尼美舒利对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞体外增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中分别加入不同浓度的尼美舒利,作用24、48、72 h后,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,电镜观察细胞形态,Western blot法检测Cox/Bax/Bcl-2蛋白表达。结果尼美舒利能显著抑制TNBC干细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;并使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,引起明显的细胞凋亡。电镜可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量依赖。Western blot分析显示,尼美舒利作用细胞后,随着浓度的增加细胞COX-2和Bcl-2表达水平降低,但Bax表达水平增高。结论尼美舒利体外能够显著抑制TNBC干细胞增殖,诱导其凋亡,COX-2、Bcl-2及Bax等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的TNBC干细胞凋亡过程。

塞来昔布体外抑制三阴性乳腺癌干细胞的研究

目的研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖、凋亡、侵袭和黏附作用的影响,并初步探讨其发生机制。方法 CCK-8法检测细胞增殖活性;AV-PI双染法测定三阴性乳腺癌细胞凋亡率;用细胞黏附实验检测干预后干细胞的黏附抑制情况;Transwell侵袭实验检测塞来昔布对干细胞的侵袭抑制。结果塞来昔布可诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度组间比较以及同一浓度不同时间组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞黏附实验显示,各实验组细胞黏附Matrigel凝胶的能力与对照组比较均明显降低,Transwell实验显示,各实验组侵袭细胞数与对照组相比均明显减少,实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂塞来昔布体外可抑制三阴性乳腺癌干细胞体外增殖、侵袭、黏附和诱导其凋亡,其抑制作用与药物浓度和持续时间有关。

槐耳水提取物对三阴性乳腺癌干细胞特性的影响

目的:观察槐耳水提取物对乳腺癌干细胞(CSCs)特性变化的影响。方法:筛选鉴定三阴性乳腺癌CSCs,观察不同浓度槐耳水提取物作用后,YAP/TAZ RNA表达和EMT相关蛋白表达情况,分析每组细胞的差异,定位于细胞核,进行免疫组化分析。同时采用Western blotting、RT-PCR法比较槐耳水提取物处理后CSCs细胞株Hippo通路YAP/TAZ RNA表达情况。结果:槐耳水提取物能抑制三阴性乳腺癌CSCs基因蛋白水平的表达,能抑制YAP/TAZ RNA表达和EMT相关蛋白表达,槐耳水提取物对三阴性乳腺癌CSCs有明显增殖抑制作用,槐耳水提取物能促使CSCs细胞YAP蛋白表达水平及细胞核定位上调,YAP/TAZ RNA表达下调,对CSCs细胞株Hippo通路有明显抑制作用。结论:槐耳水提取物对三阴性乳腺癌CSCs增殖有抑制作用,为中药抗乳腺癌的研究提供了新思路。

洛伐他汀靶向三阴性乳腺癌干细胞的作用和机制研究

女性乳腺癌已超过肺癌成为全球发病率首位的癌症,虽然乳腺癌总体治愈率较高,但是晚期转移性乳腺癌,特别是三阴性乳腺癌(TNBC)的治疗仍然非常困难.有研究表明,洛伐他汀(LV)能够降低乳腺癌的死亡风险,但LV在治疗TNBC中的作用及其机制尚不明确.

三阴性乳腺癌干细胞的富集及CD44+CD24-/low、CXCR4表达测定

目的:探讨MDA-MB-231细胞经无血清培养富集三阴性乳腺癌干细胞,观察再成球、集落形成及CD44+CD24-/low、CXCR4表达。方法:将MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养,取培养第7-9天的微球体,判断干细胞富集的程度;比较不同细胞浓度对癌球细胞成球率影响;流式细胞仪测定CD44+CD24-/low含量;Western blot法分析CXCR4蛋白表达;单个癌球细胞再成球能力;观察癌球与贴壁细胞集落形成。结果:1).在含20 ng/m L EGF,10 ng/m L b FGF,2%b27无血清培养基中可培养三阴性乳腺癌癌球,1×104/m L、2×104/m L、3×104/m L、4×104/m L、5×104/m L细胞浓度癌球细胞成球率分别为(5.61±0.02)%、(3.23±0.54)%、(2.28±0.48)%、(1.05±0.13)%、(0.91±0.01)%,组间比较差异有统计学意义P值均<0.05。2).贴壁MDA-MB-231细胞与癌球细胞CD44+CD24-/low含量分别为(38.54±2.00)%VS(66.35±2.06)%,差异有统计学意义P=0.003。3).癌球细胞CXCR4蛋白表达高于贴壁MDA-MB-231细胞,灰度扫描分析差异有统计学意义,P=0.03。4).单个癌球细胞具有再成球能力。5).软琼脂糖集落形成能力癌球需200个细胞即可见集落形成,而贴壁细胞需1 000个MDA-MB-231细胞。结论:1.通过无血清培养可以富集三阴性乳腺癌干细胞,低细胞密度有利于癌球形成。2.癌球中CD44+CD24-/low含量高于贴壁MDA-MB-231细胞。3.CXCR4在癌球中表达高于贴壁MDA-MB-231细胞。

基于网络药理学探讨复康灵治疗三阴性乳腺癌的作用机制

目的:运用网络药理学方法筛选中药复方复康灵的活性成分以及作用于三阴性乳腺癌干细胞的靶点和通路,探讨其分子机制。方法:通过TCMSP数据库、TCMID数据库和BATMAN-TCM数据库筛选出复康灵活性成分及其相关靶标;通过GeneCards数据库和GEO数据库收集疾病相关基因,并做交集筛选目标基因;运用String数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络;采用DAVID数据库对复康灵关键作用靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。结果:通过筛选得到复康灵有效成分108个和对应的靶基因446个,与三阴性乳腺癌干细胞的交集基因为49个;GO分析结果显示复康灵活性成分的基因功能主要表现在信号调控、细胞刺激反应、氧化应激反应、细胞凋亡、炎症反应以及对细胞因子刺激的反应等生物过程中,其抗三阴性乳腺癌的复发和转移的作用主要是通过调控细胞增殖、迁移等生物过程;KEGG分析结果显示其主要通过调控肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、肿瘤通路、表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂耐药等发挥治疗作用。结论:预测了复康灵对三阴性乳腺癌干细胞的作用靶点、物质基础和分子机制,以及复康灵对三阴性乳腺癌转移的分子机制。