M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测肺炎克雷伯菌

一直以来,人类健康都在承受着病原微生不同程度的威胁,其中肺炎克雷伯菌是常见的条件致病菌之一,当机体免疫力低下时,容易发生炎性病变,从而引起肺炎、尿路感染和败血症等院内感染。综合分析肺炎克雷伯菌的致病特征,认为快速、准确地从患者血液中检出病原菌,对感染患者进行及时的治疗具有重要意义。方法 传统病原微生物的检测有培养法、免疫检测或者生化鉴定等方法,随着分子生物学技术不断发展,使病原微生物的快速和灵敏检测成为了可能,结合我们新型的聚合酶链式反应技术,产生新的实验方法,探讨分析M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测的可行性以及临床样本中病原菌核酸的最优提取方法。结果 在已经建立的PCR方法中的引物作为内引物的基础上,根据RAA的引物设计原则设计RAA反应过程的外引物,筛选出最优引物对,建立RAP的方法和检测技术,预期核酸扩增特异性达到100%,检测下限达到10CFU/mL。结论 分析肺炎克雷伯菌的病原学特征、基因的特点,建立了这套灵敏度高、特异性强、反应迅速可靠的M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术,使得检测血液样本中的肺炎克雷伯菌更具特异性,有助于发现早期细菌感染患者并给予其及时的治疗,为今后肺炎克雷伯菌的准确诊断提供了新的选择。

基于三重实时荧光聚合酶链反应构建黄牛和牦牛源性成分同步检测方法

目的建立一种拥有内源质控的三重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,用以快速鉴定肉和乳中黄牛和牦牛的源性成分。方法首先对黄牛肉、牦牛肉、黄牛奶、牦牛奶等7种动物产品进行特异性检测,同时通过稀释梯度方法验证此方法的绝对检出限(limit of detection,LOD),最后通过黄牛和牦牛肉掺假模拟试验确定该方法的相对灵敏度。结果该方法的特异性强,能特异性地检测到来源于黄牛和牦牛肉和乳的DNA,稳定扩增的内源质控有效地避免了假阴性结果,本方法针对黄牛奶的绝对LOD为2.5×10^(-3)5.0×10‒3 ng,针对牦牛奶的绝对LOD为2.5×10^(-3)5.0×10^(‒2)ng,本方法对黄牛肉和牦牛肉混合肉的相对灵敏度可达0.1%牦牛肉。结论所建立的三重实时荧光PCR方法特异性强、灵敏度高,可实现黄牛和牦牛源性以及内源质控的同步检测,又能通过内源质控排除实验假阴性结果。

PCR(聚合酶链式反应)仪温度特性的实验研究与分析

该文的目的是测量PCR温度的精确性和PCR仪上孔间以及不同循环和不同次测量的温度均一性。PCR程序:95℃(变性),30 s;55℃(退火),40 s;72℃(延伸),50 s;6个循环。孔和管内的温度重复性都很好;变性阶段,孔和管内液体温度与程序温度偏差较大,孔及管内的温度均一性和重复性均很好;孔内温度不能达到通常所需的温度(90℃以上)的比例为22.2%。退火和延伸阶段孔和管内的温差较小;有2个孔不能达到通常需要的温度。实际温度在各阶段停留的时间分别占设定时间的90%的比例较低。这些缺陷可能导致扩增结果假阳性或假阴性。

应用三重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡3种病毒性呼吸道传染病的研究

根据鸡新城疫病毒 (NDV )、鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)和鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)的基因文库 ,设计了3对分别与NDV、IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的NDV、IBV、ILTV核酸模板进行三重PCR扩增 ,结果均同时得到了 3条与设计相符的 310bp(NDV)、172 0bp(IBV)和 6 47bp(ILTV)三重PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该三重PCR技术能检出 10 pg的IBV、1pg的NDVRNA模板和 10 pg的ILTVDNA模板。

常用聚合酶链式反应(PCR)技术概述

聚合酶链式反应（PCR）技术在过去20多年中，经过不断改良以及与其他研究手段相结合，如今已发展为有数十种之多研究方法的一套技术手段。本文对较常用的几种PCR技术手段的原理、优点、缺点和应用等作了概述。

聚合酶链式反应(PCR)用于蚊虫分类鉴定的研究概况

在蚊虫分类中,长期以来都是以形态特征作为分类的依据,然而世界上重要的媒介蚊虫几乎都属于由几个甚至十几个近缘种组成的复合体,它们虽然外部形态相似,但其生态习性、分布区域和媒介效能等却可能有很大差异,所以对其进行正确鉴别具有重要的流行病学意义。然而许多复合体的相继发现,亲缘种的存在,使得单纯的形态分类学无法对其进行正确鉴别。虽然有些学者已经应用遗传杂交、同工酶、多线染色体及气相层析分析昆虫体表碳水化合物组分等方法对近缘种进行了分类研究,但都难以对亲缘种做出可靠鉴定或在流行病学调查中推广应用。 近30年来分子生物学技术迅速发展,显示其在蚊类鉴别应用中的极大潜力,为蚊虫分类学研究提供了许多新思路新方法。其中PCR技术由于原理简单,方法简便,敏感性高,标本材料极省,蚊类虫期、性别不限等优点,被广泛应用于蚊虫近缘种的分类鉴定中。Paskewitz等首先应用PCR技术,对冈比亚按蚊（An.gambiae）和阿拉伯按蚊（An.arbiebsis）进行分类鉴定。Porter和Collins对佛氏按蚊（An.freeborni）和赫氏按蚊（An hermsi）的rD-NA/ITS2区使用PCR法作蚊种鉴别,其他一些国内外学者在此方面也进行了一些研究,本文就该领域的研究现状及PCR技术应用于蚊虫分类的特点进行简要的概述。

聚合酶链式反应(PCR)技术在植物病害诊断中的应用

PCR技术是一项崭新的体外扩增基因的技术 ,已广泛应用于与生命相关的学科的研究。本文从植物病害检测的角度 ,探讨如何应用PCR技术来进行植物病害的检测。

聚合酶链式反应(PCR)——生命科学的重大突破

科学家们最近从2.5～3千万年前的白蚁化石中发现了世界上最古老的 DNA 遗传物质。这次实验没有采取传统的遗传学方法,而是采取了聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reac-tion)——一项以快速、简捷和无可比拟的敏感性著称于世界,能够检测极微量 DNA 样品的新技术。5年来.PCR 能从百万个正常细胞中检测出一个突变细胞,或从无数个细胞中发现肿瘤致病病毒的存在,因而一举成为检测肿瘤扩散和最早癌变的理想方法。PCR 技术于1985年由美国 Cetus

肺炎支原体快速聚合酶链式反应（PCR）法检测

本文根据Ｂｅｒｎｅｉ设计的肺炎支原体ＰＣＲ引物，采用国产的耐热ＤＮＡ聚合酶，建立了双温循环肺炎支原体ＰＣＲ快速检测法。４０例儿童肺炎咽拭子标本中，８例呈阳性结果。

聚合酶链式反应(PCR)技术鉴定啤酒腐败菌的最新进展

综述了PCR技术在啤酒腐败细菌鉴定方面的应用及最新进展 ;介绍了 3种PCR技术 ,特别讲述了利用这些技术对啤酒中乳酸菌的鉴定 ;并分析了PCR技术的局限性 ,对其应用前景进行了展望。

基于主成分分析的多重定量PCR荧光串扰校正

聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学常用的检测手段,主要用于对生物的DNA或RNA进行检测。由于荧光光谱重叠和滤光片过滤带宽限制,检测时所获得的荧光数据通常会包含荧光通道之间的串扰,串扰的存在使PCR结果分析变得复杂,并可能影响最终的检测结果。选择合适的光学元件,并确定通道间的补偿矩阵,可以降低甚至消除荧光串扰。目前荧光补偿矩阵大多通过迭代计算获得,还没有一种简单的方法可以从混合的多通道荧光数据中找到荧光补偿矩阵。为了快速获得荧光补偿矩阵,减小计算量,采用主成分分析法(PCA)中确定主成分的方式,基于搭建的测试平台进行单一染料实验,获得染料的荧光信号在各个检测通道的分布情况,计算得到荧光补偿矩阵。通过分析补偿矩阵,发现对于搭建的硬件系统,Cy5染料对Cy5.5通道串扰较大,串扰比例为8.76%,同时Cy5.5染料对Cy5通道串扰影响也相对较大,比例约为6.2%;其次是ROX染料对HEX通道串扰,比例约为2.68%;HEX染料对FAM通道串扰,比例约为1.58%;FAM染料对HEX通道串扰相对较小,比例约为0.25%,其余通道无明显串扰,与荧光光谱反映的结果一致。采用得到的荧光补偿矩阵对单一染料实验得到的原始荧光数据进行处理,有效去除了非目标通道的荧光串扰,实现了荧光通道数据的解耦,验证了方法的可行性。最后设计了染料颜色分辨实验,将不同浓度的多种染料进行组合测试,并采用所提出的方法将得到的数据进行荧光补偿。实验结果表明,荧光通道各自的线性相关性较高,五个荧光通道的线性相关系数r均大于0.99,该结果进一步验证了该补偿方法的有效性。

聚合酶链式反应(PCR)的原理和应用

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最近几年在分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破.这项新兴的生物技术非常迅速地形成常规的标准程序,为科学家提供了从微量的生物材料中快速得到大量特定遗传物质的实验手段,因而PCR技术在基础研究、医学、生物工程学和法医学等许多领域都有着重要的实际应用价值,并对原先建立的分子杂交、序列分析、基因克隆等现代分子生物学技术的发展给以巨大的推动作用。

DNA片段体外扩增技术——聚合酶链式反应(PCR)的原理与应用

随着分子生物学的发展,对特定核甘酸片段进行分离。纯化及扩增已成为基因分子生物学研究的中心问题。过去,人们为了从生物材料中获得某一段特定的DNA(基因)顺序或者进行其顺序分析或鉴定。

聚合酶链式反应(PCR)技术

聚合酶链式反应(PCR)技术,是八十年代中期发展起来的新技术,它的诞生改变了分子生物学研究的指导方法,本文综述了PCR技术的原理、操作方法及其在许多领域的广泛应用。随着PCR技术的进一步发展和完善,将进一步推动分子生物学的理论研究,拓展其应用领域。

微流控实时荧光聚合酶链式反应成像非均匀性的校正

综合参考标样法和定标校正法的思想,提出了一种用于校正微流控实时荧光聚合酶链式反应(PCR)系统荧光成像非均匀性的"多目标像素区域定标线性校正"算法,以提高其检测结果的准确性。以与PCR荧光标记物SYBR Green光谱特性相似的荧光素钠溶液为样本,检测了11种不同浓度的均匀荧光素钠溶液受激发射荧光信号的强度,分析了各个目标像素区域荧光强度和荧光素钠溶液浓度之间的线性响应关系,采用两点定标校正方法计算了CCD各个目标像素区域的校正系数矩阵。实验表明,3种浓度荧光素钠溶液的成像均匀度分别从校正前的71.28%、72.01%、70.73%提高到校正后的77.49%、80.07%、90.64%;微流控四腔芯片中相同浓度的DNA样品在PCR扩增阶段的Ct值相对标准偏差由校正前的4.38%、1.94%、3.31%减小到校正后的2.44%、0.79%、1.31%,显著提高了微流控实时荧光PCR检测结果的准确性。

聚合酶链式反应技术的研究进展

聚合酶链式反应技术自诞生以来 ,已在生物学及相关学科中得到了广泛应用 ,并得以不断的深入和发展。本文就近年来研究和发展出现的一些特殊PCR技术 ,如 :逆转录PCR、反向PCR、定量PCR、锚定PCR、重组PCR、长PCR、热起动PCR、免疫PCR、复合PCR、差向显示PCR等作一简述 ,以供参考。

硅-玻璃聚合酶链式反应微芯片对β-葡糖苷酸酶基因的扩增

聚合酶链式反应 (PCR)微芯片是基于微机电系统 (MEMS)制作 ,在微芯片上进行PCR反应 ,实现生物样品扩增的一项新技术 .介绍了硅 玻璃PCR微芯片的设计和制作、微反应腔的清洗和表面处理、借助外置温度控制系统进行PCR扩增反应以及扩增产物在琼脂糖凝胶电泳下的检测分析 ,实现了对 β 葡糖苷酸酶 (GUS)基因的有效扩增 ,扩增时间由原来的 90min缩短到现在的 37min .

激光技术在聚合酶链式反应微流控芯片中的应用

评述了激光技术在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)微流控芯片领域中的应用进展,包括激光技术在PCR微流控芯片微加工、微流体物理参数测量、温度循环控制以及芯片上在线产物检测(包括荧光实时定量/终点和毛细管电泳检测)中的应用。最后,展望了激光技术在未来基于PCR的微全分析系统(micro-total analysis system,μTAS)中的新应用。

聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究

本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性。经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0 008病毒血凝(HA)单位。这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点。