主坐标分析(PCoA)与群体遗传结构分析结果具有一致性,所有个体被分成2个理论类群,其中,绝大部分BL群体的个体自成一个类群,少数BL群体的个体与其他4个亲本群体的个体聚集成另一个类群。研究表明,钱塘江中下游三角鲂群体遗传多样性处于较高水平,亲本群体普遍出现杂合子过剩和部分等位基因丢失现象。

饲料中添加氧化三甲胺对三角鲂生长性能及肌肉组成的影响

试验在三角鲂幼鱼饲料中添加0、0.02%、0.04%、0.08%及0.15%的氧化三甲胺,研究其对三角鲂生长性能、肌肉组成及肌肉系水力的影响。结果表明:添加一定水平的氧化三甲胺对三角鲂幼鱼增重率、摄食率、饵料系数、特定生长率、腹脂率、肌肉系水效果及粗脂肪含量等产生积极的影响。试验以生长为主要评价指标,经回归分析预测三角鲂饲料中的氧化三甲胺添加水平为0.082%。

我国三角鲂种质资源的研究进展

三角鲂Megalobrama terminalis肉质鲜美、适应性强,是一种适合不同地域多种养殖方式的重要淡水经济鱼类。三角鲂曾广泛分布于我国多个流域,但过度捕捞和环境污染严重影响了野生资源。目前,仅在钱塘江、金沙河水库和黑龙江分布有少量三角鲂,且黑龙江种群已处于实质意义上的濒危状态。本文概述了我国三角鲂的命名争议、其种质资源的收集、保存和繁育现状;从形态学、生化和分子生物学及生产性能等方面梳理了三角鲂种质鉴定和评价的最新研究进展;分析了三角鲂种质资源研究中存在的问题,并展望其养殖前景,以期为该优良资源的保护和利用提供参考。