鹅肝细胞的分离培养及其三酰甘油合成功能检测

本文旨在探讨鹅肝细胞的分离与原代培养方法,并对分离的肝细胞三酰甘油(TG)合成功能进行检测。采用改进的Seglen二步法分离纯化来自10日龄仔鹅肝脏的肝细胞,并进行原代培养。在倒置显微镜下观察肝细胞形态变化,MTT比色法测定细胞活性,用脂肪酸培养肝细胞并检测其形态、活性和细胞内TG含量的变化。结果显示,分离出的肝细胞形态完整、贴壁良好、活性高,细胞活性曲线与理论"S"型细胞生长曲线基本符合。另外,脂肪酸能增加肝细胞体积、活性和TG含量。结果表明,本研究成功分离了鹅肝细胞并进行了原代培养,肝细胞生酯功能正常。

洋甘菊总黄酮通过抑制ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成

目的:探究洋甘菊总黄酮通过调节ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成的药理作用机制。方法:用乙醇回流提取和大孔树脂分离纯化法获得洋甘菊总黄酮;高脂饲料喂养法建立ApoE^(-/-)小鼠高脂模型;以C57BL/6J小鼠为空白对照组,ApoE^(-/-)小鼠分成模型组,非诺贝特组(30 mg·kg^(-1)),洋甘菊总黄酮低、中、高剂量组(88,176,352 mg·kg^(-1));空白对照组和模型组分别用基础饲料和高脂饲料喂养,其余组小鼠高脂饲料喂养的同时灌胃给药干预8周。检测小鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏脂肪变性情况;免疫组化法检测二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)蛋白表达水平;Western Blot法检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、DGAT2蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠TG、TC、LDL-C、ACC、FAS、DGAT2水平均明显升高,HDL-C水平明显降低;与模型组相比,非诺贝特组和洋甘菊总黄酮各剂量组脂肪变性情况明显减轻。与模型组相比,非诺贝特组、洋甘菊总黄酮各剂量组TG、TC、LDL-C、ACC、FAS水平均明显降低,HDL-C水平明显升高;非诺贝特组和洋甘菊总黄酮中、高剂量组DGAT2水平明显降低。结论:洋甘菊总黄酮可以抑制ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成,改善血脂水平,可能与其下调ACC/FAS/DGAT2通路表达有关。

转lpaat和gpd1基因工程藻的快速筛选

根据莱茵衣藻密码子偏好性对源于油菜的溶血磷脂酸酰基转移酶基因(lpaat)和酵母的甘油3-磷酸酰基转移酶基因(gpd1)进行优化,获得适合莱茵衣藻表达的c-lpaat和c-gpd1基因,将其连接到p H124质粒中,构建相应的衣藻表达载体.通过珠磨法进行遗传转化,经Zeomycin抗性筛选和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证,获得导入c-lpaat和c-gpd1的转基因藻.利用半定量反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术筛选高效表达c-lpaat和c-gpd1的转基因藻,目的基因的转录水平分别提高了56.38%和75.95%,其藻细胞的脂肪酸含量也得到相应增加,与基因表达情况一致.证明莱茵衣藻可以有效表达外源高等植物的基因,利用半定量RT-PCR可以快速筛选出潜在的高油脂含量转基因工程藻株.

利用遗传工程提高油料作物含油量的研究进展

油料作物生产的种子油,可以食用,也可以作为能源原料。利用基因工程技术改良油菜、大豆等植物种子含油量及脂肪酸组成,主要集中在脂肪酸合成途经和三酰甘油合成途经,以及利用转录因子进行调控。采用遗传工程产生营养脂肪酸植物资源,能够实现人群健康愉快。