miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇药物敏感性中的作用

目的研究miR-574-3p在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇(PTX)药物敏感性中的作用。方法构建稳定转染细胞株,根据细胞转染情况分为未转染组、miR-阴性对照(miR-NC)组和miR-574-3p过表达组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测不同浓度紫杉醇作用下细胞增殖情况(未转染组设置亚组:空白组和对照组),实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测色素框同源物2(CBX2)mRNA的表达水平,Western blot法检测CBX2蛋白的表达水平,Transwell检测细胞侵袭迁移力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果CCK-8法检测结果显示,紫杉醇对各组三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制呈一定的浓度依赖性,但不同浓度紫杉醇(0.05、0.15、0.45、1.35、4.05、8.10μmol/L)作用下,miR-574-3p过表达组生长抑制作用均高于对照组与miR-NC组(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2 mRNA表达水平低于未转染组和miR-NC组(P<0.05);Western blot结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞中CBX2蛋白表达水平低于未转染组和miRNC组(P<0.05);Transwell检测及划痕实验检测结果显示,2.10μmol/L紫杉醇作用下,miR-574-3p过表达组细胞侵袭迁移能力低于未转染组和miR-NC组(P均<0.05)。结论miR-574-3p可能通过下调CBX2增强三阴性乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性,抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭迁移能力。

追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制

目的基于糖基转移酶β3GnT8探讨追毒方逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药的作用机制。方法通过MTT法观察追毒方对MDA-MB-231耐药细胞增殖的抑制作用,通过转染β3GnT8得到高表达β3GnT8的MDA-MB-231/TAX细胞株,采用Western blot观察糖基转移酶β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,通过凝集素流式细胞术观察转染β3GnT8MDA-MB-231/TAX细胞膜表面β3GnT8的荧光强度。结果追毒方有效成分能明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231耐药细胞的增殖,作用72h抑制率达到50.16%,能有效下调β3GnT8和耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,并且β3GnT8的表达与BCRP、P-gp呈正相关。结论追毒方可通过下调糖基转移酶β3GnT8,从而降低耐药蛋白BCRP、P-gp的表达,逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性。

追毒方调控c-JUN抑制糖基化异常逆转三阴性乳腺癌耐药的机制

目的从c-JUN调控的糖基化角度探究追毒方逆转三阴性乳腺癌(TNBC)耐药的机制。方法MTT检测细胞增殖,采用Western blot检测c-JUN、β3GnT8和ppGalNAc-T1/2、CD147、耐药蛋白BCRP和MDR1的表达。采用转染c-JUN质粒建立过表达c-JUN的MDA-MB-231/ADR细胞。体内实验采用耐药TNBC原位移植裸鼠模型。结果追毒方可显著抑制MDA-MB-231/ADR细胞的增殖(P<0.01),具有时效和量效关系;可明显抑制耐药TNBC原位移植裸鼠的肿瘤质量(P<0.01);降低耐药蛋白BCRP和MDR1表达(P<0.01),并同时明显降低c-JUN、β3GnT8和ppGalNAc-T1/2、CD147蛋白的表达(P<0.05)。过表达c-JUN后,与空白质粒对照组比较,β3GnT8、ppGalNAc T1/2、CD147、BCRP和MDR1的表达均显示增加(P<0.05,P<0.01)。而空白质粒对上述蛋白的表达无影响。追毒方可以显著降低过表达c-JUN后的上述蛋白的表达,但其表达水平还是显著高于空白质粒加药组(P<0.05,P<0.01)。结论追毒方通过作用于调控因子c-JUN,下调β3GnT8和ppGalNAc-T1/2的激活,从而抑制CD147的糖基化修饰,导致耐药蛋白BCRP和MDR1下调而逆转TNBC耐药。

薯蓣丸联合紫杉醇抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231上皮间质转化作用和机制研究

目的:探究薯蓣丸联合紫杉醇抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)的作用和机制。方法:运用血清药理学方法制备SD大鼠空白血清和薯蓣丸含药血清,体外培养MDA-MB-231细胞。实验将其分组为空白组、紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组三组。运用CCK8实验检测MDA-MB-231细胞的增殖情况;Transwell小室实验法检测细胞的侵袭、迁移能力变化;Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MMP2和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达;RT-qPCR检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MMP2 mRNA的表达。结果:与空白组相比,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组可显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移(P<0.01);与紫杉醇组相比,薯蓣丸联合紫杉醇组对细胞增殖、侵袭和迁移的抑制能力增强(P<0.01)。与空白组相比,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组细胞中E-cadherin蛋白表达上调,PI3K、Akt、mTOR、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01);与紫杉醇组相比,薯蓣丸联合紫杉醇组细胞中E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin、MMP2、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,紫杉醇组和薯蓣丸联合紫杉醇组均能上调E-cadherin,下调Vimentin、MMP2 mRNA的表达(P<0.01);与紫杉醇组比较,薯蓣丸联合紫杉醇组上调E-cadherin,下调N-cadherin、MMP2 mRNA表达能力增强(P<0.05,P<0.01)。结论:薯蓣丸联合紫杉醇可有效抑制三阴性乳腺癌细胞的侵袭、迁移和EMT进程,且效果优于紫杉醇单用,其机制可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路受抑制相关。

甘草查尔酮B对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制

目的:探讨甘草查尔酮B(LCB)对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞的抑制作用及其机制。方法:常规培养MDA-MB-231细胞,用不同浓度LCB处理后,采用CCK-8法、免疫荧光法、FCM和WB法分别检测MDA-MB-231细胞的增殖活力、细胞核内DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达,以及细胞周期和周期调控、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、内质网应激信号途径相关蛋白的表达水平。结果:LCB能显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活力(P<0.05),使γ-H2AX阳性细胞数和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)、G2/M和S期的细胞数量均明显增加(均P<0.05)、MAPK家族主要成员细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)和p38MAPK蛋白的磷酸化水平均显著上调(均P<0.05),还使内质网应激途径相关蛋白Bip、ATF4和CHOP的表达均显著上调(均P<0.05)。结论:LCB能够显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖活力、诱导DNA损伤和细胞周期阻滞于G2/M和S期,LCB对MDA-MB-231细胞的抑制作用可能与其激活MAPK和内质网应激信号通路相关。

用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

目的构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系以建立可用于活体成像的三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,体外感染MDA-MB-231细胞,经G418筛选得到稳定细胞系后,通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况,并通过MTT法、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变;此外将细胞接种至雌性BALB/c-nu//nu裸小鼠的右侧第2对乳房垫内,构建乳腺癌原位肿瘤模型。利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况,并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力。结果成功构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的MDA-MB-231细胞系,荧光素酶的活性达到每细胞9689 photons/s,慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力;成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型。结论(1)慢病毒以其高效稳定的感染率,应作为标记荧光素酶基因的首选载体;(2)带有荧光素酶的MDA-MB-231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,这将为人三阴性乳腺癌转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台;(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记。

蓝萼甲素通过PI3K/Akt信号通路诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的研究蓝萼甲素(GLA)诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法 MTT实验检测GLA对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435s,正常乳腺上皮细胞MCF-10a的增殖抑制活性;倒置显微镜观察GLA对MDA-MB-231细胞的形态的影响;Annexin V/PI双标记流式细胞术检测GLA诱导MDA-MB-231细胞凋亡;qRT-PCR检测GLA干预后,细胞中Bax、Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平变化;Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达水平变化。结果 GLA呈剂量依赖性抑制MDA-MB-231和MDA-MB-435s细胞生长,IC50分别为5.11、6.32μmol·L^-1;GLA作用MDA-MB-231细胞48 h后,贴壁细胞间隙增大,形态变圆;GLA可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,8μmol·L^-1 GLA作用48 h细胞凋亡率达到61.65%;qRT-PCR和Western blot结果显示,GLA下调MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bcl-xl mRNA和蛋白质水平,上调Bax mRNA和蛋白质水平,下调p-PI3K,p-Akt蛋白水平,PI3K,Akt蛋白水平基本不变。结论 GLA在一定浓度范围内可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导MDA-MB-231细胞凋亡。

FANCF在三阴性乳腺癌细胞紫杉醇耐药中的作用及其机制

目的:建立三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞株并考察FA/BRCA通路相关基因FANCF在该细胞株紫衫醇耐药中的作用。方法:以药物浓度递增法诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231成为紫杉醇耐药细胞株,采用CCK8法检测细胞的耐药指数,流式细胞术检测细胞的生长周期,qRT-PCR检测FA/BRCA通路相关基因FANCF的表达;Western blotting法验证相关蛋白的表达。对MDA-MB-231敏感细胞和紫杉醇耐药细胞中FANCF的表达进行敲减,并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证,以CCK8法检测紫杉醇对该两种细胞的IC_(50)。结果:MDA-MB-231细胞紫杉醇诱导3个月后的耐药指数为9.9,该细胞的G0/G1期细胞增多且S期细胞减少,细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高。FANCF敲低后无论MDA-MB-231还是MDA-MB-231/PTX细胞的凋亡增加,对紫杉醇敏感性显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:FANCF基因在乳腺癌紫杉醇耐药中具有重要作用,可能是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。

比卡鲁胺对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响

目的探讨比卡鲁胺对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其可能的机制。方法0、25、50、100μmol/L比卡鲁胺处理人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞的抑制率;流式细胞仪检测比卡鲁胺对MDA-MB-231细胞作用后凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果不同浓度(25、50、100μmol/L)比卡鲁胺处理后,MDA-MB-231细胞增殖能力明显下降,且存在时间、剂量依赖关系。比卡鲁胺可以明显地增加细胞凋亡,细胞周期表现为G0/G1期阻滞(P<0.05)。结论比卡鲁胺可能通过诱导细胞凋亡及抑制细胞周期的机制从而对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖产生抑制作用。

蛇六谷对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和侵袭的影响

蛇六谷,又名魔芋,是治疗肿瘤的特色药材之一。名老中医陆德铭教授在乳腺癌术后的治疗中善用蛇六谷配伍抗肿瘤药物,起到化痰软坚、散结解毒作用。为此,本实验采用蛇六谷含药血清,作用于三阴性乳腺癌MDAMB-231细胞,观察蛇六谷对MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭的影响,为临床中药治疗乳腺癌提供实验依据。

探讨Rab27蛋白家族在三阴性乳腺癌细胞耐药机制中的作用

背景三阴性乳腺癌由于分子表达模式的原因只能使用化疗和免疫治疗,但许多患者因为多药耐药的出现导致化疗失败。Rab27家族与外泌体的释放密切相关,目前已知大部分增强化疗药物外排的机制均由外泌体介导,但该家族两个成员Rab27a和Rab27b在三阴性乳腺癌细胞多药耐药过程中的具体作用尚不明确。目的本研究通过抑制Rab27蛋白家族的表达,探究其在三阴性乳腺癌细胞耐药过程中发挥的具体作用及分子机制。方法采用siRNA抑制三阴性乳腺癌细胞中Rab27a和Rab27b的表达后,蛋白印迹法检测外泌体的分泌情况。检测Rab27a和Rab27b分别被抑制后在不同浓度顺铂、阿霉素和紫杉醇处理下的细胞活力,随后分别检测三种药物处理下抑制Rab27家族后肿瘤细胞的凋亡与坏死情况。最后检测分别抑制Rab27a和Rab27b的三阴性乳腺癌细胞耐药相关基因的表达情况。结果抑制三阴性乳腺癌细胞Rab27a的表达后,外泌体分泌显著下调,抑制Rab27b的表达对外泌体分泌无显著影响。抑制Rab27a和抑制Rab27b均会降低三阴性乳腺癌细胞对顺铂、阿霉素和紫杉醇的耐受程度,提高肿瘤细胞在这几种药物处理下的细胞凋亡率,降低耐药相关基因IL-6、EGR1、ABCC3和ABCC6的表达,抑制Rab27b对肿瘤细胞耐药产生的影响明显强于抑制Rab27a。结论 Rab27家族与三阴性乳腺癌细胞耐药密切相关,Rab27a可能通过直接影响外泌体的分泌参与耐药机制。Rab27b与Rab27a的分子机制不同,它可能通过调控其他耐药相关基因的表达从而参与三阴性乳腺癌细胞的耐药机制。

莱菔素通过阻断STAT3信号通路杀伤三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468和MDA-MA-231

目的:探讨染色体区域维持因子1(CRM1)抑制剂莱菔素(LFS-01)通过抑制信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路杀伤三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的作用及其机制。方法:通过分子动力学模拟技术,验证LFS-01是否可与CRM1分子结构上的核输出信号(NES)口袋结合。通过CCK-8法检测LFS-01对4种不同的乳腺癌细胞杀伤活力。用不同浓度的LFS-01处理TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231,免疫荧光法检测CRM1货物蛋白STAT3以及带有NES序列的蛋白在细胞内定位的变化;WB检测LFS-01对STAT-3信号通路以及其下游蛋白表达的影响;WB、细胞免疫荧光和透射电镜法检测自噬的发生;通过流式细胞术检测药物对细胞周期和凋亡的影响。结果:分子动力学模拟结果表明,LFS-01能够与CRM1的NES口袋结合,显示其在结构上影响后者蛋白转运功能的可能性。LFS-01能特异性杀伤TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231。10μmol/L LFS-01处理后TNBC细胞中STAT3和带有NES标签的蛋白均被阻滞于细胞核中,而在对照组中这些蛋白均匀分布在细胞质中。随着LFS-01剂量的提高和处理时间的延长,MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞中磷酸化STAT3蛋白、Bcl-xL和Cylin D1表达均降低,细胞内自噬标志蛋白LC3B表达上升;同时出现高密度、多层的团状自噬小体;细胞周期阻滞于S期,并且凋亡率显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:LFS-01可阻断CRM1运载蛋白出核、进而抑制STAT3信号通路的激活,从而促进TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231发生自噬、细胞周期阻滞和凋亡。

双硫仑联合顺铂对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:观察双硫仑(DSF)和顺铂(CDDP)联合使用对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,并探讨其可能机制。方法:将MDA-MB-231细胞分为空白对照组、2μmol·L-1 DSF组、60μmol·L-1 CDDP组和联合组(60μmol·L-1CDDP+1、2和4μmol·L-1DSF)。MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的存活率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞中活性氧(ROS)水平;电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测各组MDA-MB-231细胞中铂(Pt)水平。结果:MTT法和流式细胞术检测,作用72 h后,与60μmol·L-1 CDDP组比较,联合1组(60μmol·L-1CDDP+1μmol·L-1DSF)、联合2组(60μmol·L-1CDDP+2μmol·L-1DSF)和联合3组(60μmol·L-1CDDP+4μmol·L-1 DSF)MDA-MB-231细胞存活率降低(P<0.05)。作用24 h后,与60μmol·L-1 CDDP组和2μmol·L-1 DSF组比较,联合组(60μmol·L-1CDDP+2μmol·L-1 DSF)MDA-MB-231细胞凋亡率升高(P<0.05)。流式细胞术检测,与CDDP组比较,联合组(60μmol·L-1CDDP+2μmol·L-1 DSF)MDA-MB-231细胞中ROS水平升高(P<0.05)。ICP-MS检测,与CDDP组比较,联合组(20μmol·L-1CDDP+0.625μmol·L-1 DSF)TNBC MDA-MB-231细胞中Pt水平升高(P<0.05)。结论:DSF与CDDP联合使用能明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖,其可能机制是通过提高MDA-MB-231细胞中ROS水平和Pt水平抑制肿瘤细胞生长。

香附烯酮与卡铂联合应用对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察香附烯酮与卡铂联合应用对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将MDA-MB-231细胞分为单纯细胞组、卡铂处理组、香附烯酮处理组、香附烯酮联合卡铂组,单纯细胞组加入DMSO,卡铂处理组加入20μmol/L浓度的卡铂,香附烯酮处理组加入0.4 mmol/L浓度的香附烯酮,香附烯酮联合卡铂组加入20μmol/L浓度的卡铂和0.4 mmol/L浓度的香附烯酮。采用CCK-8法测算各组细胞存活率。采用细胞克隆实验观察各组细胞克隆能力,以细胞集落数表示。采用流式细胞术观察各组细胞周期分布情况和细胞凋亡率。采用Western Blotting法检测各组细胞内质网应激相关蛋白PERK、CHOP和凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2。结果卡铂处理组、香附烯酮处理组细胞存活率低于单纯细胞组,而香附烯酮联合卡铂组细胞存活率低于其他三组(P均<0.05)。单纯细胞组、卡铂处理组、香附烯酮处理组、香附烯酮联合卡铂组细胞集落数分别为(328±18)、(204±10)、(138±13)、(47±5)个,组间相比,P均<0.05。卡铂处理组将MDA-MB-231细胞周期阻滞在G2/M期,香附烯酮处理组将MDA-MB-231细胞周期阻滞在G0/G1期,香附烯酮联合卡铂组细胞G2/M期和G0/G1期均发生阻滞。卡铂处理组、香附烯酮处理组细胞凋亡率高于单纯细胞组,而香附烯酮联合卡铂组细胞凋亡率高于其他三组(P均<0.05)。与单纯细胞组相比,卡铂处理组、香附烯酮处理组细胞中PERK、CHOP、Bax蛋白相对表达量显著升高,Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P均<0.05);与其他三组相比,香附烯酮联合卡铂组细胞中PERK、CHOP、Bax蛋白相对表达量均显著升高,Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低(P均<0.05)。结论香附烯酮与卡铂联合应用可抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调节内质网应激介导的细胞凋亡途径有关。

鞣花酸对BRCA1沉默的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的探讨鞣花酸(ellagic acid,EA)对乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)沉默的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及可能的作用机制。方法采用不同浓度EA(0μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL和20μg/mL)分别作用MDA-MB-231细胞24 h、48 h和72 h后,用MTT法检测细胞增殖能力,并分别计算其IC50,筛选最佳药物浓度。将BRCA1 siRNA转染MDA-MB-231细胞,以终浓度为5μg/mL的EA作用0 h、24 h、48 h、72 h、96 h,采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,RT-qPCR和Western blot检测PARP1 mRNA和蛋白的表达情况。结果不同浓度EA作用MDA-MB-231细胞24 h、48 h和72 h后均能抑制细胞增殖,IC50分别为13.739μg/mL、10.645μg/mL、5.344μg/mL。EA作用48 h、72 h和96 h后,siRNA+EA组的OD值均明显小于对照组、EA组和阴性对照组(P<0.001)。siRNA+EA组细胞的迁移率及穿膜细胞数均较其他3组低(P<0.001),且PARP1 mRNA和蛋白表达量亦均较低(P<0.001)。结论EA可抑制BRCA1沉默的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制DNA修复通路关键因子PARP1表达有关。

肿瘤干细胞在三阴性乳腺癌治疗耐药中的作用及机制研究进展

三阴性乳腺癌(TNBC)是雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)蛋白均呈阴性的临床亚型,占所有乳腺癌病例的15%~20%。与其他亚型相比,TNBC更具侵袭性,其预后差、复发转移率和病死率高。一直以来,TNBC的治疗面临着巨大的挑战,由于治疗靶点的缺乏,细胞毒性化疗是唯一被批准用于TNBC的全身治疗方案。为了改善TNBC患者的疗效,研究者们开展了大量的临床试验来探索更多有效的治疗手段。乳腺癌干细胞(BCSC)的自我更新分化是乳腺癌发生发展的重要机制,能够调控乳腺癌的侵袭转移和治疗抵抗,TNBC中肿瘤干细胞(CSC)比例的升高与化疗耐药和不良预后相关。本综述阐述了TNBC的治疗现状以及CSC在TNBC的发生发展、治疗耐药中的作用机制,探讨了CSC及相关信号因子作为TNBC治疗靶点的潜在价值。

精氨白桦脂酸的制备及其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:制备精氨白桦脂酸,并考察其对三阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。方法:以精氨酸为增溶载体,采用共研磨法将等摩尔比的白桦脂酸与精氨酸制成精氨白桦脂酸。采用粉末X射线衍射法、红外光谱法、差示扫描量热法对精氨白桦脂酸进行表征;比较白桦脂酸和精氨白桦脂酸的溶解度;采用MTT法检测15、30、60、120μg/mL的白桦脂酸、精氨白桦脂酸和5氟尿嘧啶(5-FU)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果:所制精氨白桦脂酸为不同于精氨酸与白桦脂酸物理叠加的新的物相,其中白桦脂酸的羧基与精氨酸中氨基进行了成盐反应,其未见明显的熔点峰。白桦脂酸几乎不溶于水,精氨白桦脂酸水溶液中白桦脂酸的溶解度为50.72μg/mL。与白桦脂酸比较,精氨白桦脂酸对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率明显升高(P<0.05),且与5-FU比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功制得溶解度较好的精氨白桦脂酸,其对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用。

miR-200c通过靶向细胞能量代谢和多种信号通路调控三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为

目的:考察miR-200c对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞MDA-MB-231的增殖、凋亡和迁移的影响及其代谢相关的分子机制。方法:以过表达miR-200c的MDA-MB-231(miR-200c-231)细胞、无过表达miR-200c的阴性对照细胞miR-NC-231及其移植瘤裸鼠模型为研究对象,qPCR检测细胞和移植瘤组织中miR-200c及其他相关基因的表达水平,免疫组化技术分析瘤组织中Ki67阳性细胞数量,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blotting检测细胞及组织中增殖、迁移和代谢相关信号通路多种蛋白的表达,Seahorse能量代谢检测仪检测细胞的基础耗氧率(oxygen comsumpition rate,OCR)、细胞外酸度(extracellular acidification rate,ECAR)和代谢表型变化,液相质谱联用技术检测细胞中代谢产物的变化。结果:miR-200c-231细胞及其移植瘤组织中miR-200c表达较miR-NC-231细胞显著增加(P<0.05或P<0.01),miR-200c-231移植瘤质量和体积均显著下降、瘤组织中Ki67阳性细胞数明显减少(P<0.01),miR-200c-231细胞的迁移能力下降、细胞凋亡率提高(均P<0.01)。同时伴随着ZEB1/2、Vimentin、cyclinD1的表达下调及cleaved PARP表达的提高(P<0.05或P<0.01),STAT1/3和NF-κB的磷酸化水平降低(均P<0.05)而cAMP通路蛋白的磷酸化水平提高(P<0.05)。miR-200c-231细胞的OCR提高和ECAR降低、色氨酸2,3-加二氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase 2,TDO2)表达下降(P<0.05或P<0.01),细胞内10种抗肿瘤代谢物质含量提高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-200c靶向TDO2调控TNBC细胞MDA-MB-231胞内抗肿瘤代谢产物水平、促使细胞代谢类型由依赖糖酵解为主向有氧呼吸类型转化,并失活STAT3和NF-κB通路而激活c AMP通路,从而影响MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为。

基于蛋白质组学技术探讨麻疹减毒活疫苗191株抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的可能机制

目的:基于蛋白质组学技术探讨麻疹减毒活疫苗191株(MV-Hu191)在体内外对三阴性乳腺癌MDA-MB-231、4T1细胞的影响及其作用机制。方法:采用CCK-8法检测MV-Hu191对MDA-MB-231和4T1细胞增殖的影响;液相色谱-质谱联用技术分析MV-Hu191处理对MDA-MB-231细胞中蛋白质谱的影响,多重数据库筛选蛋白质谱中的典型差异蛋白质并进行GO、KEGG、亚细胞定位与功能注释。瘤内注射1×106 TCID50 MV-Hu191干预4T1细胞移植瘤模型小鼠,流式细胞术检测小鼠脾组织中T细胞亚群,ELISA法检测小鼠血清TNF-α和IL-6含量。结果:体外实验结果表明,MV-Hu191具有抑制MDA-MB-231和4T1细胞增殖的作用,差异均具有统计学意义(P<0.01)。蛋白质组学分析结果显示,MV-Hu191作用MDA-MB-231细胞后明显上调蛋白质有38个、下调有12个;差异表达的蛋白质主要参与细胞黏附、信号受体激活、细胞代谢、应激反应等生物学过程,22个差异蛋白质亚细胞定位位于细胞外,KEGG功能分类显示与免疫调节功能相关的差异蛋白质最多且均为上调蛋白,包括C4A、C8B、SERPINF2、A2M、SERPINC1、CTSB、SERPING1、C5;PPI预测发现免疫相关差异蛋白与CD4、CD8、TNF-α及IL-6相互关联。体内实验结果显示,MV-Hu191干预组小鼠脾组织中CD4+T细胞数量略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组(P<0.05),血清TNF-α和IL-6含量显著上升(均P<0.01)。结论:MV-Hu191显著抑制MDA-MB-231、4T1细胞增殖及拮抗4T1细胞荷瘤小鼠成瘤性,其机制可能是MV-Hu191通过激活免疫效应分子实现抗肿瘤作用。

飞燕草素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解的影响

目的:探讨飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢的影响。方法:以不同浓度的飞燕草素作用MDAMB-231细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫组化染色检测Ki67表达,划痕试验检测细胞的迁移能力;葡萄糖摄取、乳糖和三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒检测MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取、乳糖和ATP的生成,己糖激酶(HK)活性试剂盒检测HK活性;蛋白质印迹法检测HK、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2-型丙酮酸激酶2(PKM2)表达。结果:飞燕草素能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,20和40μmol/L飞燕草素能分别降低细胞存活率至75%和72%(P<0.05);20、40μmol/L飞燕草素能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Ki67表达阳性的细胞数量,差异有统计学意义(P<0.01);飞燕草素能降低乳腺癌细胞葡萄糖的摄取,降低细胞乳糖和ATP的生成,抑制PKM2、HK和LDHA蛋白的表达,降低p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论:飞燕草素能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢,抑制Akt/mTOR通路活性可能是飞燕草素抑制乳腺癌细胞糖酵解的机制。